人脑胶质瘤差异表达的基因的获得及一条全长新基因的克隆

目的运用基因芯片技术获取正常成人脑组织与人脑胶质瘤中差异表达的基因,并对其中一条基因进行了初步的研究。方法抽提正常成人脑组织与人脑胶质瘤组织中的mRNA来制备探针,经杂交、洗涤后,通过计算机观察两者表达谱的差异情况,对681F05克隆子进行了Northernblot,5’RACE和生物信息学分析。结果通过4次基因芯片筛选,获得15条与胶质瘤相关的新基因,经Northernblot证实681F05基因在人正常脑组织中低表达,而在人脑胶质瘤中高表达。BLASTn和BLASTx分析显示,它们编码蛋白与线虫Cyp10蛋白同源性分别为52%和72%。cDNA序列分析发现这两上克隆是同一个基因[命名为cyclophilinlikegene(PPIL3)]的两个不同的剪切体(PPIL3a和PPIL3b)。结论基因芯片筛选正常脑组织与人脑胶质瘤差异表达的基因具有样品用量少,高质量,高速度,高敏感等特性。681F05基因可能是与人脑胶质瘤形成有关的一条全长新基因。     

人羊膜细胞移植治疗大鼠脊髓损伤的实验研究

人羊膜细胞（HEACs）源自于受精卵第八天时成羊膜细胞，具有细胞来源充足，不表达HLA抗原，移植不引发免疫排斥的优点。另外羊膜细胞具有表达神经细胞和神经胶质细胞标志物的细胞以及其能分泌神经递质和营养因子的特性更利于神经移植。因此作者采用移植人羊膜细胞来治疗大鼠脊髓损伤，观察其是否对改善功能确实有益。     

Calpain抑制剂Ⅰ对大鼠脑非断离性轴索损伤继发断离的影响

目的　研究Calpain抑制剂Ⅰ对非断离性轴索损伤 (NDAI)继发断离的影响 ,探讨NDAI的治疗途径。　方法　将 16只雄性SD大鼠随机分为Calpain抑制剂Ⅰ组和对照组各 8只 ,液压冲击致大鼠脑弥漫性损伤 ,比较两组伤后 2 4 ,72h胼胝体区、间脑中脑区、桥脑延脑区和小脑区肿胀轴索及轴索球最大密度变化。　结果　大鼠致伤后 ,NF6 8免疫组化显示肿胀的轴索及轴索球。伤后 2 4h ,Calpain抑制剂Ⅰ组桥脑延脑区、小脑区肿胀轴索及轴索球最大密度明显减少 (P <0 .0 1) ;伤后 72h ,Calpain抑制剂Ⅰ组小脑肿胀轴索及轴索球减少 (P <0 .0 5 ) ,而胼胝体区、间脑中脑区、桥脑延脑区变化不明显 (P >0 .0 5 )。　结论　Calpain抑制剂Ⅰ可减轻NDAI的继发断离 ,主要是减少损伤较轻的NDAI的继发断离。     

骨髓基质细胞成年大鼠脑内移植

【目的】研究骨髓基质细胞脑内移植后的分布和移行 ,为细胞移植治疗疾病奠定基础。【方法】常规培养大鼠骨髓基质细胞 ,应用免疫组织化学方法对细胞进行鉴定 ,Hoechst332 5 8标记细胞 ,立体定向移植到大鼠的纹状体 ,经过一段时间后处死大鼠 ,脑组织切片 ,直接在荧光显微镜下检查存活的细胞。【结果】细胞移植到大鼠脑内能够长时间存活 ,移植细胞与宿主细胞有很好的相容性 ,宿主脑组织的结构无破坏 ,移植细胞能够移行一段距离 ,说明脑内存在的信号诱导细胞向一定的方向迁徒。【结论】骨髓基质细胞脑内移植后 ,能够与宿主脑组织整合在一起 ,无细胞过度增生和胶质瘢痕形成 ,这种细胞可能成为中枢神经系统自体移植的细胞来源。     

