Daxx在介导ox-LDL诱导巨噬细胞凋亡中的作用

目的 初步探讨Daxx在氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导巨噬细胞凋亡中的作用.方法 通过MTT比色法检测ox-LDL对小鼠源性巨噬细胞(RAW264.7)细胞生长的影响:用AO/EB染色、流式细胞仪和DNA断裂片段分析研究ox-LDL诱导的细胞凋亡.eal time PCR检测细胞内Daxx mRNA的表达情况.结果 ox-LDL能抑制RAW264.7细胞的生长,抑制作用呈剂量-效应关系;50 mg/L ox-LDL处理RAW 264.7细胞48 h后,AO/EB染色细胞呈凋亡特征性改变,并且DNA断裂片段分析显示电泳图出现梯形条带;流式细胞检测显示相同时间不同浓度ox-LDL(0、12.5、25、50、75 mg/L)处理RAW264.7细胞48 h和相同浓度不同时间(50 mg/L,48、72 h)处理细胞,细胞凋亡率逐渐升高;Real time PCR结果表明不同时间和不同浓度的ox-LDL处理RAW264.7细胞后,Daxx mRNA表达水平呈时间和浓度依赖性增加,其中50 mg/L ox-LDL处理细胞48 h组Daxx mRNA表达最高.结论 ox-LDL有诱导RAW264.7巨噬细胞凋亡的作用,其机制可能与Daxx表达增高从而启动细胞凋亡有关.     

普罗布考对内皮细胞增殖和分泌功能的保护作用

目的：通过研究普罗布考对内皮细胞（endothelial cell,EC)增殖和分泌功能的影响，探讨普罗布考抗再狭窄作用的可能机制。方法：在体外人脐静脉内皮细胞培养模型。分别采用MTT比色法、PCNA免疫组化测定法测定EC所处增殖状态，以细胞培养液中LDH水平判断内皮细胞受损程度；内皮细胞释放NO、PGI2的功能分别以硝酸酶还原法和ELISA法测定。结果：溶血性磷胆酰胆碱（lyso-phophatidylcholine,LPC,20mg/L）作用24h后，导致EC明显损伤，细胞培养液中LDH水平升高4倍，同时EC增殖受抑，分泌功能减退，而不同剂量普布考（20、40、80μmol/L），在LPC加入前30min给药，可对抗PLC对EC的损伤，并促进EC增殖，同时增强内皮细胞NO和PGI2合成与释放，结论：普罗布考可保护EC免疫氧化应急损伤，并促进EC增殖及内膜的修复，保护或提高新生EC的功能。     

扁果绞股蓝皂甙对兔脑基底动脉氧自由基损伤的保护作用

１０ｍＡ恒定直流电电解Ｋｒｅｂ＇ｓ液１ｍｉｎ，引起兔脑基底动脉收缩，灌注压明显增高，脑基底动脉内皮松驰因子（ＥＤＲＦ）释放量明显减少，血管壁组织丙二醛含量升高，超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）活性降低。扁果绞股蓝皂甙２５、５０、１００μｇ·ｍｌ－１可浓度依赖性地抑制电解产生氧自由基诱发脑血管收缩作用，此外在１００μｇ·ｍｌ－１时具有保护内皮细胞释放ＥＤＲＦ的作用，并抑制血管壁丙二醛的升高，保护ＳＯＤ的活性。     

金粉蕨素抑制氧化应激诱导的血管内皮细胞凋亡

研究金粉蕨素对氧化应激诱导的血管内皮细胞凋亡的影响及可能机制。用过氧化氢损伤人脐静脉内皮细胞株ECV304,制备内皮细胞凋亡模型。应用四甲基偶氮唑盐还原法观察细胞活性;流式细胞术和Tunel法检测细胞凋亡率;用Western blot检测细胞天冬氨酸凋亡蛋白酶3活性。结果发现,金粉蕨素(0.3、1和3 μmol/L)呈浓度依赖性地增加内皮细胞活性,显著降低细胞凋亡率(15.5％±1.2％、12,6％±0.9％、8.2％±0.8％比22.7％±3.9％,P<0.05);同时金粉蕨素(3 μmol/L)抑制过氧化氢诱导天冬氨酸凋亡蚤白酶3的活化,与阳性对照药金雀异黄酮作用强度相似。结果提示,金粉蕨素拮抗氧化应激诱导的血管内皮细胞凋亡可能与抑制天冬氨酸凋亡蛋白酶3活化有关。     

