Ruxolitinib对人红白血病HEL细胞增殖、凋亡作用的研究

目的 探讨JAK2抑制剂Ruxolitinib对人红白血病HEL细胞增殖、凋亡作用的机制.方法 用不同浓度(0、1、5、10、50、100、500 nmol/L)的Ruxolitinib处理HEL细胞,其中0nmol/L为对照组.CCK-8法检测细胞活力;Hoechst33342荧光染色检测细胞凋亡;流式细胞术检测细胞周期;罗丹明123检测线粒体膜电位变化;试剂盒检测Caspase-3/7活性;RT-PCR检测JAK2 mRNA水平;蛋白质印迹法检测p-JAK2、p-ERK、Bcl-2、Bim蛋白表达.结果 不同浓度Ruxolitinib作用HEL细胞48h后,细胞活力分别为(97.0±4.4)％、(92.0±3.9)％、(88.0±3.7)％、(81.0±3.1)％、(64.0±2.9)％、(38.0±2.2)％;Hoechst33342凋亡细胞染色显示100 nmol/L Ruxolitinib处理细胞48 h后,亮蓝色凋亡细胞[(49.21±1.80)％]较对照组[(10.02±1.40)％]增多(P＜o.05);流式细胞术结果显示100 nmol/L Ruxolitinib作用细胞48 h后G0/G1期细胞比率[(73.1±3.6)％]高于对照组[(45.2±3.0)％];1～500 nmol/L Ruxolitinib作用12、24 h后,HEL细胞线粒体膜电位降低,Caspase-3/7活性增强;RT-PCR结果显示,不同浓度Ruxolitinib处理HEL细胞48 h后JAK2 mRNA表达呈剂量依赖性减低;蛋白质印迹检测结果显示,实验组细胞p-JAK2、p-ERK、Bcl-2蛋白表达较对照组降低(均P＜0.01),Bim蛋白表达增加(P＜0.01).结论 Ruxolitinib可能通过抑制JAK2及ERK激酶途径诱导HEL细胞凋亡.     

参麦注射液对急性白血病化疗疗效及毒副作用的影响

目前,急性白血病的治疗以化疗为主,有效的化疗可延长生存期,改善生存质量,但化疗产生的骨髓抑制,心肝肾损害,机体免疫力低下等毒副作用往往影响治疗效果甚至使治疗不能继续,易并发感染,甚至严重的感染,导致病人死亡。我们采用参麦注射液联合化疗治疗急性白血病,可以有效降低化疗的毒副作用,现报道如下。     

儿童与成人急性白血病患者外周静脉留置中心静脉导管置管并发症的差异

目的:比较儿童与成年急性白血病患者外周静脉留置中心静脉导管(peripherally inserted central catheter,PICC)置管的并发症发生率,为不同类型患者提供更好的护理和治疗策略.方法:选取保定市第一医院52例儿童及100例成人急性白血病化疗行PICC置管患者,观察两组PICC置管后不同并发症及其发生率,探讨儿童与成人急性白血病PICC并发症的不同.结果:在儿童急性白血病PICC置管后出现并发症的总发生率为55.8％,显著高于成人急性白血病PICC置管后并发症总发生率的39.0％(x2=3.89,P＜0.05).其中感染发生率36.5％ vs.21.0％(x2=4.26,P＜0.05)、导管阻塞发生率23.1％ vs.11.0％(x2=3.89,P＜0.05);机械性静脉炎发生率19.2％ vs.5.0％(x2=7.79,P＜0.05).平均置管日儿童[(98.7±58.7)d]显著低于成人[(130.6±71.8)d](t=2.76,P＜0.01).非计划拔管率儿童为17.3％,显著高于成人的5.0％(x2=4.81,P＜0.05).结论:PICC置管后儿童与成人急性白血病患者各种并发症发生率及平均置管时间存在一定差异,可能与配合程度及年龄特点密切相关.     

酪氨酸激酶抑制剂甲磺酸伊马替尼对PTEN介导的K562细胞侵袭的影响

目的:研究酪氨酸激酶抑制剂甲磺酸伊马替尼对K562细胞PTEN信号转导的调控,以及对细胞侵袭功能的影响.方法:不同浓度甲磺酸伊马替尼作用K562细胞不同时间后,通过荧光定量PCR检测BCR/ABL、PTEN、FAK水平变化及相互关系,免疫细胞化学染色检测FAK蛋白水平,Transwell小室检测K562细胞侵袭功能.结果:2μg/mL甲磺酸伊马替尼作用K562细胞在36 h内,随着BCR/ABL融合基因表达减低,PTEN mRNA表达上调,FAK mRNA及蛋白表达下调,K562细胞侵袭功能明显减弱.作用48 h后,随着BCR/ABL融合基因的抑制减弱,PrEN表达进而减低,而FAK表达升高.BCR/ABL mRNA与PTEN mRNA呈负相关趋势,与FAK mRNA呈正相关趋势.结论:甲磺酸伊马替尼通过抑制BCR/ABL融合基因调控PTEN/FAK信号转导通路,参与抑制白血病K562细胞侵袭作用.     

