雷公藤多甙片联合前列地尔治疗糖尿病肾病的临床效果研究

目的 探究雷公藤多甙片联合前列地尔治疗糖尿病肾病(DN)的临床效果.方法 整群选取该院2013年1月—2015年7月收治的88例糖尿病肾病患者作为研究对象,采取随机数字表法将所有患者分为研究组(44例)和对照组(44例),对照组患者予以前列地尔治疗,研究组患者在对照组治疗基础上联合雷公藤多甙片治疗,对比两组患者治疗后临床治疗效果及各项生化指标(24 h尿蛋白定量、血肌酐、血尿素氮、血白蛋白、三酰甘油)、不良反应情况.结果 治疗后两组患者总有效率对比,研究组总有效率为97.73%,对照组为84.09%,研究组总有效率明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);两组治疗后24 h尿蛋白定量、血白蛋白、三酰甘油指标对比,研究组均明显优于对照组,差异有统计学意义(P<0.01);研究组治疗后总不良反应率为2.27%,对照组为13.64%,研究组总不良反应率明显低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05).结论 糖尿病肾病患者采取雷公藤多甙片联合前列地尔治疗临床效果显著,可明显改善患者临床症状,促进患者更快康复,却不良反应少,安全可靠,具有极高临床应用与推广价值.     

1型人类免疫缺陷病毒tat基因重组分泌型真核表达载体的构建

目的构建人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)tat基因分泌型真核表达载体。方法聚合酶链反应(PCR)法从缺失pol基因的重组HIV-1基因组pNL4-3中扩增tat基因;将PCR获得的tat基因片段和pSecTag2B分泌型真核表达载体分别用Hind III酶切;pSecTag2B载体片段经小牛碱性磷酸酶去磷酸化后,用T4 DNA连接酶将tat基因与pSecTag2B载体片段连接过夜并转化感受态大肠杆菌DH5α,提取阳性克隆质粒进行Hind III酶切鉴定,并利用Nco I酶切鉴定克隆的tat基因反向。最后选取正向tat基因克隆质粒送基因测序。结果 PCR扩增产物在1%琼脂糖凝胶上约320bp位置出现条带,与预期的324bp大小一致;经Hind III和Nco I分别酶切鉴定,获得2个正向克隆;正向克隆经测序,克隆的tat基因序列与Genbank中登记的HIV-1 tat基因100%同源。结论本研究方法可以成功地构建HIV-1 tat基因分泌型真核表达载体。     

改良盆底重建术治疗盆腔脏器脱垂临床疗效观察

目的观察改良盆底重建术和经阴道子宫切除术加阴道前后壁修补术治疗盆腔脏器脱垂性疾病的效果。方法回顾性分析2006年1月～2011年12月106例POP患者的临床资料,其中传统组58例行阴式子宫切除加阴道前后壁修补术,重建组48例行改良盆底重建术,比较两组手术时间、术中出血、排气时间、术后住院时间及疗效等情况。结果重建组手术时间、术中出血、排气时间、术后住院时间分别是(95.0±34.0)min、(157.1±65.7)mL、(23.5±6.5)h、(4.8±1.7)d;传统组分别为(115.0±39.3)min、(177.5±115.1)mL、(48.6±5.8)h,(5.1±1.8)d,两组手术时间和排气时间差异均有统计学意义(P<0.05)。重建组及传统组总有效率分别为95.83%和84.48%,重建组明显优于传统组(P<0.05)。结论经阴道子宫切除术加阴道前后壁修补术和改良全盆底重建术均是治疗POP的有效方法。改良盆底重建术能更好地修补盆腔组织缺陷,实现结构组织重建和替代,短期疗效稳固。     

案例法在医学微生物学教学中的应用

在医学微生物学教学改革实践中,对传统讲授式教学与案例法教学进行比较。结果显示,案例法教学组学生的分析题成绩、总成绩均比传统讲授教学组好,差异有统计学意义(P<0.01)。比较案例教学法的优劣,以此提出相应对策,以获得更好的教学效果。     

重楼水提物对肝癌细胞HepG2增殖及凋亡的影响

目的 探讨重楼水提物对人肝癌HepG2细胞株增殖和凋亡的影响.方法 以体外培养的肝癌HepG2细胞为研究对象,MTT法检测重楼对肝癌HepG2细胞增殖的抑制作用,流式细胞仪Annexin V/PI 双染法检测重楼对其凋亡的影响,ELISA法检测Bcl-2、Bax 蛋白表达的情况.结果 不同浓度重楼水提物能有效抑制HepG2细胞的增殖,且呈时间及浓度依赖性,作用效果在12 μg/ml时抑制效果最好（P〈0.01）.12 μg/ml重楼水提物作用HepG2细胞24 h、48 h后,结果表明HepG2随着重楼水提物作用时间的延长,细胞凋亡率增加,与阴性对照组相比,差异有统计学意义（P〈0.01）.12 μg/ml重楼水提物作用HepG2 细胞24 h后,Bcl-2蛋白表达降低,Bax蛋白表达增加,与阴性对照组相比,差异有统计学意义（P〈0.05）.结论 重楼水提物能抑制HepG2细胞的体外增殖,抑制作用表现出时效关系,其机制可能与促进细胞凋亡、降低Bcl-2蛋白表达、增加Bax蛋白表达有关.     