金粉蕨素急性毒性实验

目的　观察金粉蕨素 (Onychin)的毒性 ,为评价其毒性等级以及拟定临床安全剂量提供依据。方法　采用急性毒性实验方法 ,以一次大剂量给小白鼠灌胃金粉蕨素 ,连续观察小鼠行为活动等指标和毒性反应程度 ,并在实验结束时处死小白鼠进行剖检 ,以获得金粉蕨素初步毒性资料。结果　实验连续观察 14d ,小鼠无明显行为异常 ,也未出现死亡 ,求不出LD50 。结论　本实验设定的最高剂量 6 40mg/kg及其以下剂量对小白鼠均无明显毒性作用 ,提示在临床和药理实验上应用金粉蕨素是安全的     

绞股蓝总皂苷对内毒素、氧自由基介导血管内皮细胞表达c-sis基因和调节平滑肌细胞增殖的影响

目的　研究绞股蓝总皂苷（ Ｇｙｐ） 对血管平滑肌细胞增殖的调节与内皮细胞ｃ ｓｉｓ 基因表达和一氧化氮（ Ｎ Ｏ） 合成／ 释放的关系。方法　采用原位杂交法检测内皮细胞ｃ ｓｉｓｍ Ｒ Ｎ Ａ 表达,用 Ｇｒｉｅｓｓ 法测定内皮细胞 Ｎ Ｏ 释放量,用 Ｍ Ｔ Ｔ快速比色法检测平滑肌细胞（ Ｓ Ｍ Ｃ） 增殖。结果　内毒素（ Ｌ Ｐ Ｓ）１６ ｍｇ· Ｌ－ １ 促进牛主动脉内皮细胞ｃ ｓｉｓ 基因表达,明显降低内皮细胞培养液中一氧化氮含量,刺激 Ｓ Ｍ Ｃ 增殖;黄嘌呤－ 黄嘌呤氧化酶（ Ｘ Ｘ Ｏ） 系统产生的氧自由基（ Ｏ Ｆ Ｒ） 具有与 Ｌ Ｐ Ｓ 相似的作用。绞股蓝总皂苷对 Ｌ Ｐ Ｓ诱导的内皮细胞ｃ ｓｉｓ 基因表达具有明显抑制作用,并能对抗 Ｏ Ｆ Ｒ 诱导的 Ｅ Ｃ 损伤,保护内皮细胞释放 Ｎ Ｏ 的能力,抑制 Ｌ Ｐ Ｓ 和 Ｏ Ｆ Ｒ通过 Ｅ Ｃ 介导的 Ｓ Ｍ Ｃ 增殖。 Ｇｙｐ 的效应可被 Ｎ Ｏ 合成酶抑制剂硝基 左旋精氨酸部分取消。结论　绞股蓝总皂苷通过抑制内皮细胞ｃ ｓｉｓ 基因表达,促进内皮细胞合成（ 释放） Ｎ Ｏ抑制平滑肌细胞增殖     