PTEN/Akt/mTOR通路增加K562/ADM细胞化疗敏感性

目的 探讨K562/ADM细胞系中PTEN/Akt/mTOR信号通路对不同化疗药物敏感性的影响.方法 K562/ADM细胞分为未转染组、转染野生型PTEN组(Ad-PTEN-GFP)、转染空载体组(Ad-GFP),并与不同浓度雷帕霉素或三氧化二砷( As2 03)联合作用.通过MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡率,荧光定量PCR检测PTEN、mTOR、BCL-2及BAXmRNA水平,Western blot检测PTEN及Akt、p-Akt蛋白水平.结果 野生型PTEN对K562/ADM细胞最大增殖抑制率为32.3％,与未转染组及Ad-GFP组相比,Ad-PTEN-GFP组mTOR mRNA和p-Akt蛋白明显减低;雷帕霉素与As2 03联合应用后细胞增殖明显受抑,凋亡率(28.61％±1.46％)明显高于单药作用组(P＜0.05),BCL-2 mRNA表达降低,BAX mRNA表达增加,以联合干预组最为明显.结论 PTEN/Akt/mTOR信号传导通路能够增加K562/ADM细胞对雷帕霉素及As2 03的敏感性.     

PTEN抑制人脐静脉内皮细胞ECV304的增殖和VEGF的表达

目的:探讨与张力蛋白同源的10号染色体缺失的磷酸酶基因(phosphatase and tensin hemology deleted on chromo-some ten gene,PTEN)对人脐静脉内皮细胞ECV304细胞增殖、凋亡,及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)及其受体1(VEGF receptor 1,VEGFR1)的影响。方法:将携带有野生型PTEN及绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)基因的腺病毒Ad-PTEN-GFP及空载体腺病毒Ad-GFP感染ECV304细胞,MTT实验、Hoechst3342染色法及流式细胞术检测ECV304细胞的增殖和凋亡。实时荧光定量PCR法检测Ad-PTEN-GFP感染后ECV304细胞中PTEN、VEGF和VEG-FR1 mRNA表达水平,ELISA检测ECV304细胞培养上清中VEGF的水平。鸡胚尿囊膜(chick chorioallantoic membrane,CAM)血管生长实验检测PTEN对鸡胚血管生长的影响。结果:与Ad-GFP相比,Ad-PTEN-GFP感染能明显抑制ECV304细胞的增殖,诱导细胞凋亡,5 d时增殖抑制率可达(50.38±5.42)%、细胞凋亡率达(73.3±5.3)%。当感染复数为100时,Ad-PTEN-GFP组ECV304细胞的VEGF及VEGFR1 mRNA表达水平分别为未感染组的(13.40±1.32)%及(46.12±5.20)%。同时,Ad-PTEN-GFP感染能够明显抑制CAM体内血管生长[血管指数(57.6±3.37)%vs(92.2±4.37)%,P<0.05]。结论:PTEN能显著抑制人脐静脉内皮细胞ECV304的增殖、促进其凋亡,其机制可能与抑制VEGF和VEGFR1表达,抑制血管新生有关。     

KIF5B-RET融合基因与非小细胞肺癌

肺癌是全世界范围死亡率最高的肿瘤。近年来,靶向治疗成为肺癌研究的热点。2012年研究发现肺癌中存在一种新的融合基因KIF5B-RET,其阳性患者多为不吸烟或很少吸烟的腺癌患者。其存在与其他已知的基因改变如EGFR、K-Ras、ALK等相互排斥,提示KIF5B-RET是一种新的致癌驱动突变,有可能成为非小细胞肺癌个体化诊断与治疗的一个分子靶点。     

急性髓系白血病合并寄生虫感染1例

1资料患者,女,41岁。主因"四肢乏力,食欲不振1月,加重伴皮疹20余天"于2012年8月入院。既往体健。查体:体温36.3℃,神清,全身皮肤散在红色皮疹,有融合成团,未见出血点及黄染;胸骨压痛,心、肺未见异常;腹软,全腹无压痛,肝、脾肋缘下未及,双下肢无浮肿。血常规:白细胞(WBC)16.9×109/L,血红蛋白(Hb):94g/L,血小板(Plt)37×109/L,外周血涂片:原幼细胞50%;骨髓相:增生活跃,粒系异常增生,以原始     