丁苯酞动员内皮祖细胞治疗脑缺血再灌注大鼠实验研究

目的观察丁苯酞治疗对脑缺血再灌注大鼠的影响。方法选取健康雄性SD大鼠60只,随机分为假手术组、模型组、尼莫地平组[12mg/(kg·d)]和低剂量组[丁苯酞60mg/(kg·d)]和高剂量组[丁苯酞120mg/(kg·d)],线栓法建立大脑中动脉缺血再灌注模型。各组灌胃治疗5d,每天行神经功能缺损评分;流式细胞仪检测缺血2h和治疗5d后循环内皮祖细胞(EPC)水平;行CD31及血管性假血友病因子(vWF)免疫组织化学染色,观察大鼠脑缺血区血管新生情况。结果治疗第2天起,尼莫地平组及高、低剂量组神经功能评分均显著低于模型组(P<0.05),第3天时高剂量组神经功能缺损评分低于低剂量组[(0.40±0.52)分vs(1.10±0.32)分,P<0.05]。假手术组大鼠缺血2h循环EPC水平低于其他4组(P<0.05)。治疗第5天,高剂量组EPC增加的水平明显高于模型组、尼莫地平组和低剂量组(P<0.05)。尼莫地平组及低剂量组和高剂量组脑缺血区CD31阳性及vWF阳性细胞数多于模型组。结论丁苯酞可动员循环EPC,促进缺血区血管新生,改善神经功能,呈剂量依赖性。     

人胚中脑神经干细胞的体外分离培养及分化的研究

本对人胚中脑神经干细胞体外分离培养及分化进行了初步研究．以期为神经干细胞临床应用提供实验依据。     

脐带血间充质干细胞体外分离、纯化及培养

目的　研究脐带血 (HUCB)中含有的间充质干细胞 (MSCs)体外分离、纯化及培养条件 ,探究其作为种子细胞应用于实验和临床的可行性。方法　无菌条件下取正常足月剖腹产的脐带血 ,经肝素抗凝 ,用淋巴细胞分离液分离脐血的单个核细胞 ,以偏酸性的MesencultTM作为培养基进行培养和纯化获得贴壁细胞层 ,用流式细胞仪检测MSCs表面抗原。结果　来源于脐血的单个核细胞经体外培养贴壁后出现破骨样及间充质样的细胞 ,间充质细胞为成纤维样的细胞形态 ,并表达MSCs相关的抗原 (CD2 9、CD4 4、CD1 6 6 ) ,但不表达造血细胞抗原 (CD34 、CD4 5) ,这与源于骨髓的MSCs一致。结论　脐带血来源的MSCs能在体外培养、扩增 ,而用于满足实验和临床的需要     

小剂量链脲霉素(STZ)诱导hFasL转基因小鼠发生糖尿病的研究

目的　探讨人类Fas基因配体 (hFasL)和Fas基因在糖尿病的发生过程中的作用。方法　利用hFasL转基因小鼠 ,用低剂量的链脲霉素 (STZ)来诱导糖尿病。应用RT PCR鉴定hFasL在转基因小鼠的胰岛中的表达。利用血糖的测定和免疫组织化学染色的观察来认定糖尿病的病变程度。结果　hFasL转基因小鼠在胰岛组织中可以表达FasL ,通过血糖的测定和胰岛组织免疫组化染色 ,证实它们相对于普通的同品系的小鼠更容易被低剂量的STZ诱导而患病。结论　Fas和FasL在糖尿病的发生过程中起着很重要的作用。     

反转录病毒介导基因转移治疗脑肿瘤的安全性研究 Ⅰ.具有复制能力野生型反转录病毒检测

目的：检测反转录病毒介导的脑肿瘤基因治疗过程中具有复制能力野生型反转录病毒（RCR）。方法：RCR检测主要方法有：DNA聚合酶链式反应（PCR），反转录PCR（RT／PCR），Southern杂交以及neo基因和lacZ基因的补救分析。结果：建立了RCR的检测系统，从DNA水平、RNA水平和病毒活体水平对产HSV－TK病毒包装细胞（TK／VPC），C6转TK基因细胞和实验动物血液可能存在的RCR野生型病毒进行检测，结果均没有检测到野生型反转录病毒。结论：采用的反转录病毒基因转移系统没有产生野生型病毒，为临床试验的安全进行提供了保证。     

腺病毒载体基因转移系统的建立及其在脑肿瘤中的高效表达

构建了含有CMV启动子调控的HSV－tk基因的重组质粒pAdCMVtk，将其与缺陷型腺病毒Ad5大框架pJM17一起共转染病毒包装细胞293细胞，获得有感染能力但复制缺陷的重组腺病毒AdCMVtk，以其感染大鼠C5脑胶质瘤细胞后用PCR方法证实HSV-tk基因能被腺病毒有效转入靶细胞。用带报告基因LacZ的腺病毒感染大鼠C5脑胶质瘤细胞，经x-gal染色，证明腺病毒载体的基因转移效率可达100％。