生物化学实验教学新模式理论与实践

为适应现代医学教育发展的需要，加强学生能力的培养，提高学生综合素质，我们在总结多年实验教学经验的基础上，对实验内容和教学形式进行了改革，开发了以“综合性实验－讨论式教学”为特色的新的教学模式的探索。对实验内容我们进行了精心设置，优化组合为7个具有设计性质的综合性大实验。在教学方法上注重突出学生的主体作用，采用在教师指导下，学生主动查阅资料，进行实验设计，然后组织实验讨论，确定实验方案，最后由学生独立完成全部实验过程的教学形式。本科九七、九八、九九三个年级期末考试成绩和问卷调查显示，新的教学模式收到了良好的教学效果，有一定的推广价值。     

hR24L基因的克隆及逆转录病毒重组体的构建

目的　克隆人类DNA损伤修复基因hR2 4L ,并构建逆转录病毒表达载体重组体 ,为进一步研究该基因的功能及作用机制奠定基础。方法　用PCR法扩增hR2 4L基因的开放阅读框 (ORF) ,然后连接到 pEGM -T载体中 ,经测序验证无突变后 ,再重组到逆转录病毒表达载体 (pDor -neo)中 ,得到正义和反义重组体。 结果　建立了一种有效的基因克隆方法 ,成功地克隆了hR2 4L基因 ,获得了含有重组体的稳定遗传的细胞株。结论　PCR法是克隆hR2 4L基因的有效方法 ,成功构建逆转录病毒表达载体重组体是研究该基因的重要前提     

一氧化氮介导小鼠急性缺氧窒息引起的脑组织损伤

目的　研究小鼠缺氧窒息后脑组织一氧化氮 (NO)含量的动态变化。方法　 40只小鼠随机分成 5组 ,缺氧组放入密闭瓶中使其缺氧 ,然后观察不同时间脑组织中NO含量的变化。结果　缺氧 30min后NO含量开始升高 ,与对照组比较存在明显差异 (P <0 .0 5 ) ,48h后NO含量达到高峰 ,72h后NO含量开始下降。结论　小鼠急性缺氧后脑组织NO含量明显升高 ,NO可能介导了小鼠窒息缺氧引起的脑损伤     

三七皂苷Rg1对大鼠脑血流量和小鼠微循环的影响及作用机制

目的观察三七皂苷Rg1对脑血流量及微循环的影响,探讨其防治心脑血管疾病,改善预后的作用机制。方法将动物随机分组,分别评价三七皂苷Rg1对大鼠脑血流量,对小鼠脑缺血和小鼠耳廓微循环的影响。结果50 mg.kg-1的三七皂苷Rg1可明显增加大鼠脑血流量,显著延长小鼠断头后喘气时间,且明显增加小鼠耳廓细动脉、细静脉管径及增多耳廓毛细血管数量。结论三七皂苷Rg1可能通过改善动物微循环而增加脑血流量,发挥改善脑缺血的作用。     

以应用型人才培养为导向完善实验教学管理

目的探讨以应用性人才培养为导向的高等医学院校教学实验室仪器设备标准化管理的重要性。方法将仪器设备标准化管理理念应用到高等医学院校教学实验室管理中。比较引入仪器设备标准化管理理念管理前后仪器完好率和操作合格率。结果实施仪器设备标准化管理后,仪器的完好率由实施前的82.91%提高至91.77%,差异有统计学意义(χ~2=5.61,P0.05);操作合格率由62.50%提高至87.50%,差异有统计学意义(χ~2=5.33,P0.05)。结论应用仪器设备标准化管理理念管理高等医学院校教学实验室仪器设备,提高了仪器设备的完好率,提升了实验教师的制度化素养和业务素养。     

Lactuside B对脑缺血再灌注损伤后大鼠海马和纹状体神经生长因子mRNA表达的影响

目的探讨高翅果菊提取物Lactuside B(LB)对大鼠脑缺血/再灌注损伤海马和纹状体神经生长因子mRNA表达的影响。方法 SD雄性大鼠,随机分为6组(8只/组)即模型组、假手术组、阳性对照组、LB高剂量、中剂量和低剂量组。采用大脑中动脉阻塞2 h再灌注24 h和72 h动物模型、各组在相应时间点处死一半动物,以RT-PCR技术分别检测大鼠海马和纹状体不同时间段NGF mRNA的表达情况。结果模型组NGFmRNA在海马和纹状体表达明显增多,再灌注72 h海马和纹状样NGF mRNA表达显著下降;在海马,用药后LB各剂量组NGF mRNA表达增多,与模型组比较有显著差异(P<0.01);与阳性对照组比较中、低剂量组有显著差异(P<0.01),且中、低剂量组用药72 h时NGF mRNA表达较多,与用药24 h比较有显著差异(P<0.05)。在纹状体,LB各剂量组NGF mRNA表达同样增加,与模型组比较有显著差异(P<0.01),与阳性对照组比较其低、中、高剂量组均有显著差异(P<0.01或P<0.05),LB用药72 h时中、低剂量组NGF mRNA表达更多,与用药24 h比较有显著差异(P<0.05)。结论 LB对大鼠海马和纹状体的NGF基因产生了较大的影响,其抗脑缺血再灌注损伤的作用机制可能与LB能够上调二部位的NGF mRNA有关。     

