病毒学研究的新工具:脱氧核酶及其应用

脱氧核酶是利用体外分子进化技术,从随机脱氧核苷酸单链库中获得的一种具有酶活性的DNA分子.通过该技术已筛选出具有核酸酶活性、激酶活性、过氧化物酶活性等多种催化功能的脱氧核酶.本文概述了脱氧核酶的筛选方法、催化特点、设计策略及其作为一种新型的基因阻抑工具在病毒学研究等领域的广泛应用.     

淋球菌对环丙沙星耐药机制的研究

目的:探讨淋球菌对环丙沙星耐药机制。方法:从临床分离株淋球菌,进行药敏试验,菌内聚积的环内沙星浓102度测定,聚合酶链反应()扩增和基因片段,产物作单链构象多肽性()分析检测其点突变,对PCRgyrAparCPCRSSCPPCR产物直接测序。结果:环丙沙星耐药株占,敏感性下降株占,敏感株占。敏感菌内聚积的环丙沙星浓度为72.5 .6%6.9%,敏感性下降株和耐药株约为和。分析显示敏感性下降株和耐药菌株都存在点突变,经测序6ng/mg3ng/mg0.6ng/mgSSCPgyrA显示以第位氨基酸(GyrA91Ser→)和位(Phe95Asp→)双点突变常见,仅AsnMIC≥0.5μ的菌株才存在基因点突g/mlparC变,经测序显示以第位氨基酸ParC87(Ser→和位(Arg)104Cys→)双点突变常见。Tyr结论:作用靶位(和)的改变gyrAparC和膜耐药机制是淋球菌对环内沙星耐药的主要机制,促旋酶是环丙沙星主要作用靶位,基因突变与较高水平耐药有DNAparC关。     

加强微生物学与临床学科的教学联系

对第五版医学微生物学、传染病学、内科学、外科学、儿科学和妇产科学教材作调研，了解微生物学知识点在临床学科的分布，优化微生物学教学内容结构，并对微生物学的教学改革提出了相应对策。     

食物变态反应的预防

现已清楚,预防人类变态反应的任何推理方法都必须立足于认识在发病中起作用的多种机制。近年来,对IgE介导疾病的研究做了许多工作,这是由于认识到IgE具有明显的亲同种细胞的特征,与大部分特应症的表现有关。对食物变态反应的预防,我们从相反的角度提出一个可以争论的方法。我们认为,并非所有的食物变态反应都由IgE引起,任何基于只凭体内外测定IgE抗体而提出的治疗和预防方法都较局限,在食物变态反应的临床治疗上也不一定都很有效。今提出以下三个方面的问题。     

中性白细胞的功能和宿主的抵抗力

吞噬细胞包括嗜中性、嗜酸性多形核白血球和卑核吞噬系统,后者包括血单核细胞,组织巨噬细胞,肝血窦的枯否氏细胞和肺泡巨噬细胞。在宿主抗微生物的防御力中,吞噬细胞的功能取决于以下方面。一、骨髓产生和     

卡介苗的改造策略

卡介苗预防成人结核病的效果并不理想，其失效原因主要与缺乏结核杆菌重要抗原、不能有效刺激CD8 T细胞、环境分枝杆菌等多种因素的影响有关。改造应从重组卡介苗、促进T细胞亚群的应答及卡介苗的营养缺陷株、突变株等多方面考虑来提高卡介苗的保护效力，更好地防止结核病的发生。     

RNA干扰体内抑制HBeAg表达

目的 在机体水平观察小干扰RNA(siRNA)对HBeAg表达的影响.方法 通过尾静脉注射1.5倍的HBV真核表达质粒pHBV1.5建立小鼠急性乙型肝炎病毒感染模型,再将其与针对乙型肝炎病毒核心区的siRNA表达载体(psiHBV4)共注射,于注射后第6天取血测HBeAg的表达,并用RT-PCR检测肝组织HBV prec/c mRNA转录子的水平.结果 注射后第6天血清中,HBsAg、HBeAS在造模组中高表达.psiHBV4干扰组中HBeAg的表达受到了明显的抑制,与对照组相比有显著差异(P<0.05),RT-PCR显示肝内HBV prec/c mRNA水平亦明显降低,而无关干扰对照组则无相应的干扰作用.结论 RNAi能特异,高效的抑制小鼠体内HBeAS的表达,为乙型肝炎的治疗带来了新的希望.     

重组结核分枝杆菌CFP10-ESAT-6融合蛋白的制备及应用研究

目的 制备重组培养滤液蛋白10和6000早期分泌性抗原靶的融合蛋白(rCFPlO-ESAT-6)，研究其免疫学特性，评价其在结核病血清学诊断中的价值。方法 用基因拼接(Gene SOEing)法扩增lhp-ESAT-6融合基因、并克隆人pQE30质粒，表达、纯化rCFPl0-ESAT-6蛋白，通过Western blot分析其抗原性。建立豚鼠BCG免疫模型和结核分枝杆菌强毒株(H37Rv)感染模型，建立以融合蛋白为抗原的酶联免疫吸附测定(ELISA)法，检测豚鼠血清中的抗结核分枝杆菌抗体，并与以纯化蛋白衍生物(PPD)为抗原的ELISA法比较。结果 重组质粒pQE30-CFPl0-ESAT-6靶基因的测序结果与预计序列(lhp-linker-ESAT-6)完全一致。融合蛋白在DH5α菌中以可溶性非包涵体形式存在，表达量占菌体总蛋白的40％，分子质量为26000，纯化后的蛋白纯度为98％，浓度为1.2g／L。Western blot分析表明，融合蛋白与活动性肺结核患血清、兔抗CFP10血清和兔抗ESAT-6血清都能发生特异性免疫反应。以10只生理盐水处理豚鼠血清的平均吸光度(A)值 2s为正常界限值，以融合蛋白为抗原，11份H37Rv感染豚鼠血清全部呈阳性反应，11份BCG免疫豚鼠血清仅1份呈阳性反应；以PPD为抗原，11份H37Rv感染豚鼠血清全部呈阳性反应，11份BCG免疫豚鼠血清也全部呈阳性反应。结论 pQE30-CFPl0-ESAT-6 DH5α菌能高效表达rCFPl0-ESAT-6融合蛋白，该蛋白兼具CFPl0和ESAT-6两种蛋白的抗原性，能特异性区分豚鼠因H37Rv感染和BCG免疫后产生的抗结核分枝杆菌抗体。本研究为rCFPl0-ESAT-6融合蛋白在结核病血清学诊断中的应用奠定了基础。