卡波济肉瘤相关疱疹病毒包膜糖蛋白K8.1B全长cDNA的克隆及在真核细胞中的表达

目的:分离、克隆卡波济肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)包膜糖蛋白K8.1B全长cDNA,并将其置于真核细胞中进行表达。方法:用K8.1B基因设计一对PCR引物,其5’端分别引入BamHI和XhoI酶切位点。以佛波酯(TPA)刺激的原发性渗出性淋巴瘤(PEL)细胞系BCBL-1细胞总RNA为模板,通过RT-PCR扩增KSHVK8.1B编码序列,经双酶切后克隆进pcDNA3.1( )载体中,构建含K8.1BcDNA的重组真核表达质粒。重组质粒经酶切鉴定、核酸序列测定和分析后转染人胚肾293细胞,经G418筛选获细胞克隆。用间接免疫荧光染色(IFA)检测K8.1BcDNA编码蛋白在293细胞中的表达状况。结果:RT-PCR分离、克隆的K8.1BcDNA全长501bp,核酸序列分析显示,该基因与Genbank中已登记的K8.1B编码基因呈现100%同源性。经IFA证实该重组蛋白为KSHVK8.1B特异性蛋白。结论:KSHV包膜糖蛋白K8.1B编码cDNA在293细胞中获得了正确表达。     

FDFT1基因重组慢病毒表达载体的构建及其表达测定

目的 构建法尼基二磷酸法尼基转移酶1(farnesyl diphosphate farnesyl transferase 1,FDFT1)基因重组质粒并在人胚肾上皮细胞(293T)验证质粒表达.方法 设计FDFT1基因引物并经两次PCR扩增获取FDFT1目的基因;用相应的限制性内切酶将pCDH-CMV-MCS-EF1-...     

重组分泌型人类免疫缺陷病毒Tat蛋白在真核细胞中的表达及活性检测

目的 构建人类免疫缺陷病毒病毒 tat基因的重组分泌型真核表达载体并在真核细胞中表达,检测表达的重组蛋白活性。方法 聚合酶链反应（PCR）从重组质粒pcDNA3．1（＋）/Tat中扩增tat基因,利用 HindⅢ和Bam HⅠ酶切位点分别将tat基因正向、反向插入分泌型载体pSecT ag ,获得正向插入克隆（pSecT at ）和反向插入克隆（pSecTat-AS）,经双酶切鉴定连接成功后,利用测序鉴定其序列和插入方向。将构建的重组质粒转染293细胞,利用Western blot法检测Tat蛋白的表达。进而将重组质粒与LTR-CAT报告质粒共转染293细胞和BCBL-1细胞,CAT-酶联免疫吸附试验（ELISA）检测其细胞内CAT表达,从而检测Tat蛋白的活性。最后将转染重组质粒的293细胞与转染LTR-CAT报告质粒的BCBL-1细胞用Transwell培养系统共培养,CAT-ELISA检测分泌型Tat蛋白的旁分泌调控活性。结果 PCR扩增产物在10 g/L琼脂糖凝胶上约300 bp位置出现条带,与预期的324 bp大小相符;经HindⅢ和BamHⅠ分别酶切鉴定,获得2个正向克隆;正向克隆经测序,克隆的 tat基因序列与Gen-Bank中登记的HIV-1 tat基因100％同源。正向克隆质粒转染293细胞后,Western blot法检测观察到约19×10^3蛋白条带。正向克隆质粒与LTR-CAT报告质粒共转染293细胞和BCBL-1细胞CAT 表达量高于反向克隆质粒转染细胞（P＜0．05）。与反向克隆对照相比,与正向克隆转染的293细胞共培养的BCBL-1细胞CAT表达量更高（P＜0．05）。结论 成功构建 HIV-1 tat基因基因分泌型真核表达载体,该载体不但可在真核细胞内表达具有调控活性的T at蛋白,表达的Tat蛋白还可分泌至细胞外并具有调控活性。     

含HIV-1 Tat基因重组反转录病毒表达载体构建与表达Tat蛋白功能检测

目的：构建含HIV-1 Tat基因重组反转录病毒表达载体及评价表达Tat蛋白的功能。方法：使用HindⅢ将HIV-1 Tat101蛋白编码基因从pEV质粒中切出，插入到表达质粒LZRSpBMN—Z中，构建成重组反转录病毒表达质粒IZRS-Tratl01。采用磷酸钙转染法将重组质粒LZRS-Tat101转染进含反转录病毒erw、gal和pol编码基因的包装细胞phoenix(φNX)中，嘌呤霉素筛选获得稳定细胞系。免疫组化(IHC)染色检查Tat在临时转染和稳定转染删x细胞中的表达水平。收集临时转染和稳定转染包装细胞分泌的病毒上清，并分别感染293细胞，Western blot检测Tat在293中表达。与此同时，收集感染293细胞培养上清，加入到HL3T1细胞(HELa—HIV-1-LTR／CAT报告基因)中，共培养72h后收集细胞，提取蛋白作CAT活性检测。结果：①含Tat101基因重组反转录病毒表达质粒转染包装细胞后，Tat在临时转染φNX中表达水平显高于在稳定转染中的水平；②临时转染病感染293细胞，Tat在感染细胞中得到了表达，且分泌至上清中的Tat蛋白能够激活靶细胞HL3T1中HIV-1的LTR启动子，使得其下游的CAT基因得到表达。结论：重组IZRS-Tat101反转录病毒能够在其感染靶细胞中表达Tat蛋白，且表达蛋白具有转录激活功能。     

