核糖体蛋白S6激酶1抑制剂对气道上皮干/祖细胞 增殖及分化功能的影响

李敏敏 1,李宽 1,2,孙昕 1,2,吴琦 1,2,陈怀永 摘要：目的 研究mTOR信号通路下游元件核糖体蛋白S6激酶1（S6K1）抑制剂PF-4708671对气道干/祖细胞增 殖与分化功能的影响。方法 准备10只C57BL/6小鼠,采用流式细胞分选技术将气道干细胞（vClub）和气道祖细胞 （Club）从小鼠气道分选出来;采用类器官培养技术分别把vClub细胞、Club细胞和成纤维细胞（MLg）混合培养。细胞 设0、4、20、100 nmol/L PF-4708671处理组,培养第8天时显微镜下观察克隆生长情况,统计克隆形成数量;第10天时 荧光定量PCR检测S6K1激酶基因Rps6kb1、Club细胞标志物细胞色素氧化酶（Cyp2f2）、纤毛细胞标志物乙酰化微管 蛋白（Act）和叉头框转录因子J1（Fox j1）,杯状细胞标志物氯化物通道钙活化家族成员3（Clca3）叉头框转录因子a3 （Foxa3）的mRNA表达情况。结果 不同浓度的PF-4708671对vClub细胞克隆数量无明显影响（P＞0.05）,而4、20、 100 nmol/L PF-4708671浓度组Club细胞克隆数量均较0 nmol/L组减少（P＜0.05）。不同浓度的PF-4708671对vClub 向Club细胞的分化无明显影响,其特征分子Cyp2f2在mRNA表达水平差异方面无统计学意义。PF-4708671对Club 细胞向纤毛细胞和杯状细胞的分化能力均无明显影响,4组间2种细胞的标志物Act、Fox j1及Clca3、Foxa3表达水平 差异均无统计学意义（P＞0.05）。结论 mTOR/S6K1信号通路对小鼠气道干/祖细胞的增殖功能呈正调控作用,对其 分化功能影响甚微。     

不同注射法对手部辐射剂量的影响

目的 探讨一种降低手部辐射吸收剂量的显像剂注射方法。方法 对冷穿刺注射法与直接穿刺注射法进行对比,分别测量计算手部接触放射性核素显像剂注射器的时间,注射后注射器残余药量,能否充分利用屏蔽防护,注射点图像伪影情况等。结果 冷穿刺注射法能明显提高穿刺成功率,明显缩短手部接触放射性核素显像剂注射器的时间,减少了注射后注射器放射性核素显像剂残余量,图像伪影减少,图像质量明显提高。结论 冷穿刺注射法有利于操作人员手部辐射防护。     

基于特征图谱与5种成分含量的经典名方桃红四物汤量值传递分析

目的 探索桃红四物汤(Taohong Siwu Decoction,TSD)药材-饮片-水煎液-基准样品的全过程质量传递规律,为其经典名方制剂质量控制研究提供基础。方法 制备15批TSD水煎液、基准样品,建立水煎液、基准样品超高效液相色谱(ultraperformanceliquidchromatography,UPLC)特征图谱,并采用高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)法测定5种指标性成分的含量,计算各成分在药材-饮片-水煎液-基准样品传递过程中的转移率。结果 15批TSD水煎液和基准样品的特征图谱,相似度均>0.9,共归属20个共有峰,经与对照品比对指认出11个色谱峰,分别为没食子酸、地黄苷D、苦杏仁苷、绿原酸、芍药苷、羟基红花黄色素A、阿魏酸、毛蕊花糖苷、槲皮素、苯甲酰芍药苷、藁本内酯。5种成分在水煎液、基准样品中的质量分数分别为地黄苷D0.26~0.46、0.11~0.30mg/g,阿魏酸0.33~0.51、0.09~0.18mg/g,芍药苷1.07~2.43、0.48~1.49mg/g,苦杏仁苷1.66~2.31、0.60~1.58mg/g,羟基红花黄色素A0.98、0.26~0.44mg/g。药材至饮片、饮片至水煎液、水煎液至基准样品的平均转移率分别为地黄苷D101.50%、55.44%、64.11%;阿魏酸94.31%(当归药材至饮片)、93.91%(川芎药材至饮片)、37.24%、35.61%;芍药苷111.55%、72.80%、63.48%;苦杏仁苷117.34%、91.78%、64.60%;羟基红花黄色素A93.64%、60.23%、34.19%。结论 采用UPLC特征图谱结合5种成分的HPLC含量测定,分析TSD药材-饮片-水煎液-基准样品的量值传递规律,为TSD经典名方制剂开发和质量控制提供科学基础。     

