多肿瘤标志物蛋白芯片检测及判别函数在妇科肿瘤诊断中的应用

目的 探讨多肿瘤标志物蛋白芯片检测系统(简称C-12)及判别函数在妇科肿瘤临床诊断中的应用.方法 用该系统测定分析77例妇科恶性肿瘤、76例妇科良性病变及353例健康女性体检者血清12种肿瘤标志物(CA19-9、NSE、CEA、CA242、CA125、CA153、AFP、Ferritin、free-PSA、PSA、HCH、β-HCG)的水平. 结果 妇科肿瘤组的检测阳性率(62.33%)显著高于良性病变和对照组,单项检测阳性率以CA125最高(36.36%),CA125、CEA、CA19-9两两联合及三项联合检测阳性率均高于单项检测,其中又以三项联合检测为最高(50.29%),建立诊断判别函数对妇科肿瘤诊断准确率78.50%,显著高于单项或联合检测.结论 运用多肿瘤标志物蛋白芯片检测系统及判别诊断函数可明显提高妇科恶性肿瘤诊断的准确率,有较高的临床参考价值.     

APE1在PDT治疗非小细胞肺癌中的表达变化及疗效的关系

目的 探讨光动力疗法(PDT)治疗非小细胞肺癌对脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶(APE1)表达的影响及疗效的关系.方法 以Western blot分析PDT处理调控作用影响A549细胞APE1表达变化的时效关系,构建Ad5/F35-APE1 siRNA腺病毒干扰载体,通过Western blot检测其对APE1蛋白的敲低作用,设空白对照组、Ad5/F35-APE1 siRNA感染组、PDT组和Ad5/F35-APE1 siRNA+PDT组,采用MTT法观察不同组对A549细胞的增殖抑制作用.结果 PDT诱导A549细胞APE1蛋白表达增强在24h达到高峰,10MOI Ad5/F35-APE1 siRNA重组腺病毒感染A549细胞48h抑制APE1表达最为显著,MTT检测显示随光照剂量的增加增殖抑制作用显著增强,同时Ad5/F35-APE1 siRNA+PDT组对A549细胞具有明显的增殖抑制作用.结论 Ad5/F35-APE1 siRNA重组腺病毒能有效抑制PDT诱导的肺癌细胞APE1表达增加,明显增强PDT对肺癌细胞的杀伤效应.     

DNA损伤修复基因MPG在人体骨肉瘤的表达及其治疗意义

目的本研究首先观察N-烷基嘧啶DNA糖基化酶(MPG)在人体骨肉瘤中的表达特点及其与患者预后的关系,进而构建复制缺陷型腺病毒MPG表达载体,探讨人骨肉瘤细胞HOS过表达MPG及其对DNA损伤药物MMS,MNNG和TMZ敏感性的影响.方法应用免疫组化方法检测60例骨肉瘤组织和3株骨肉瘤细胞中MPG的表达.按染色强度将其分为低表达组和高表达组,统计分析它们与临床病理及患者预后的关系.应用流式细胞术、蛋白印迹和HEX标记寡核苷酸方法确定MPG腺病毒表达载体Ad5 HA-MPG在人体骨肉瘤细胞HOS中的感染效率,MPG蛋白表达和MPG酶活性;MTS、SRB和[3H]胸腺嘧啶掺入法检测细胞存活;PE-Annexinv/7-AAD流式细胞术检测细胞凋亡.结果3株骨肉瘤细胞MPG均呈弱阳性表达.60例骨肉瘤中MPG 40例(65%)为高表达,MPG表达和WHO分型和患者预后显著相关.10 MOI Ad5 HA-MPG可使90%以上HOS感染,感染细胞高表达MPG并具有MPG酶活性.MPG过表达HOS显著地提高DNA损伤性化疗药物MMS、MNNG和TMZ的敏感性,其IC50值分别下降了6.0、4.5和2.5倍.结论Ad5 HA-MPG瞬时MPG过表达,可能是一种提高骨肉瘤细胞对DNA损伤性化疗药物敏感性的潜在治疗方法.     

