GM-CFU与染色体核型及CD34表达对初治急性髓细胞白血病完全缓解率预示价值的相关性研究

人粒 巨噬系祖细胞体外半固体集落培养 (ＧＭ ＣＦＵ)的生长方式有助于急性髓细胞白血病 (ＡＭＬ)的诊断、鉴别诊断、判断疗效与预测预后 ,随着染色体显带技术及流式细胞术的普及 ,发现染色体核型和ＣＤ34抗原表达也影响着ＡＭＬ患者的预后 ;而关于ＡＭＬ患者ＧＭ ＣＦＵ生长方式与染色体核型和ＣＤ34+表达在预后方面对应关系的研究尚罕见报道。本文兹对此进行了初步探索。对象与方法一、对象 :我院门诊及住院的初治ＡＭＬ患者 4 9例 ,男 36例 ,女 2 3例 ;中位年龄 4 2 (19～ 5 4)岁 ;ＦＡＢ分型Ｍ112例 ,Ｍ2 11例 ,Ｍ38例 ,Ｍ4 7例 ,Ｍ510…     

三氧化二砷对慢性髓细胞性白血病VEGF表达的影响

目的 研究慢性髓细胞性白血病(ＣＭＬ)患者血管内皮生长因子(ＶＥＧＦ)的表达及三氧化二砷(Ａｓ２Ｏ３)对其表达的影响。方法 采用酶联免疫吸附法(ＥＬＩＳＡ)检测正常人和初治ＣＭＬ患者骨髓细胞及ＣＭＬ细胞系Ｋ５６２细胞培养上清液中ＶＥＧＦ的含量。结果ＣＭＬ患者(ｎ＝２０)骨髓细胞培养上清液ＶＥＧＦ浓度为 ６４９．１６ｐｇ/ｍｌ,明显高于正常对照组的 １５２．１６ｐｇ/ｍｌ(Ｐ＜０．００１),而 ５×１０－６ｍｏｌ/ＬＡｓ２Ｏ３可明显降低ＶＥＧＦ的表达水平(Ｐ＜０．０５);细胞系Ｋ５６２有ＶＥＧＦ的过高表达,Ｋ５６２经２．５×１０－６ｍｏｌ/Ｌ及５×１０－６ｍｏl/Ｌ浓度Ａｓ２Ｏ３处理７２小时后ＶＥＧＦ浓度分别下降６６．４%和 ７８．０%。结论 ＶＥＧＦ在 ＣＭＬ患者骨髓细胞存在高表达;Ａｓ２Ｏ３可能通过抑制 ＶＥＧＦ的表达而阻断血管形成。     

激发型CD40单抗5C11对白血病细胞来源树突细胞的诱导作用及生物学特性

目的　探讨激发型CD40 单抗 5C11对白血病细胞来源的树突细胞 (DC)的诱导作用及其生物学特性的影响。方法　激发型CD40 单抗 5C11联合不同的细胞因子组合诱导白血病细胞分化为DC ,通过显微镜形态分析 ,流式细胞仪表型分析 ,活细胞计数 ,IL 6、IL 12ELISA定量检测及混合淋巴细胞反应和细胞毒性实验等细胞生物学、免疫学方法对其进行研究。结果　白血病患者外周血或骨髓的白血病细胞 ,在经激发型CD40 单抗 5C11联合不同的细胞因子组合培养后 ,能诱导成为大量成熟的DC ;形态学观察呈现典型的DC特征 ;流式细胞仪检测证实细胞表面上调性表达CD40 、CD80 、CD83 、CD86等分子 ;白血病细胞分化为DC后 ,IL 6分泌量减少 ,IL 12分泌量增加 (P <0 .0 5 ) ;同种异体混合淋巴细胞反应也显示 ,诱导的DC具有很强的刺激同种异体T细胞增殖的能力 ,这种增殖的T细胞对白血病细胞具有一定的杀伤作用。结论　激发型CD40 单抗 5C11联合细胞因子能诱导白血病细胞分化为功能性DC。这可能在白血病的过继免疫疗法中具有潜在的应用价值。     

