shRNA沉默CDK2基因对B16-F1细胞小鼠皮下移植瘤的影响

目的 早期恶性黑色素瘤可以通过手术切除的方式得到缓解,发生转移的黑色素瘤由于其耐药性,预后较差.为探索治疗黑色素瘤的新方法,本研究探讨由慢病毒载体pUL介导的shRNA沉默CDK2基因对黑色素瘤细胞B16-F1皮下移植瘤生长的影响.方法 于C57BL/6小鼠右侧腹股沟皮下注射B16-F1细胞建立移植瘤模型,采用癌灶多点注射的方法分为空白对照组、阴性对照组和实验组(n=5).阴性对照组,采用癌灶多点注射的方法将携带NC-shRNA的重组慢病毒(滴度为2×108 TU/mL)导入肿瘤灶,每只小鼠200,μL,隔日1次,共6次,观察18 d;空白对照组,用与阴性对照组相同的方式方法向瘤体注射PBS,观察18 d;实验组,采用癌灶多点注射的方法将携带CDK2-shRNA的重组慢病毒(滴度为2×108 TU/mL)导入肿瘤灶,每只小鼠200 μL,隔日1次,共6次,观察18d.观察肿瘤生长情况并绘制肿瘤生长曲线,18 d后杀鼠取瘤称瘤质量,计算肿瘤生长抑制率,TUNEL检测肿瘤组织细胞凋亡情况,蛋白质印迹法检测肿瘤组织细胞中CDK2蛋白表达情况.结果 C57BL/6小鼠接种瘤细胞3d后均有肿瘤形成.治疗的第6天空白对照组、阴性对照组和实验组的肿瘤体积分别为(48.7±8.4)、(50.0±8.9)和(31.4±8.7) mm3,实验组与空白对照组和阴性对照组相比,肿瘤生长速度明显降低,差异有统计学意义,F=8.879,P=0.004.空白对照组、阴性对照组和实验组的肿瘤重量分别为(0.56±0.10)、(0.55±0.11)和(0.28±0.07)g,实验组与空白对照组和阴性对照组相比,肿瘤体质量明显降低,差异有统计学意义(F=13.659,P=0.001),实验组与空白对照组相比肿瘤生长抑制率为50.2％;空白对照组、阴性对照组和实验组的细胞凋亡指数分别为(7.73±1.08)％、(7.87±1.42)％和(32.27±3.62)％,实验组与空白对照组和阴性对照组相比,瘤细胞凋亡指数显著升高,差异有统计学意义,F=189.748,P＜0.001.实验组与空白对照组和阴性对照组相比,组织细胞中CDK2蛋白的表达显著降低,差异有统计学意义(F=293.346,P＜0.001),实验组相对于空白对照组CDK2蛋白表达的抑制率为50.4％.结论 重组慢病毒CDK2-shRNA沉默CDK2基因的表达能有效抑制B16-F1细胞移植瘤的生长,CDK2基因可能成为黑色素瘤基因治疗的有效靶点.     

653份乳腺癌组织标本的 ER-α36表达结果分析

目的：研究雌激素受体α36亚型(ER-α36)在乳腺癌组织的表达状态及其与乳腺癌发生、发展及临床预后的关系。方法选取653份乳腺癌组织标本,用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)技术和免疫组化技术检测组织中 ER-α36、雌激素受体α66亚型(ER-α66)、孕激素受体(PR)和人表皮生长因子受体-2(Her-2)的表达,分析 ER-α36的表达与上述指标及临床病理特征之间的关系。结果ER-α36的总体表达率为40%;在 Her-2阳性组织中的表达率为63%,明显高于阴性组的44%(P <0.05);在ER-α66/PR/Her-2三阴性组织中的表达率为66%,明显高于非三阴性组的35%(P <0.05);在 ER-α66阳性和阴性标本中及在PR 阳性和阴性标本中的表达率差异无统计学意义(P >0.05);在Ⅲ+Ⅳ期乳腺癌组织中的阳性表达率(54%)明显高于Ⅰ+Ⅱ期的28%(P <0.05);在淋巴结转移阳性乳腺癌组织中的表达率(55%)明显高于无转移组织的23%(P <0.05)。结论ER-α36可能在乳腺癌的发生、发展及淋巴结转移过程中具有重要作用,并与 Her-2的表达、乳腺癌分期及淋巴结转移有关,有望成为新的肿瘤标记物及临床诊治的新靶点。     

猪骨蛋白的氨基酸含量分析

目的:分析探讨猪骨蛋白的氨基酸的组成与含量。方法:猪骨蛋白经6N的盐酸水解,随后用日立850-Ⅱ型自动氨基酸分析仪分析。结果:猪骨蛋白中17种天然氨基酸的含量(W／W)为:Asp 4.75,Thr 1.49,Ser 2.10,Glu 8.61,Gly 17.65,Ala 7.34,Cys 0.28,Val 2.21,Met 0.57,Ile 1.06,Leu 2.69,Tyr 0.61,Phe 1.86,Lys3.00,His 0.64,Arg 6.27,Pro 11.58。结论:猪骨蛋白中含有多种氨基酸,其中Gly、Pro、Glu、Ala、Arg、Asp等6种氨基酸是猪骨蛋白中存在的主要氨基酸。     

冬凌草甲素逆转黑色素瘤细胞顺铂耐药的作用及机制

目的：探讨冬凌草甲素（Ori）逆转人黑色素瘤细胞顺铂（DDP）耐药的作用及其机制。方法：分别将黑色素瘤DDP耐药细胞A375/DDP和M14/DDP分为对照组、2μmol/L Ori组、4 mg/L DDP组和2μmol/L Ori+4 mg/L DDP组。CCK-8法、Transwell实验、Annexin Ⅴ-FITC/PI染色流式细胞术分别检测各组细胞的增殖活力、侵袭和迁移能力及凋亡水平，透射电子显微镜观察自噬小体，免疫荧光染色法观察微管相关蛋白轻链3(LC3)点状结构，WB法检测A375/DDP细胞自噬相关蛋白Beclin-1、p62、LC3Ⅱ和LC3Ⅰ的表达。结果:与4 mg/L DDP组相比，2μmol/L Ori+4 mg/L DDP组细胞增殖活力、迁移和侵袭能力均显著下降（均P<0.01），凋亡水平显著升高（P<0.01）。4 mg/L DDP组细胞中可见大量自噬小体以及LC3点状染色，但2μmol/L Ori+4 mg/L DDP组仅可见少量。与对照组相比，4 mg/L DDP组细胞中Beclin-1和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的蛋白表达水平均显著升高（均P<...