APE1 siRNA表达载体的构建及其对骨肉瘤细胞APE1表达的抑制作用

目的构建DNA损伤修复基因脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶APE1 siRNA表达载体pSilence APE1,观察其对骨肉瘤细胞HOS和9901APE1蛋白表达的抑制作用.方法设计合成APE1 siRNA cDNA序列与线性化pSilence 2.0-U6质粒连接后构建APE1 siRNA表达载体pSilence APE1,经酶切鉴定和测序确认.应用免疫组化检测骨肉瘤细胞APE1蛋白的表达,同时应用免疫印迹检测其对APE1基因的敲低作用的量效和时效关系.结果通过双酶切鉴定和测序分析,成功构建了APE1 siRNA表达载体.免疫组化和免疫印迹证实pSilence APE1对骨肉瘤细胞APE1基因具有特异性"敲低"作用,其抑制APE1基因表达效率为72%～95%,而且其抑制作用以3.0μg pSilence APE1转染第3天最为显著.结论成功构建了APE1 siRNA表达载体pSilence APE1,并且该载体能有效地敲低骨肉瘤细胞APE1基因表达.     

非霍奇金淋巴瘤患者血清VEGF及Endostatin水平检测的临床相关研究

目的探讨非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin's lymphoma,NHL)患者血清VEGF及Endostatin(ES)水平变化与其临床特征、治疗、预后因素的关系.方法采用ELISA法检测162例NHL患者和50例正常健康人血清VEGF及ES水平.结果①162例NHL患者血清中VEGF、ES水平(198.97±17.92)pg/ml和(34.82±7.91)pg/ml,均分别显著高于正常健康人(31.58±6.68)pg/ml和(16.80±3.87)pg/ml(P＜0.01),V/E比值也非常显著高于正常人.②NHL患者血清中VEGF、ES水平以及V/E比值与其恶性程度、临床分期和骨髓侵犯(VEGF除外)等显著相关(P＜0.05),而与其年龄、性别、细胞类型之间无明显关系.③50例NHL完全缓解(CR)患者血清中VEGF、ES水平及V/E比值均非常显著低于122例NHL初治患者(IP)(P＜0.01);但血清中VEGF、ES水平仍非常显著高于正常健康人(P＜0.01),而两者V/E比值差异并不明显(P＞0.05).39例复发/难治NHL患者(RRP)血清中VEGF水平显著高于IP组(P＜0.05),但其ES水平差异并不明显(P＞0.05),其V/E比值非常显著高于IP组(P＜0.01).④NHL患者血清VEGF、ES水平以及V/E比值与其预后指标LDH、CRP、β2-MG均呈显著正相关;血清VEGF、ES两者之间亦呈显著正相关.结论NHL患者血清中VEGF、ES水平升高,与淋巴瘤的恶性程度及肿瘤负荷大小密切相关,其两者的比值(V/E)对NHL患者的治疗、预后判断有重要意义.     

咖啡酸苯乙酯对大肠癌细胞β-catenin蛋白表达的影响

目的探讨咖啡酸苯乙酯(caffeic acid phenethyl ester,CAPE)对体外培养的人大肠癌HCT116和SW480细胞β-catenin蛋白表达的影响.方法以大肠癌细胞株HCT116和SW480为研究对象,应用间接免疫荧光、Western blotting检测2.5、5.0、10 mg/L CAPE处理24、48 h后细胞β-catenin表达变化.结果Western blotting检测结果显示2.5、5.0、10mg/L CAPE处理HCT116和SW480细胞24、48 h后β-catenin总蛋白表达降低,呈剂量和时间依赖性,间接免疫荧光检测结果显示细胞β-catenin蛋白胞核及胞浆表达下调,细胞连接处胞膜表达上调.结论CAPE能明显下调β-catenin蛋白表达并阻止其核转位,这可能是其抗癌作用的重要分子机制.     