慢病毒介导RNA干扰血管内皮生长因子基因增强K562细胞对STI571敏感性

目的： 探讨慢病毒载体介导RNA干扰（RNAi）抑制血管内皮生长因子（VEGF）基因表达对白血病细胞系K562增殖和凋亡的影响。 方法： 构建靶向VEGF基因的短发夹状RNA(shRNA)慢病毒载体,与慢病毒包装质粒通过脂质体转染至293T细胞,包装产生的病毒液感染K562细胞。采用实时荧光定量PCR、Western blotting、ELISA等方法检测RNAi对K562细胞VEGF mRNA和蛋白表达的影响;台盼蓝拒染法和MTT法分析转导VEGF-shRNA对K562细胞增殖的影响;流式细胞术检测经STI571(甲磺酸伊马替尼)作用后细胞凋亡变化情况。 结果： 构建VEGF基因shRNA慢病毒载体(pRNAT-shRNA),并成功将其导入K562细胞。与K562和K562-con（转导空载体）组细胞相比,转导pRNAT-shRNA的K562-shVEGF细胞VEGF mRNA和蛋白表达均显著下降;生长曲线提示K562-shVEGF细胞增殖速度减慢;在STI571作用下,K562-shVEGF细胞凋亡率较K562和K562 -con组细胞明显增高(P<0.05)。结论： 慢病毒载体介导的VEGF基因RNA干扰可有效抑制K562细胞增殖,并能够增强细胞对STI571的敏感性。     

412例骨髓增殖性肿瘤的JAK2V617F突变检测及其临床意义

目的 研究JAK2V617F突变在慢性骨髓增殖性肿瘤(MPN)中的发生率及其与临床表现和并发症间的相关性.方法 采用等位基因特异性PCR方法,检测MPN中JAK2V617F的发生情况.结果 412例MPN患者中,JAK2V617F突变277例.JAK2V617F在原发性血小板增多症(ET)、特发性骨髓纤维化(IMF)和不能分类的骨髓增殖性疾病(MPD-U)中发生率分别为55.9%、66.7%和52.4%(P>0.05),均低于真性红细胞增多症(PV,95.6%),差异有统计学意义(P<0.05).JAK2突变型患者的平均年龄高于野生型患者(P<0.01);JAK2突变型患者的白细胞计数和血红蛋白水平均高于野生型患者(P<0.05);JAK2突变型患者中血管事件的发生率高于野生型患者(P<0.05);JAK2突变型的MPD-U患者较野生型患者更易进展为典型MPN(P<0.05);在301例行染色体检查的患者中,未发现核型异常与JAK2V617F表达之间存在相关性.结论 检测MPD-U患者中JAK2V617F的突变情况对疾病发展有提示作用;JAK2V617F突变与MPN患者年龄、外周血细胞计数及血管事件并发症相关.     

同胞相合异基因造血干细胞移植受者移植前胸腺近输出功能与预后相关性研究

目的通过同胞相合异基因造血干细胞移植（allo—HSCT）受者移植前胸腺近输出功能与预后相关性研究，判断能否将受者移植前的胸腺近输出功能作为预后的指标。方法应用Real—time PCR的方法定量检测64例同胞全相合骨髓移植（MSD—BMT）患者移植前T细胞受体重排删除环（TREC）水平（作为胸腺近输出功能），并对所有移植后病例临床资料进行收集整理。通过统计学分析进行回顾性研究，用Log-rank检验比较生存率，运用COX比例风险回归模型进行单因素和多因素统计分析。同时检测70名正常供者的TREC水平作为正常对照。结果70名正常人外周血单个核细胞中TREC拷贝数为（3351±3711）拷贝／10^5细胞，年龄与TREC含量呈负相关。移植前患者TREC定量检测结果为（180±332）拷贝／10^5细胞，明显低于正常人。COX回归模型单因素分析显示移植前TREC水平与移植后长期生存、慢性移植物抗宿主病（cGVHD）有明显的相关性（P〈0．05），与CMV感染亦有一定的相关性（P=0．084），而与急性移植物抗宿主病（aGVHD）的发生无明显的相关性。COX回归模型多危险因素的分析结果显示，受者移植前TREC水平与移植后长期生存、cGVHD、CMV感染（P=0．07）等具有相关性，与aGVHD的发生无明显相关性。其结果与单一TREC因素对移植后的预后指标的影响一致。结论接受MSD—BMT患者移植前的胸腺近输出功能与移植预后具有明显的相关性，可以作为影响allo—HSCT后独立的预后因素。     