MOOC与云课堂混合式教学模式在内科学教学中的应用研究

目的 探索MOOC与云课堂混合式教学模式在内科学临床教学中的应用效果。方法 将181名昆明医科大学的大四年级医学本科生分为试验组97名（MOOC与云课堂混合式教学模式）和对照组84名（传统临床教学模式）,比较两组的内科学成绩及调查问卷结果。结果与对照组相比,试验组的内科学成绩显著增高,差异有统计学意义（P <0.05）。调查问卷结果显示,多数学生认为MOOC与云课堂混合式教学模式较传统教学模式能提高学生的自主学习能力（计划与控制、自我监督）和学习效果,差异有统计学意义（P <0.05）。结论 MOOC与云课堂混合式教学模式优于传统教学模式,可提升学生的学习效果,建立科学的临床思维,提高教学质量。     

卡波氏肉瘤相关疱疹病毒ORF65抗体的制备及其特异性检测

目的：制备高效价卡波氏肉瘤相关疱疹病毒（KSHV）病毒ORF65衣壳蛋白抗体并检测其特异性。方法将人工合成的ORF65蛋白抗原肽经弗氏佐剂乳化,在家兔背部、颌下等皮下多点免疫注射,间隔2周免疫,共4次。末次免疫后1周取兔血清,ELISA法检测兔免疫血清抗体IgG抗体水平。进一步采用免疫荧光、Western blot检测制备的抗血清中与ORF65结合的特异性。结果家兔在全程免疫后产生了高效价的特异性抗体,最高滴度达1∶12800。免疫荧光检测显示,与未经佛波酯（TPA）刺激的BCBL‐1细胞相比,兔抗血清主要结合于BCBL‐1细胞胞质,与ORF65蛋白在细胞内表达位置一致。Western blot结果显示在21 kD处有特异性蛋白条带,其大小与预期的ORF65蛋白大小相符,同时经T PA刺激的BCBL‐1细胞中ORF65蛋白表达量高于对照组,与ORF65蛋白裂解期蛋白的特性相符。结论用ORF65衣壳蛋白抗原肽段免疫家兔,可成功制备高效价的特异性抗血清,该抗体可与KSHV病毒ORF65蛋白特异性结合。     

生物材料及细胞外基质与骨形成研究进展

骨修复一直是骨科界的难题之一，许多学者进行了相关研究。近二十多年来，随着生物化学和分子生物学研究的发展，发现细胞的附着与细胞表面的受体及细胞外基质表面的特定位点有关，成骨细胞成骨活性与细胞外基质(extracellar matrix，ECM)有着密切的相关性，ECM的成分包括有机和无机成分两类，对骨形成起着主要作用的有骨形态蛋白(bone morohgenetic proteins，BMP)，纤维粘连蛋白(fibronectin，FN)，层粘蛋白(laminin，LN)，波基结合素(vitronectin，VN)等。     

戊酸雌二醇片联合米索前列醇预处理对宫内节育器取出术患者宫颈软化率及术中疼痛的影响

目的探究戊酸雌二醇片联合米索前列醇预处理对宫内节育器取出术患者宫颈软化率及术中疼痛的影响。方法选取医院2016年4月至2019年6月收治的接受宫内节育器取出术的患者60例作为研究对象,采用双盲随机法分为对照组和试验组,各30例。两组均接受超声监护下的宫内节育器取出术,试验组在术前给予戊酸雌二醇片联合米索前列醇预处理,比较两组宫颈软化情况、宫内节育器取出术效果、疼痛情况。结果试验组宫颈软化率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);试验组手术成功率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);试验组视觉模拟评分法(VAS)评分低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论宫内节育器取出术患者术前给予戊酸雌二醇片联合米索前列醇预处理,有助于提升宫颈软化率及手术成功率,降低患者术中疼痛。     

先天性双眼巨大黄斑缺损伴脉络膜缺损一例报告

大面积黄斑缺损在临床并不少见,但黄斑缺损伴脉 络膜缺损较为罕见。本院遇见一例,现报告如下: 周×,女,15岁。双眼自幼视力差,双眼球不自主地转动,左眼平时看物时需眯眼斜看,既往史及家族史无特殊,父母为非近亲结婚,全身检查未见异常。 眼科检查:视力右:0.08,左:0.08,加镜均不能矫正,双眼球水平震颤,左眼外斜10°。双眼眼前节未见异常。眼底检查:双眼视盘呈小椭圆形,右眼黄斑部缺损,约 4×5PD大小,表面附有较多色素,离缺损区约2.5PD的颞侧见大面积的脉络膜缺损区,     

米非司酮治疗子宫肌瘤的效果观察

目的：探讨米非司酮治疗子宫肌瘤的临床效果。方法：将42例确诊为子宫肌瘤的患者进行药物治疗，口服米非司酮25mg，每日1次，连服三个月为一疗程。在治疗前后B超测量子宫体积、肌瘤体积；检测血红蛋白、尿常规、肝功能、卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)、雌激素(E2)、孕酮(P)、泌乳素(PRL)、雄激素(T)等指标。结果：所有患者治疗期间均闭经，症状消失，血红蛋白上升。子宫及子宫肌瘤体积均缩小，缩小率分别为31.18％和45.17％(P＜0.01)。血FSH、LH、E2、P较治疗前降低(P＜0.01)，其中的E2、P下降最显著，而PRL和T用药前后变化不明显。结论：米非司酮治疗子宫肌瘤效果好，副反应小，是一种理想的治疗药物。