桃红四物汤四苓散加味防治骨筋膜室综合症65例疗效观察

骨筋膜室综合症(osteofascial compartment syndrome)即由骨,骨间膜,肌间隔和深筋膜形成的骨筋膜室内肌肉和神经因急性缺血、缺氧而产生的一系列症状和体征;骨筋膜室内的肌肉和神经组织缺血.肌组织缺血后,毛细血管通透性增加,大量渗出液进入组织间隙,形成水肿,使骨筋膜室内压力进一步增加,形成缺血-水肿-缺血恶性循环.如果不及时采取措施,将发生大量肌肉坏疽,常需截肢.如有大量毒素进入血液循环,还可导致休克心率不齐和急性肾功能衰竭.西医外科骨筋膜室综合征一经确诊,应立即切开筋膜减压.切开减压术后病例或肢体外伤肌肉挫伤,肢体肿胀严重,临床消除水肿常用的脱水药如甘露醇,利尿剂等大量的脱水使电解质丢失,严重者还会出现血压下降休克.本文作者2001年至今对65例骨筋膜室综合征已经确诊,做过切开筋膜减压和四肢创伤或骨折肢体肿胀严重患者,为防治骨筋膜室综合征,用桃红四物汤+四苓散加味中西医结合,在临床上取得了较好的疗效,现将临床资料和治疗经过汇报如下.     

多发性骨髓瘤患者PTEN、FAK的表达及其与临床分期、髓外浸润的关系

目的 检测多发性骨髓瘤(MM)患者骨髓瘤细胞中PTEN及FAK mRNA及其蛋白水平变化,分析两者的关系及与MM临床分期、髓外浸润的关系,以探讨二者在MM发病中的可能作用.方法 收集55例MM患者与20个缺铁性贫血患者骨髓单个核细胞,应用CD138抗体将MM细胞进行纯化.实时荧光定量PCR(FQ-PCR)法检测PTEN、FAK mRNA表达,Western印迹法测定其蛋白表达水平.结果 ①55例MM患者PTEN和FAK mRNA表达水平分别为0.723±0.059和1.072±0.626,对照组分别为0.984±0.359和0.433±0.240,二组相比有显著差异(P ＜0.05,P＜0.01).Spearman双变量相关分析结果显示,MM患者中PTEN mRNA与FAK mRNA表达水平呈显著性负相关(r=-0.560,P＜0.01).②按DurieSalmon分期将MM患者分为两组.Ⅰ+Ⅱ期MM患者组15例,PTEN和FAK mRNA表达水平分别为0.909±0.429和0.726±0.317.Ⅲ期MM患者组40例,PTEN和FAK mRNA表达水平分别为0.653 ±0.347和1.224±0.667,二组比较有显著差异(P ＜0.05,P＜0.01).③按是否伴有髓外浸润将所有MM患者分为两组.伴髓外浸润组12例,PTEN mRNA表达水平为0.656±0.296,伴髓外浸润患者共43例,PTEN mRNA表达水平为(0.742±0.407),二组相比差异不显著(P＞0.05).伴有髓外浸润组FAK mRNA表达水平为1.791±0.618,无髓外浸润组为0.878±0.468,二组相比差异显著(P＜0.01).④选择12例Ⅲ期MM患者和6例对照患者行Western印迹检测,其中无髓外浸润MM患者6例,伴髓外浸润患者6例.12例MM患者PTEN蛋白平均表达水平为0.081±0.087,与对照组(0.332±0.119)相比差异显著(P＜0.01);T-FAK蛋白平均表达水平为0.257±0.119,与对照组(0.106±0.090)比较差异显著(0.01 ＜P＜0.05);p-FAK蛋白在6份对照骨髓中均未测出,11例患者均有不同程度的表达,平均水平为0.082±0.040.二组阳性率比较差异显著(x2=14.14,P＜0.01).⑤无髓外浸润的6例MM患者和伴髓外浸润的6例MM患者PTEN蛋白平均表达水平分别为0.093±0.091和0.069±0.089,T-FAK蛋白平均表达水平分别为0.257±0.126和0.257±0.123,p-FAK蛋白的平均表达水平分别为0.053±0.142和0.097±0.038,p-FAK蛋白平均表达水平在两组之间有显著差异(P＜0.05),PTEN和T-FAK在两组之间无明显差异(P＞0.05).结论 PTEN和FAK mRNA以及蛋白表达水平与MM疾病的发生、进展密切相关.PTEN表达减少是引起p-FAK表达增高的关键因素之一.