人类疱疹病毒8型包膜糖蛋白编码基因K8.1的分离、克隆及在大肠杆菌中的表达

目的：分离、克隆人类疱疹病毒8型(HHV-8)包膜糖蛋白K8．1编码基因，并置于大肠杆菌中作融合表达。方法：设计一对PCR引物，在引物的5′端分别引入BamHⅠ、XhoⅠ酶切位点，以佛波酯(TPA)刺激的原发性渗出性淋巴瘤(PEL)细胞系BCBL-1细胞总DNA为模板，PCR扩增出K8．1编码基因，克隆至原核表达载体pGEX-6p-1中，构建含K8．1基因重组质粒。重组质粒转化大肠杆菌(E.coli)BL21感受态细胞，以异丙基硫代-β—D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达融合蛋白。结果：分离、克隆的411bp序列与基因数据库中所登记的HHV-8 K8．1序列呈现100％同源性。IPTG诱导后的菌体，经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)，显示有一个41ku的融合表达蛋白产生。结论：HHV-8K8．1编码基因在E.coli中初步获得正确表达。     

卡波济肉瘤相关疱疹病毒潜伏相关核抗原编码基因的克隆及表达

目的：分离卡波济肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)潜伏相关核心抗原(LANA)羧基端基因(ORF73C)，并在大肠杆菌中克隆和表达。方法：设计一对PCR引物，在引物的5’端分别引入BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ酶切位点，提取稳定状态的BCBL-1细胞的总DNA作模板，通过PCR扩增KSHV ORF73C，PCR产物经双酶切后按正确的读码框克隆进原核表达质粒pGEx-6p-1中，并转化大肠杆菌感受态细胞BL21，以异丙基硫代-β—D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达融合蛋白。结果：经核酸序列测定及分析，分离、克隆的ORF73C基因与基因数据库中登记的ORF73基因的羧基端的621bp的序列有99％同源性。经IPTG诱导的重组质粒转化菌体SDS-聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)电泳显示有大小约为46ku的融合蛋白表达。结论：初步表明ORF73C基因在大肠杆菌中获得正确表达。     

角膜曲率对准分子激光屈光性角膜切削术手术效果的影响

目的 :探讨角膜曲率对角膜屈光手术效果的影响及近视患者角膜曲率的部分规律。方法 :检查所有手术眼术前角膜曲率 ,按角膜曲率的高低分为 10组 ,分析对比每一组的人数、手术效果 ;对比分析所有术眼术前两眼曲率差值。结果 :①发现近视眼角膜角膜曲率的分布曲线。②各个组别的近视眼手术后达到或超过术前最佳矫正视力的百分比近似。③双眼的角膜曲率的差值最小为 0D ,最大为 0 .75D ,平均为 0 .2 6± 0 .2 2D。结论 :①角膜曲率的高低对准分子激光屈光性角膜切削术的疗效没有影响。②近视眼的角膜曲率分布有一定的规律。③双眼角膜曲率差值小。     

卡波济肉瘤相关疱疹病毒包膜糖蛋白K8.1单克隆抗体的鉴定

目的:对已制备并经初筛的卡波济肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)包膜糖蛋白K8.1单克隆抗体进行特异性鉴定。方法:采用酶联免疫吸附试验(ELISA),经3次克隆选择,筛选出能稳定分泌针对K8.1蛋白单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株共9株。采用Westernblot法评价9株杂交瘤细胞培养上清识别原核表达重组K8.1蛋白和原发性渗出性淋巴瘤(PEL)细胞系BCBL-1中KSHVK8.1包膜糖蛋白的能力。结果:筛选了9株能够稳定分泌抗K8.1单克隆抗体的杂交瘤细胞株;Westernblot法显示,9株单抗均能特异性识别原核表达K8.1/GST融合蛋白和BCBL-1中KSHVK8.1包膜糖蛋白。结论:成功制备了KSHV包膜糖蛋白K8.1单克隆抗体。     

人类疱疹病毒8型病毒干扰素调节因子编码基因的克隆及在真核细胞中的表达

目的:分离、克隆人类疱疹病毒8型(HHV-8)编码的病毒干扰素调节因子(virusinterferonregulatoryfactor,vIRF)基因K9,并将其导入真核细胞中进行表达。方法:根据GenBank登记的K9基因核苷酸序列设计一对PCR引物,其5′端分别引入HindⅢ和BamHⅠ酶切位点。以原发性渗出性淋巴瘤(PEL)细胞系BCBL-1细胞总DNA为模板,PCR扩增K9基因,经双酶切后克隆进真核表达载体pcDNA3.1( )中,构建重组真核表达质粒pK9。为了便于蛋白检测,再设计第二对引物,上游引物不变,在下游引物5′端引入了Flag序列。以质粒pK9为模板再次PCR,扩增K9-Flag基因,并把K9-Flag序列克隆入pcDNA3.1( )中,得到重组质粒pK9F。重组质粒经酶切鉴定,核酸序列测定和分析后瞬时转染NIH3T3细胞,用RT-PCR、Westernblot分别从核酸和蛋白水平检测K9基因的表达情况。结果:PCR分离、克隆的K9-Flag序列全长1380bp,核酸序列分析显示克隆的K9基因与GenBank中己经登记的K9基因序列100%同源,引入的Flag序列完全正确;RT-PCR和Westernblot都在K9预期位置检测到特异性条带。结论:HHV-8K9基因在NIH3T3细胞中获得了正确表达。