412例骨髓增殖性肿瘤的JAK2V617F突变检测及其临床意义

目的 研究JAK2V617F突变在慢性骨髓增殖性肿瘤(MPN)中的发生率及其与临床表现和并发症间的相关性.方法 采用等位基因特异性PCR方法,检测MPN中JAK2V617F的发生情况.结果 412例MPN患者中,JAK2V617F突变277例.JAK2V617F在原发性血小板增多症(ET)、特发性骨髓纤维化(IMF)和不能分类的骨髓增殖性疾病(MPD-U)中发生率分别为55.9%、66.7%和52.4%(P>0.05),均低于真性红细胞增多症(PV,95.6%),差异有统计学意义(P<0.05).JAK2突变型患者的平均年龄高于野生型患者(P<0.01);JAK2突变型患者的白细胞计数和血红蛋白水平均高于野生型患者(P<0.05);JAK2突变型患者中血管事件的发生率高于野生型患者(P<0.05);JAK2突变型的MPD-U患者较野生型患者更易进展为典型MPN(P<0.05);在301例行染色体检查的患者中,未发现核型异常与JAK2V617F表达之间存在相关性.结论 检测MPD-U患者中JAK2V617F的突变情况对疾病发展有提示作用;JAK2V617F突变与MPN患者年龄、外周血细胞计数及血管事件并发症相关.     

As2O3与STI571单用及联用对K562细胞bcr-abl磷酸化的影响

目的 研究As2O3单用及联用ST1571对K562细胞bcr-abl蛋白酪氨酸磷酸化的影响。探讨其抗白血病的分子机制,为As2O3和ST1571联合应用治疗CML提供理论依据。方法 采用细胞增生实验检测细胞生长;采用Annexin-V／PI双染实验、DNA的PI染色及DNA电泳等方法检测细胞凋亡：运用免疫沉淀和Western blot检测K562细胞bcr-abl蛋白酪氨酸磷酸化水平。结果 As2O3和ST1571明显抑制K562细胞生长。并检测出凋亡细胞群。DNA电泳出现“梯”状条带;bcr-Abl蛋白酪氨酸磷酸化水平出现时间剂量依赖性下调。结论 As2O3和ST1571能诱导K562细胞凋亡和抑制其增生．两药联用具有协同作用．机制似与下调K562细胞bcr-abl蛋白酪氨酸磷酸化有关。     

不同类型造血干细胞移植后巨细胞病毒感染的监测

目的观察在不同类型造血干细胞移植中巨细胞病毒感染状况。方法应用半巢式PCR技术定期检测了2001-03~2003-07苏州大学附属第一医院住院病人55例移植病人外周血标本,比较不同类型移植CMV-DNA阳性率的差别。结果在检测的462份标本中,有285份为阳性,33/55(60%)患者CMV-DNA阳性,非清髓性造血干细胞移植(NST)的阳性检出率为15/17(88·2%),亲缘间外周血造血干细胞移植(PBSCT)的阳性检出率为3/7(42·9%),非亲缘性骨髓移植(UR-BMT)的阳性检出率为7/11(63·6%),亲缘性骨髓移植(R-BMT)的阳性检出率为8/20(40·0%)。NST与PBSCT、R-BMT的巨细胞病毒感染率差别显著(χ~2=5·44,P<0·05;χ~2=9·14,P<0·05),NST与UR-BMT(χ~2=2·39,P>0·05)间的差别无统计学意义。结论巨细胞病毒感染在不同的造血干细胞移植方式可能存在差异。