人MUCI/Y基因真核表达载体的构建及其在COS/7细胞中的表达

MUCl/Y是1994年发现的新基因,其蛋白锚定于细胞膜。研究表明,MUCl/Y具有膜受体的特征,可能作为一种膜表面的重要分子通过ras信号传导通路参与细胞的恶性转化过程;进一步的动物实验表明,MUCl/Y的表达具有肿瘤特异性。由此推测,MUCl/Y可能是一种肿瘤主动特异性免疫治疗的理想靶分子,但迄今为止,MUCl/Y基因及其编码蛋白的功能尚未明确,因此,构建人MUCl/Y全长cDNA的真核表达载体,将对进一步研究该基因的功能以及以MUCl/Y为靶点的肿瘤核酸疫苗的制备,具有重要意义。     

HCA520, a novel tumor associated antigen,involved in cell proliferation and apoptosis

Objective: Tumor associated antigen encoding gene HCA520 (AF146019) was identified by screening a human hepatocellular carcinoma expressing cDNA library using SEREX technique. In this experiment we studied the effect of HCA520 on cell proliferation and apoptosis.Methods: Gene HCA520 was gained by PCR and transfected into 293 cells. The stable expression cells were obtained by G418 selection. The cell proliferation was measured by [^3H]-TdR uptake and apoptosis assay was measured by FACS. Results: Eukaryotic expression plasmid pcDNA3-HCA520 was constructed and its stable transfectants were obtained. Overexpression of HCA520 inhibited the cell proliferation and enhanced cell apoptosis after serum deprivation. Conclusion: HCA520 is a novel tumor associated antigen that can affect cell proliferation and apoptosis.     

PJ-CW对TIL抗肿瘤活性的调节作用

PJ-CW(Pseu-domonas Jinanensis Celwall,PJ-CW)是济南假单胞菌的细胞壁成分,是一种新型的免疫调节剂.本文研究了PJ-CW对TIL的扩增及抗肿瘤活性的影响.结果表明:1.PJ-CW可明显增强TIL对IL-2的增殖反应性,于培养早期(第5天)已有明显的升高,TIL的有效扩增时期明显缩短.TIL的扩增速率明显加快,于培养后第12～16天,细胞可达治疗数量级(10~(10)).2.将TIL悬浮于含500U/ml IL-2、25μg/ml PJ-CW的环境中孵育时,TIL细胞产生IL-2和IFN-γ的时     

生物信息学在医学研究中的应用进展

随着高通量技术的出现及其在疾病基因组、蛋白组学研究中的应用,生物信息学在解读基因组、转录组及蛋白质组学分析产生的海量数据中发挥着越来越重要的作用。生物信息学在致病基因寻找、药物有效靶点筛选等医学研究各领域的发展日益深入。现就生物信息学在基础医学、临床医学及药物开发研究中的应用进展进行综述。     

趋化因子受体CCR7在胃癌患者外周血淋巴细胞中的表达及其意义

目的研究趋化因子受体CCR7在胃癌患者外周血淋巴细胞各亚群的表达，并与健康人进行比较，探讨其与临床病理分期之间的相关性。方法分别收集健康人组、胃癌患者术前和术后外周血，进行荧光标记和红细胞裂解后，流式细胞仪检测CCR7在外周血淋巴细胞各亚群的表达，并分析其与临床病理分期之间的相关性。结果与健康人组相比，术前胃癌患者外周血T细胞各亚群中CCR7的表达明显下降，术后CCR7在外周血T细胞各亚群的表达明显升高。CCR7在胃癌患者外周血淋巴细胞中的表达与临床病理分期密切相关，Ⅰ、Ⅱ期患者外周血淋巴细胞中CCR7的表达率明显高于Ⅲ、Ⅳ期胃癌患者（P＜0.05）。结论趋化因子受体CCR7在胃癌患者外周血淋巴细胞中的表达明显降低，其表达水平与胃癌的临床病理分期相关。     

食管癌患者血清可溶性肿瘤坏死因子受体水平及临床意义

目的　探讨食管癌患者的血清可溶性肿瘤坏死因子受体 (sTNF RI、sTNF RII)水平及其临床意义。方法　采用双抗体夹心酶联免疫吸附法检测 5 6例食管癌患者和 2 0例正常人血清sTNF RI、sTNF RII及癌胚抗原(CEA)水平。结果　食管癌患者的血清sTNF RI显著高于健康对照组 (P <0 0 0 1) ,而sTNF RII则明显低于健康对照组 (P <0 0 5 ) ,sTNF RII与sTNF RI的比值明显低于健康对照组 (P <0 0 0 1)。血清sTNF RII变化的敏感性明显高于血清CEA。结论　血清sTNF RI和sTNF RII水平检测在食管癌的辅助诊断具有一定的临床应用价值。     

