石蜡包埋组织目的基因原位逆转录—聚合酶链反应检测

目的：探讨原位逆转录－聚合酶链反应技术（ISRT－PCR）在普通制作石蜡包埋组织中的应用及价值，方法：应用直接法ISRT－PR方法对普通制作、石蜡包埋淋巴瘤组织中的丙型肝炎病毒（HCV）基因组序列进行检测。结果：从存档多年的福尔马林固定、普通制作石蜡包埋淋巴瘤组织中检测到HCV RNA。结论：ISRT－PCR可用于福尔马林固定、普通制作石蜡包埋组织中抵拷贝目的基础组序列的检测方法为常规制作的存档石蜡包埋组织的充分利用提供了一条新的途径。     

血清反应因子N端片段对鼻咽癌细胞增殖及迁移能力的影响

目的:探讨血清反应因子N端剪切片段(SRF-N)对鼻咽癌(NPC)细胞增殖和迁移能力的影响与机制.方法:应用SRF全长(SRF-Full,1～508 aa)、SRF-N(1～254 aa)及阴性对照(NC)慢病毒颗粒感染人NPC细胞系6-10B,经嘌呤霉素抗性筛选结合Western blot检测Flag标签化融合蛋白的...     

巨噬细胞迁移抑制因子与肿瘤关系的研究进展

巨噬细胞迁移抑制因子(MIF)作为一种多效性细胞因子和宿主免疫的调节分子,在机体免疫和疾病中发挥重要作用。MIF具有癌基因特性,其高表达可促进癌细胞存活、增殖、迁移、侵袭、转移、血管生成并抑制凋亡。MIF与抗肿瘤免疫密切相关,基于MIF为靶点的特异性抑制剂目前尚未得到广泛应用。本文就MIF在肿瘤发生和进展中的作用、机制、治疗靶点等方面的研究进展进行综述,展望基于MIF为靶点的抑制剂运用在肿瘤防治中的意义。     

SETD2基因敲除前后鼻咽癌细胞中定量蛋白组学研究及差异信号富集

目的分析甲基转移酶SETD2 表达改变对人鼻咽癌（NPC）细胞中蛋白表达谱的影响并富集差异信号通路。方法提取 SETD2基因敲除细胞株CNE1SETD2-KO和野生型细胞CNE1WT的总蛋白,利用Tandem Mass Tag（TMT）标记蛋白质定量技术和串联 质谱分析技术筛选出差异表达蛋白质,应用GO数据库对差异表达蛋白质进行注释和富集,应用KEGG数据库进行差异蛋白质 涉及信号通路富集。结果以表达倍数（FC）≥1.2倍且P<0.05为筛选标准,SETD2基因敲除的CNE1细胞鉴别出2049个差异表 达蛋白质,其中904个表达上调,1145个表达下调。GO功能注释结果表明,SETD2敲除后在生物过程（细胞过程及调节,细胞运 动、代谢过程及细胞组分的生物合成）、分子功能（催化活性及分子结合、转录因子活性）和细胞组分（胞膜、细胞器、大分子复合 物）等具有特征性。KEGG信号富集结果表明SETD2 敲除主要影响与肿瘤关系密切的信号有MAPK、PI3K-Akt、Ras、Rap1、 mTOR、Hippo、HIF-1、Wnt、AMPK、FoxO、ErbB、p53、JAK-STAT等。结论SETD2敲除后显著改变了NPC细胞中蛋白质表达特 征并影响多条与肿瘤关系密切的信号通路,研究结果为NPC的发病机制和治疗标靶筛选提供了参考。     

非霍奇金淋巴瘤中HCV感染、p53和bcl-6表达及其相关性研究

目的 :探讨非霍奇金淋巴瘤 (NHL)与丙型肝炎病毒 (HCV)感染的相关性及其可能发病机制。方法 :应用免疫组织化学S P法对 133例NHL和 2 5例良性淋巴组织病变 (BLPC)进行p5 3、bcl 6及HCVTORDJI 2 2蛋白的检测 ,对其中 5 8例NHL和全部BLPC进行HCVRNA的原位RT PCR检测。结果 :NHL中HCV感染阳性率 12 8% (17 133) ,BLPC中HCV感染阴性 ,两组比较差异有显著意义 ,P <0 0 5。NHL中p5 3阳性 71例 (5 3 4 % ) ,bcl 6阳性 5 2例 (39 1% ) ;BLPC中p5 3为阴性 ,bcl 6阳性 10例(40 0 % )。 17例HCV阳性NHL中p5 3阳性 13例 ,P <0 0 5 ,bcl 6阳性 8例。结论 :1)HCV感染与NHL之间有关 ;2 )HCV可能通过调控p5 3的表达而与NHL的发生有一定的关系 ;3)NHL中HCV的感染和bcl 6的表达可能是两个独立的事件     

基于网络药理学和分子对接探讨巴戟天抗动脉粥样硬化的靶点及信号通路

[目的]应用中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)及小分子药物靶点预测在线平台(Swiss Target Prediction)和疾病基因组数据库,结合分子对接技术,预测巴戟天抗动脉粥样硬化(As)的靶点及信号通路。[方法]通过中药网络药理学数据库及小分子药物靶点预测在线平台挖掘巴戟天的有效成分及其所对应的靶点,利用GeneCards、OMIM、Disgenet、UniProt收集并筛选As相关的疾病基因靶点,获取交集基因,将其导入String 11.5数据库中,构建疾病-药物蛋白互作分析(String-PPI)网络图,利用Cytoscape 3.9.1软件对关键靶点网络进行可视化;此外,运用Metascape网络在线平台进行GO、KEGG富集挖掘出其抗As的分子靶点,并通过KEGG数据库绘制通路图。最后,使用Autodock vina 1.1.2软件对核心化合物及核心靶点基因进行分子对接验证。[结果]通过以上数据库共收集得到包括β-谷甾醇和蒽醌在内的17个有效药物化合物、73个核心靶点和1 450个关键疾病基因;取交集后得到巴戟天治疗As的35个核心基因;经String-PPI...     