脂质体异体瘤苗对肿瘤的治疗效应研究

应用瘤苗诱导肿瘤宿主产生抗肿瘤免疫反应以治疗肿瘤的主动免疫治疗肿瘤是目前肿瘤生物治疗有效的方法之一 ,受到国内外的广泛重视[1,2 ] 。我们已开展自体瘤苗治疗肿瘤的研究并已取得一定进展[3] 。进一步提高瘤苗免疫治疗肿瘤的疗效 ,寻求制备高效、安全的异体瘤苗的途径极为重要。据文献报道脂质体 (ｌｉ ｐｏｓｏｍｅ)包裹瘤苗抗原性强 ,又可作异体瘤苗的载体 ,其诱导机体产生的抗体比单纯性瘤苗高 10 0～ 4 0 0倍 ,且具有作用持久、毒副反应轻等优点[4 ,5] 。为此本研究观察了脂质体异体瘤苗对肿瘤的抑制作用 ,以期为临床应用提供实验…     

双功能基因APE1敲低后人体骨肉瘤细胞基因表达谱变化的研究

目的 探索APE1敲低后骨肉瘤细胞恶性表型受抑的可能机制,以及APE1相互作用的可能分子.方法 应用免疫印迹和AP核酸内切酶活性检测确证合成APE1 siRNA对人体骨肉瘤细胞HOS APE1基因的敲低作用;应用GEArrayTMQ系列cDNA微阵列研究HOS细胞APE1敲低后基因表达谱的改变.结果 APE1 siRNA对HOS细胞APE1基因具有特异性"敲低"作用,其抑制效率为91.5%.APE1抑制对cDNA微阵列六族途径均有影响,其中对细胞周期族基因影响较少;96个基因中有42个基因有明显变化(43.8%),其中CDK4、FGFR2、KAI1和NCAM1表达上升,其余38个基因表达均呈下降.结论 APE1的敲低对骨肉瘤细胞的细胞周期及DNA损伤、细胞凋亡、信号转导、细胞黏附、血管生成、肿瘤转移途径基因均有影响.     

细胞蜡块结合免疫组化有效提高胸水细胞学阳性检出率的临床研究

目的:探讨细胞蜡块结合免疫组化技术在提高肺癌胸水细胞学阳性检出率及提供分型诊断方面的应用价值.方法:收集252例胸水样本,分别行沉降式薄层液基细胞学和细胞蜡块制片,比较两种方法在胸水阳性检出率方面的差异性.对于细胞蜡块诊断为阳性和可疑阳性的病例进一步行TTF-1、CK7、CK5/6、p63、Calretinin、WT-1、Syn、CgA、Ki-67等免疫组化染色以分型.对于58例同时有活检结果的病例,以活检病理诊断结果为金标准,评价细胞蜡块结合免疫组化在分型诊断中的准确性.结果:252例胸水样本中,液基细胞学和细胞蜡块的阳性检出例数(率)分别为72例(28.6％)及125例(49.6％),二者差异具有显著性(P＜0.01).58例经组织学确诊的病例中,有56例与细胞蜡块结合免疫组化法分型的结果相一致(56/58,96.6％).结论:细胞蜡块制片技术可显著提高胸水阳性检出率.细胞蜡块结合免疫组化技术在胸水标本组织学分型方面具有良好的应用性.     

免疫组化法检测大肠肿瘤DNA修复基因APE1表达和细胞定位

目的 探讨DNA修复基因脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶(apurinic/apyrimidinic endonuclease 1,APE1)在大肠癌发生、发展中的作用.方法 应用免疫组化PowerVisionTM法检测125例大肠癌、72例大肠腺瘤、60例癌旁大肠黏膜和40例正常大肠黏膜中APE1的表达和细胞定位,并分析其与大肠癌临床病理之间的关系.结果 正常大肠黏膜APE1呈胞核表达,大肠腺瘤和大肠癌组织APE 1表达特征发生改变,呈胞核表达、单纯胞浆表达或核浆共同表达,大肠癌组织APE1胞浆异位表达率为73.6%,大肠腺瘤APE1胞浆异位表达率为83.3%,二者差异无统计学意义(P＞0.05),但均显著高于癌旁大肠黏膜(10%)和正常大肠黏膜(0) (P＜0.01).APE1胞浆异位表达与大肠癌临床分期和淋巴结转移有关(P＜0.01、P＜0.05).结论 APE1胞浆异位表达可能在大肠癌的发生、发展中起重要作用.