自由基对呼吸道上皮细胞小分子活性物质的影响

目的探讨氧自由基对培养犬呼吸道上皮细胞合成释放小分子活性物质一氧化氮（ＮＯ）,内皮素１（ＥＴ１）,前列腺素Ｅ２（ＰＧＥ２］）和血栓烷素（ＴＸＡ２）的影响。方法培养的犬呼吸道上皮细胞与黄嘌呤（２６．３μｍｏｌ·Ｌ１）及黄嘌呤氧化酶（１７ｕ·Ｌ１）孵育４ｈ后,应用酶联免疫、放射免疫及Ｇｒｉｅｓ还原法,测定条件培养液中ＮＯ,ＥＴ１,ＰＧＥ２和ＴＸＡ２含量。结果氧自由基使犬呼吸道上皮细胞ＥＴ１和ＴＸＡ２释放量分别增加１２倍和１０倍;ＮＯ释放量减少６０％;同时使ＰＧＥ２的基础分泌量,组织胺刺激分泌量和花生四烯酸刺激分泌量均减少约７３％～８５％。结论氧自由基引起支气管上皮细胞参与调节支气管平滑肌舒缩的小分子活性物质分泌紊乱。     

绞股蓝总皂苷对化学诱导大鼠大脑中动脉栓塞性脑缺血损伤的保护作用

目的：研究绞股蓝总皂苷（Gyp）对栓塞性脑血损伤的保护作用。方法：应用光化学诱导大鼠大脑中动脉栓塞模型,观察Gyp预防性给药后脑组织超氧化物歧化酶（SOD）的活力,脂质过氧化产物TBARS,钠,钾,钙和水的含量以及缺血区范围的变化。结果：Gyp能缩小光化学反应后的缺血区面积,降低TBARS含量,提高SOD活性,降低缺血区Na^ ,Ca^2 ,H2O含量,升高K^ 水平,结论：Gyp对栓塞性脑缺血损伤具有保护作用。     

绞股蓝总皂苷对光化学诱导大鼠大脑中动脉栓塞性脑缺血损伤的保护作用

目的研究绞股蓝总皂苷(Gyp)对栓塞性脑缺血损伤的保护作用。方法应用光化学诱导大鼠大脑中动脉栓塞模型,观察Gyp预防性给药后脑组织超氧化物歧化酶(SOD)活力,脂质过氧化产物TBARS,钠、钾、钙和水的含量以及缺血区范围的变化。结果Gyp能缩小光化学反应后的缺血区面积,降低TBARS含量,提高SOD活性,降低缺血区Na     

依泽替米贝对血管平滑肌源性荷脂细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1和肝X受体α表达的影响

目的 观察依泽替米贝对血管平滑肌源性荷脂细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1和肝X受体α表达的影响,探讨依泽替米贝促进血管平滑肌源性荷脂细胞胆固醇流出的作用机制.方法 采用20 mg/L胆固醇、B环糊精混合物处理大鼠主动脉平滑肌细胞建立荷脂细胞模型,用不同浓度的依泽替米贝(3、10μmol/L和30 μmoL/L)处理荷脂细胞24 h,选择30μmol/L的依泽替米贝处理荷脂细胞不同的时间(0、6、12、24 h和48 h).通过逆转录聚合酶链反应检测三磷酸腺苷结合盒转运体A1mRNA变化和免疫印迹法检测肝X受体α蛋白的表达.结果 (1)三种浓度的依泽替米贝处理荷脂细胞后,逆转录聚合酶链反应显示随着依泽替米贝浓度增加,血管平滑肌源性荷脂细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1的mRNA表达明显上调,30μmoL/L依泽替米贝处理24 h组相比模型组上调3.4倍左右;当选用30 μmol/L依泽替米贝处理荷脂细胞不同的时间(0、6、12、24 h和48 h)后,三磷酸腺苷结合盒转运体A1的mRNA水平在0～24 h之间随时间增加而增加并于24 h达到峰值.(2)三种浓度的依泽替米贝处理荷脂细胞后,免疫印迹结果显示随着浓度增加血管平滑肌源性荷脂细胞肝X受体α蛋白的表达逐步增加,其中30 μmol/L依泽替米贝组作用最强,较模型组增加2倍多.30 μmol/L依泽替米贝分别处理荷脂细胞不同时间(0、6、12、24 h和48 h)后,肝X受体α蛋白表达随时间增加而增加,24 h组作用最佳.结论 依泽替米贝能明显上调平滑肌源性荷脂细胞ATP结合盒转运体A1和肝X受体α表达.