凝血指标和血小板参数联合检测在肝硬化患者中的临床价值

目的探讨凝血指标（PT、APTT、TT）和血小板参数（PLT、MPV）在肝炎后肝硬化与酒精性肝硬化患者中的临床价值。方法检测50例正常人与35例乙肝后肝硬化、21例丙肝后肝硬化、44例酒精性肝硬化患者外周血PT、APTT、TT、PLT、MPV。结果肝硬化组PT、APTT、TT明显高于对照组（P〈0.05）,丙肝后肝硬化患者PLT比酒精性及乙肝后肝硬化患者明显减少（P〈0.01和P〈0.05）。肝炎后肝硬化患者MPV低于正常组（P〈0.05）,而酒精性肝硬化患者MPV高于正常组（P〈0.05）。结论凝血指标和血小板参数可作为衡量肝硬化患者出血倾向和预后判断的重要指标,而肝炎后肝硬化和酒精性肝硬化患者MPV变化的不一致,能反映血小板减少的原因。     

PBL教学法在肿瘤标志物教学中的应用

目的:探讨适应现代医学检验教育需要的临床生物化学检验教学方法。方法:从2006年开始对"肿瘤标志物的临床检验"等5章内容使用以问题为基础的教学(PBL)教学法。以典型病例为载体,以相关肿瘤标志物的检测与分析为线索,紧紧围绕的疾病的诊断、鉴别诊断、治疗检测和预后分析提出若干问题安排教学内容;在教学方法上,以学生为中心,以课堂讨论为重点,教师采用"课前设问引导、课堂讨论点评和课后答疑总结"三环节紧扣教学法。结果:期末考试成绩和调查问卷都显示,采用新教学模式后学生的学习兴趣、综合能力、学习成绩都比传统教学法明显提高,并随着教师教学经验的积累这种趋势更加明显。结论:部分章节使用PBL教学法有利于提高临床生化检验的教学水平。     

HPLC-MS/MS检测血浆百草枯浓度方法的建立

目的建立高效液相色谱串联质谱(HPLC-MS/MS)检测血浆百草枯浓度的方法。方法选用Phenomenex Kinetex 2.6μm HILIC色谱柱(100.0 mm×2.1 mm),以1%甲酸水溶液(含250 mmol/L甲酸铵)为流动相A、乙腈为流动相B,梯度洗脱,流速为0.35 mL/min,进样量为10μL,柱温为40℃;使用电喷雾电离(ESI)源,采用正离子条件下多离子反应监测扫描模式。百草枯和内标乙基百草枯的离子对分别为质/荷比(m/z)92.7→171.0和m/z 107.0→185.1。对建立的HPLC-MS/MS进行方法学评价(线性范围、定量下限、准确度、精密度、选择性和基质效应、稳定性),并检测75例百草枯急性中毒患者的血浆百草枯浓度,采用受试者工作特征(ROC)曲线评估血浆百草枯浓度对临床结局的判断价值。结果 HPLC-MS/MS检测百草枯浓度在54.28~13 190.00 ng/mL范围内具有良好线性关系(Y=0.000 1X+0.011 6,r2=0.998 3)。定量下限处的批内平均准确度为96.31%~120.04%,批间准确度为104.43%;高、中、低浓度批内和批间检测值与理论值的偏差均在±15%范围内;高、中、低浓度及定量下限处的批内和批间相对标准偏差(RSD)均15%。随机选择6份空白基质考察方法的选择性和基质效应,结果表明百草枯出峰位置无干扰,方法选择性好;高、低浓度处经内标归一化的基质因子的变异系数均15%,基质效应符合要求。样本室温放置可稳定1 d,2~8℃放置可稳定1周,-80℃冻存可稳定1个月,反复冻融处理3次对结果无影响。75例百草枯中毒患者的血浆百草枯浓度为2 820(0~22 200)ng/mL,死亡组血浆百草枯浓度明显高于存活组(P0.05)。ROC曲线分析显示血浆百草枯浓度判断临床结局的ROC曲线下面积为0.855,最佳临界值为2 431 ng/mL。结论建立的HPLC-MS/MS方法可用于临床血浆百草枯浓度的常规检测。     

天麻醒脑胶囊对沙土鼠脑缺血再灌注损伤的影响

天麻醒脑胶囊主要由天麻、地龙、石菖蒲、远志、熟地黄、肉苁蓉组成,具有促智、平肝息火及镇静催眠等功效,临床主要用于防治老年性痴呆。血管性痴呆(Vascu lar Dem entia,VD)是老年期痴呆的主要类型之一,是由一系列脑血管因素(缺血或急慢性缺氧性脑血管病)导致脑组织损害而引起的获得性智能损害综合征,以记忆、认知功能缺损为主,可伴有语言、运动、视空间技能及人格障碍等[1,2]。为进一步阐明其药理功效,本研究探讨了天麻醒脑胶囊对沙土鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用,以期为其临床应用提供药理学实验依据。1材料1.1动物健康成年沙土鼠,体…