应用基因芯片技术检测乙型肝炎病毒前-C区/BCP区基因突变的研究

目的　探讨利用基因芯片技术检测乙型肝炎病毒 (HBV)前 C区 /BCP区基因突变方法的临床价值及前 C区 /BCP区基因突变的临床意义。方法　应用基因芯片技术检测 4 6例急慢性肝病的HBV前 C区A1896 (nt1896G→A)、A1899(nt1899G→A)及HBVC基因启动子 (BCP)T176 2A176 4 (nt176 2A→T、nt176 4G→A)四位点突变 ,并探讨该技术的临床应用价值。结果　用基因芯片法测定HBV基因特定变异位点特异性强 ,阳性率为 87 0 %。A1896突变 18例 (4 5 0 % ) ,A1899突变 10例 (2 5 0 % ) ,T176 2A176 4联合突变 30例(75 0 % ) ,多位点突变 14例(35 0 % )。各变异组与未变异组比较 ,肝功损害均有显著性差异 (P <0 0 5～ 0 0 1)。前 C区 /BCP区基因突变在乙型肝炎肝硬化及慢性乙型肝炎中较为常见 ,在急性乙型肝炎中未检出。结论　应用基因芯片法测定HBV特定变异位点特异性强 ,可一次同时检测多个突变位点 ,具有一定的临床应用价值。     

人ligatin样基因HCA56的克隆及其生物信息学分析

目的　利用 SEREX方法筛选人肝细胞癌 (HCC) c DNA表达文库 ,克隆能引起机体体液免疫应答的抗原编码基因 ,并对其进行生物信息学分析 ,以指导对新克隆基因功能的研究。方法　采用 ZAP- c DNAGigapack Gold Cloning试剂盒构建人 HCC c DNA表达文库 ,用患者自体血清进行筛选 ,对筛选得到的阳性克隆进行序列测定。通过生物信息学对筛选得到的阳性克隆 HCA5 6进行染色体定位、基因结构分析、蛋白序列预测以及相似性搜索和功能分析。逆转录多聚酶链反应 (RT- PCR)检测 HCA5 6的组织表达谱。结果　通过对一个c DNA表达文库的筛选 ,获得了一个血清反应阳性克隆 HCA5 6 ,全长 2 0 2 1bp,编码 5 84个氨基酸 ,定位于染色体1q31～ q32。数据库搜寻表明它与人 ligatin编码基因片段有 95 %的相似性。 RT- PCR显示 HCA5 6广泛分布于各种正常组织。结论　 HCA5 6很可能是 ligatin的全长编码基因 ,生物信息学与分子生物学相互结合是进行新基因研究的有效方法     

谷氨酰胺对人肺泡Ⅱ型上皮细胞热休克蛋白70表达的影响

目的评价谷氨酰胺对人肺泡Ⅱ型上皮细胞系A549细胞热休克蛋白（HSP）70表达的影响。方法取人肺泡Ⅱ型上皮细胞系A549细胞,在不含谷氨酰胺的DMEM培养液中孵育24h作为空白对照组（C组）,43℃孵育1h、37℃恢复4h作为阳性对照组（PC组）,不同浓度（2、4、8、12和16 mmol/L）谷氨酰胺的DMEM培养液中孵育24h作为不同浓度谷氨酰胺诱导组（Gln2组、Gln4组、Gln8组、Gln（12）组和Gln（16）组）,8mmol/L谷氨酰胺的DMEM培养液中孵育不同时间（1、2、6、12、24和48 h）作为不同时间谷氨酰胺诱导组（T1组、T2组、T3组、T4组、T5组和T6组）。分别采用RT-PCR和Western blot法检测HSP70 mRNA和蛋白的表达。结果与C组比较,PC组和不同浓度谷氨酰胺诱导组人肺泡Ⅱ型上皮细胞系A549细胞HSPTO mRNA和蛋白的表达均升高,Gln8组HSP70 mRNA和蛋白表达水平高于Gln2组、Gln4组、Gln（12）组和Gln（16）组（P＜0．01）,而与PC组相比差异无统计学意义（P＞0．05）。与C组比较,PC组和不同时间谷氨酰胺诱导组HSP70 mRNA和蛋白的表达均升高,T5组HSP70 mRNA和蛋白表达水平高于T1组、T2组、T3组、T4组和T5组（P＜0．01）,而与PC组相比差异无统计学意义（P＞0．05）。结论谷氨酰胺可明显上调体外培养人肺泡Ⅱ型上皮细胞系A549细胞HSP70 mRNA和蛋白的表达,并呈浓度和时间依赖性。     

SELDI-TOF-MS在细胞信号转导通路研究中的应用进展

真核细胞的一个重要特征是具有复杂的信号转导系统.细胞通过其膜表面或胞内具有感受器样效应的蛋白与相应的信号分子结合而发挥信号转导子作用,调控细胞的增殖与分化[1].由于细胞信号转导通路错综复杂,传统的研究技术如聚丙烯酰胺凝胶电泳、抗体免疫沉淀、RNA干扰等无法满足大规模的检测和鉴定信号传递过程中差异表达的信号分子及关键蛋白的磷酸化.