基于Box-Behnken设计-响应面法与质量综合评价优化经典名方桃红四物汤煎煮工艺

目的 遵古优化和科学评价桃红四物汤（Taohong Siwu Decoction,TSD）的煎煮工艺,为其经典名方中药复方制剂研究奠定基础。方法 以指纹图谱概貌结合多指标定量为综合评价,采用Box-Behnken设计-响应面设计对加水量、浸泡时间、煎煮时间、煎煮次数进行优化。指纹图谱研究采用SunFire-C₁₈色谱柱（150 mm×3.0 mm,3.5 μm）,流动相为乙腈-0.5%磷酸水溶液,体积流量为0.2 mL/min,柱温为25℃,检测波长为230 nm;建立HPLC指纹图谱,对色谱信息进行主成分分析,进一步建立UPLC多波长检测方法测定6个关键质控成分含量,计算各样品综合得分,通过响应面法进行工艺优化。结果 建立了29个试验号TSD UPLC指纹图谱,选择16个共有峰,指认出地黄苷D、苦杏仁苷、羟基红花黄色素A、芍药苷、阿魏酸、藁本内酯共6个成分。主成分分析提取出4个主成分,综合得分结果显示15号工艺为最佳工艺。含量测定显示,地黄苷D、苦杏仁苷、芍药苷、阿魏酸、藁本内酯、羟基红花黄色素A 6种成分线性关系良好,综合得分结果显示,15号工艺为最佳工艺。进一步根据回归模型拟合,得到最优工艺为加水量9.90倍、浸泡时间0.58 h、煎煮时间1.19 h、煎煮次数1.60次,最终确定TSD煎煮工艺为加10倍量水,浸泡0.5 h,煎煮2次,每次1 h。结论 指纹图谱质量概貌结合关键质控成分可作为TSD制备工艺的质量评控方法,得出的最佳煎煮工艺稳定可行,可用于经典名方TSD复方制剂进一步研究开发。     

NOL8对口腔鳞状细胞癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响

背景与目的：口腔鳞状细胞癌（oral squamous cell carcinoma,OSCC）是头颈部鳞状细胞癌中最普遍的亚型,其发病机制尚不清楚。核仁蛋白8(nucleolar protein 8,NOL8)作为RNA结合蛋白（RNA-binding protein,RBP）,在多种肿瘤的发生、发展中发挥关键作用,但其在OSCC中的作用尚不清楚,本研究旨在探讨NOL8在OSCC中的表达水平,并研究其对OSCC细胞增殖、迁移、侵袭和上皮-间充质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）的影响。方法：利用基因表达谱交互分析2(gene expression profiling interactive analysis 2,GEPIA2)、肿瘤免疫评估资源（tumor immune estimation resource,TIMER）、阿拉巴马大学伯明翰分校癌症数据分析（the University of Alabama at Birmingham cancer data analysis portal,UALCAN）及RNA相互作用数据库（the...     

育龄妇女孕早期患病与新生儿先天性心脏病的关联

目的 探讨育龄妇女孕早期患病与新生儿先天性心脏病之间的关联。方法 采用分层多阶段随机抽样方法,以问卷调查方式收集2010－2013年陕西省怀孕且结局明确的育龄妇女及其子女的相关信息。应用倾向值匹配法,对孕早期患病组和未患病组育龄妇女进行1 ∶ 1匹配。以是否生育先天性心脏病患儿为因变量,以母亲孕早期是否患病为自变量,通过逐步校正混杂因素建立logistic回归模型。结果 共纳入28 680对母亲及新生儿,孕早期患病者5 807人（20.25%）。匹配后孕早期患病组和未患病组分别为5 436人。在控制混杂因素后,母亲孕早期患病可增加新生儿先天性心脏病的发病风险（OR=1.86,95% CI：1.23～2.81）,孕早期患感冒（OR=2.19,95% CI：1.46～3.28）、妇科疾病（OR=4.74,95% CI：2.03～11.09）和糖尿病（OR=14.00,95% CI：1.64～119.21）是生育先天性心脏病患儿的危险因素。结论 育龄妇女孕早期患感冒、妇科疾病和糖尿病与子代发生先天性心脏病有关。     

蛇床子素的抗炎作用及其机制

目的研究蛇床子素的抗炎作用及其分子机制。方法用LPS刺激小鼠单核巨噬细胞RAW 264.7释放TNF-α、IL-6、NO等炎症介质,评价药物对巨噬细胞释放炎症介质的抑制作用。以ELISA法检测TNF-α、IL-6的含量,以Griess法检测NO的含量,同时以MTT法评价细胞毒性。Western blot法检测iNOS、COX-2及内参蛋白β-actin水平。比色法检测COX-2酶活性。结果蛇床子素在12.5～100μmol.L-1浓度范围内可明显抑制LPS诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7释放炎症介质TNF-α、IL-6、NO,并呈现良好的剂量依赖关系。Western blot结果表明蛇床子素能够明显下调iN-OS和COX-2蛋白表达水平。比色法测定酶活性结果提示蛇床子素对COX-2酶活性无明显抑制作用。结论蛇床子素通过下调iNOS和COX-2蛋白表达水平,能明显抑制巨噬细胞释放炎症因子TNF-α、IL-6和炎症介质NO,这可以为蛇床子素以及相关制剂的临床应用提供一定的理论依据。     