受体酪氨酸激酶Axl高表达促进鼻咽癌临床进展

目的:探讨受体酪氨酸激酶anexelekto(Axl)在鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)中的表达及意义。方法:采用免疫组化法检测78例NPC和32例鼻咽黏膜慢性炎中Axl的表达,分析Axl蛋白表达与NPC患者临床参数的相关性。常规培养NPC细胞,免疫荧光法检测不同分化NPC细胞系CNE1、CNE2Z及C666-1中Axl的蛋白表达情况。应用Axl特异性抑制剂TP-0903处理CNE1和C666-1细胞,CCK-8实验检测细胞的活力,流式细胞术检测细胞周期的分布,q PCR检测Axl和增殖细胞核抗原(PCNA)的mRNA表达,Western blot检测Axl及p-Axl蛋白的表达。结果:Axl蛋白定位于胞膜和胞质。NPC中Axl高表达阳性率显著高于鼻咽黏膜慢性炎(P0.01)。Axl高表达与患者年龄、性别及M分期无关,与临床分期、T分期和N分期呈正相关(P0.05)。Axl在高分化CNE1细胞中低表达,在低分化CNE2Z细胞和未分化C666-1细胞中表达水平明显增高。TP-0903呈浓度和时间依赖性抑制NPC细胞的活性,2 nmol/L TP-0903即具有显著抑制效应,能阻滞细胞周期于G0期,在降低Axl活性的同时也显著抑制PCNA的表达。结论:Axl高表达可促进NPC的临床进展;TP-0903显著抑制NPC细胞的增殖,提示Axl可能在NPC靶向治疗中具有一定的价值。     

基于CRISPR/Cas9技术构建SETD2基因敲除鼻咽癌细胞株并分析其增殖特性

目的:基于CRISPR/Cas9技术构建SETD2基因敲除鼻咽癌(NPC)细胞株,并对该细胞株的增殖特性进行分析。方法:采用RT-PCR及Western blot检测永生化鼻咽黏膜细胞系NP-69及不同分化NPC细胞系CNE1、CNE2Z和C666-1中SETD2的表达情况,筛选出SETD2高表达细胞系CNE1。应用CRISPR/Cas9技术敲除CNE1细胞中的SETD2基因,筛选SETD2稳定敲除细胞株。采用CCK-8和平板集落形成实验分析SETD2基因敲除前后CNE1细胞的增殖能力,流式细胞术检测细胞周期的分布,Western blot检测细胞周期相关蛋白的表达。结果:与NP-69细胞相比,随着细胞分化程度的降低,SETD2在CNE1、CNE2Z和C666-1细胞中的表达逐渐下降(P 0. 01)。基于CRISPR/Cas9方法成功地从15个转染了小向导RNA(small guide RNA,sgRNA)的CNE1细胞单克隆中筛选出2个SETD2稳定敲除的细胞株CNE1-SETD2-KO-#5和#9。CCK-8及平板集落形成实验结果证实,相对于CNE1-WT细胞,CNE1-SETD2-KO-#5和#9细胞的增殖能力增强(P 0. 05);流式细胞术分析表明,CNE1-SETD2-KO-#5和#9细胞G1期减少而G2/M和S期均增加(P 0. 05); Western blot证实,SETD2敲除后增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期素D1(cyclin D1)、cyclin B1、cyclin A2、cyclin E1、细胞周期素依赖性激酶2(CDK2)和CDK4表达增加,p21表达减少(P 0. 05)。结论:基于CRISPR/Ca9技术成功构建SETD2基因敲除NPC细胞株。NPC细胞中SETD2表达与细胞分化程度有关; SETD2表达缺失通过上调cyclin D1、cyclin B1、cyclin A2、cyclin E1、CDK2和CDK4并下调p21表达而促进细胞增殖。     

苦参碱对人卵巢癌细胞株HO-8910PM增殖及侵袭运动能力的影响

目的 研究苦参碱对人高转移卵巢癌细胞系HO-8910PM增殖及转移相关能力的影响及其作用机制.方法 以MTT法和台盼蓝拒染法检测苦参碱对人高转移卵巢癌HO-8910PM细胞增殖的影响;Transwell小室法检测其对HO-8910PM细胞侵袭运动能力的影响;考马斯亮蓝染色法检测不同质量浓度苦参碱对H0-8910PM细胞细胞骨架的改变及免疫细胞化学方法检测药物作用前后HO-8910PM细胞Ezrin蛋白的表达.结果 苦参碱对HO-8910PM细胞增殖抑制呈明显剂量和时间效应;1.5 g/L苦参碱能明显抑制细胞的增殖,作用6 h后能抑制HO-8910PM细胞体外侵袭人工基底膜和运动能力,抑制率分别为(41.52±10.76)%和(39.73±10.67)%;1.0、1.5g/L苦参碱作用HO-8910PM细胞24 h后使细胞骨架明显改变,并上调Ezrin蛋白的表达.结论 苦参碱能抑制高转移性人卵巢癌细胞HO-8910PM的增殖能力和侵袭运动能力,其抗肿瘤侵袭运动的机制与细胞骨架和Ezrin蛋白表达的改变有关.