儿童非HIV型肺孢子菌肺炎8例临床分析

目的提高对儿童非HIV型肺孢子菌肺炎认识,以期早期预防、诊断、治疗及提高疗效。方法回顾近3年共8例儿童非HIV型肺孢子菌肺炎的临床诊治经过,并进行相关文献复习。结果8例患儿中有7例为小于1岁婴儿(中位数月龄:4月),1例为3岁肾病综合症患儿;男女比例为5:3;发病前有使用糖皮质激素类药物史6例;8例患儿均通过肺泡灌洗液病原学高通量基因检测查出为耶氏肺孢子菌感染;症状分析为发热5例,气促5例,肺部湿啰音6例,喘鸣音1例;呼吸困难需呼吸机通气4例;病程大于1月者8例;肺部影像学提示斑片状渗出6例,伴有胸腔积液、气胸、肺实变者各2例,肺不张者1例;伴有动脉血氧分压下降5例;8例患儿均血生化检查乳酸脱氢酶升高大于350 U/L,平均值1214 U/L;血清1-3β葡聚糖升高(大于33.5 ng/L)者3例;免疫功能血TBNK检查NK细胞比例减少者3例;免疫五项检查C3补体下降者4例;8例患儿均合并其他病原体感染,合并有巨细胞病毒感染7例;合并呼吸道合胞病毒及人类疱疹病毒5型感染各4例;合并真菌感染3例;合并革兰阳性球菌感染5例,流感2例;腺病毒1例;治疗上,8例患儿均接受口服复方磺胺甲恶唑治疗,予抗真菌治疗7例,人免疫球蛋白治疗6例,更昔洛韦治疗4例,其中口服磺胺药后好转5例,2例死亡患儿均在住院期间有持续使用糖皮质激素(甲强龙>1周或>2 mg/kg)治疗,因怀疑免疫缺陷病转院1例。结论儿童非HIV型肺孢子菌肺炎病程长,确诊难度大;小婴儿使用糖皮质激素类药物时应更谨慎;临床有发热、气促、肺部湿啰音及动脉血氧分压下降,血乳酸脱氢酶升高,1-3β葡聚糖升高,胸片提示斑片状渗出等特点,伴有免疫性疾病或激素用药史者需警惕本病,常有多种病原体混合感染,以巨细胞病毒多见;部分患儿可经复方磺胺甲恶唑治疗后好转。     

新生儿重症监护室护士早产儿体位管理知信行现状及培训需求的调查

目的探讨新生儿重症监护室(NICU)护士早产儿体位管理知信行现状及早产儿体位管理培训需求。方法本研究为横断面研究。采用便利抽样法, 于2022年3—4月选取山东省6所三级甲等医院的207名NICU护士为研究对象, 采用自行编制的一般资料调查表、NICU护士早产儿体位管理知信行问卷和NICU护士早产儿体位管理培训需求问卷对护士进行线上调查。采用多重线性回归分析NICU护士早产儿体位管理知信行的影响因素。本研究共发放问卷207份, 回收有效问卷201份, 有效回收率为97.10%(201/207)。结果 201名NICU护士早产儿体位管理知识、态度、行为得分及知信行总分别为(59.12±7.82)、(33.10±3.09)、(54.92±7.36)、(147.14±15.15)分。多重线性回归分析结果显示, NICU护士工作医院性质、是否接受过相关培训、认为参加相关培训的重要性是NICU护士早产儿体位管理知信行总分的影响因素(P<0.05)。78.11%(157/201)的NICU护士的接受过早产儿体位管理培训, 98.01%(197/201)的NICU护士表示愿意接受早产儿体位管理...     

泛病原体基因芯片在小儿肺炎中检出博卡病毒

正呼吸道感染是儿童常见病,病原学复杂,20%~30%的小儿呼吸道感染病原难以明确~([1-2])。传统的病原学检测手段如荧光定量PCR、抗原抗体免疫学方法或细菌培养等,操作繁琐、通量低,一次只能检测少数几种致病原~([3-6])。本研究对1例病原不明的小儿肺炎,利用泛病原体基因芯片进行高通量病原学筛查分析,并予后续PCR扩增及测序验证,以探讨该芯片系统应用于呼吸道感染病原学诊断的可行性。