先天性巨结肠中HA117及SHH信号通路的表达及意义

目的 研究HA117及SHH信号通路(SHH、Ptch1、Gli1)在先天性巨结肠(Hirschsprung's disease,HD)中的表达情况,以探讨其与HD发生发展中的关系.方法 收集重庆医科大学附属儿童医院2014年至2015年经手术确诊为HD患儿的巨结肠组织标本30例,肠段分吻合段(正常对照组)、扩张段和痉挛段(实验组),运用实时荧光定量PCR (quantitative real-time PCR,qRT-PCR)、蛋白质印迹(Western blot)和免疫组织化学方法检测HA117、SHH信号途径在各段中的表达情况,对其进行定量和定性并比较.结果 qRT-PCR示痉挛段HA117mRNA表达水平为1.52±0.17,明显高于吻合段的0.28±0.04,差异具有统计学意义(P＜0.05).痉挛段SHH、Ptch1、Gli1mRNA表达水平分别为0.53±0.11、0.48±0.11、0.62±0.13,明显低于吻合段(1.23±0.26、1.20±0.22、1.71±0.46),差异具有统计学意义(P＜0.05);Western-Blot示SHH、Ptch1、Gli1蛋白相对表达水平与mRNA表达水平一致,差异均具有统计学意义(P＜0.05);免疫组织化学(DAB染色)结果提示:痉挛段SHH、Ptch1、Gli1染色明显弱于吻合段.结论 HA117及SHH信号通路可能与肠神经系统(ENS)发育有着密切的联系,这可能是HD病理发生的重要作用机制之一.     

先天性肠闭锁、肠狭窄120例临床分析

目的 总结先天性肠闭锁、肠狭窄的临床特点及手术治疗效果,探讨短肠综合征与预后的关系,提高临床治愈率.方法 回顾性分析120例先天性肠闭锁、肠狭窄患儿的临床表现、影像学检查、病理分型、手术方式及治愈情况,将随访的40例患儿按照术后保留肠管长度分为短肠组及非短肠组,以同年龄段正常儿童平均体重作为对照,将短肠组体重分别与非短...     

小鼠CT26结肠癌耐药动物模型的建立

目的:化疗药物诱导建立小鼠CT26结肠癌多药耐药(Multidrug resistance,MDR)动物模型.方法:建立小鼠CT26结肠癌皮下肿瘤模型,5-氟尿嘧啶和阿霉素联合化疗,MTT法绘制化疗前后细胞株的生长曲线、计算倍增时间及对各化疗药物敏感性及耐药指数(Resistance index,RI),RT-PCR检测化疗前后MDR1b mRNA表达情况,流式细胞技术检测多药耐药蛋白(P-glycoprotein,P-gp)外排功能.结果:耐药株的倍增时间比亲本细胞株长,化疗后肿瘤对放线菌素D(ACT)、阿霉素(ADM)、长春新碱(VCR)、羟基喜树碱(HCPT)、5-氟尿嘧啶(5-Fu)、柔红霉素(DAM)、依托泊甙(VP16)的RI分别为29.3、26.4、10.9、7.0、5.8、3.0、2.8,敏感性降低.耐药株MDR1bmRNA表达水平比亲本细胞株高,对柔红霉素的外排能力明显高于亲本细胞株.结论:本实验成功建立肿瘤多药耐药的动物模型,为化疗后肿瘤继发多药耐药问题的研究提供动物模型,为提高化疗效果研究奠定基础.     

1179例小儿穿孔性阑尾炎的临床分析

目的总结分析小儿穿孔性阑尾炎的临床特点及诊治体会,提高对小儿穿孔性阑尾炎的全面认识,以指导临床诊治。方法对1990~2009年6 607例小儿阑尾炎患者详细资料32项临床指标进行统计,并对其中1 179例小儿穿孔性阑尾炎各项资料进行统计分析。结果手术治疗1 179例,平均就诊时间为44.03 h,72 h以上组穿孔率明显高于其他病程组,3岁以下组穿孔率明显高于其他年龄组。临床症状主要表现为腹痛、发热、恶心与呕吐、腹部压痛、血常规白细胞及中性粒细胞比例升高。细菌培养主要是大肠埃希菌。弥漫性腹膜炎患者,术中腹腔冲洗组平均住院时间较未冲洗组短。阑尾穿孔患儿存在术后并发症38例,发生率为3.22%;1例死亡。结论阑尾穿孔多见于学龄期儿童,小年龄患儿的穿孔率较高,早期诊断和及时手术是降低小儿穿孔性阑尾炎发病率的关键。右下腹持续疼痛和右下腹固定压痛是早期临床诊断阑尾炎的充要条件,合理使用抗生素是影响本病预后的重要因素。     

新生儿肠旋转不良70例临床分析

目的探讨先天性肠旋转不良的临床特点、诊断方法及手术要点,以提高诊治水平。方法对70例新生儿先天性肠旋转不良的临床资料进行回顾性分析。结果 70例均行Ladd手术治疗,术中发现Ladd索带压迫55例,空肠上段膜状粘连36,盲肠压迫1例,肠扭转51例,肠坏死7例。伴发消化道畸形14例(20%),其中十二指肠闭锁3例,环状胰腺2例,空肠闭锁2例,异位胰腺2例,先天性短肠综合征1例,美克尔憩室1例,脐膨出1例,十二指肠异位甲状腺1例,十二指肠旁疝1例。治愈65例,治愈率92.9%。1例手术后近期症状改善不明显,因广泛肠坏死;术后放弃治疗4例。结论新生儿先天性肠旋转不良的临床表现为十二指肠不全梗阻,可反复发作,通过影像学检查大多可明确诊断。传统的Ladd术治疗效果满意,若无并发广泛肠坏死或其他严重的先天畸形,本病一般预后良好。     

新耐药基因HA117多克隆抗体的制备与鉴定

目的制备HA117多克隆抗体。方法以HA117表达质粒pAdTrack-HA117为模板,PCR扩增HA117基因,扩增产物转入BL21(DE3)感受态细胞,进行HA117蛋白诱导表达,采用SDS-PAGE检测表达产物。纯化HA117蛋白后免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体。通过间接ELISA检测其效价。将转染携带HA117重组腺病毒的HEK293细胞为实验组,未转染的HEK293细胞为对照组,用细胞免疫荧光和Western blot方法检测其过表达的HA117蛋白,验证制备的HA117多克隆抗体的特异性。结果成功获得HA117多克隆抗体,间接ELISA法检测显示抗HA117血清效价为1∶729 000。细胞免疫荧光和Western blot检测示制备的HA117多克隆抗体可以特异性识别HA117抗原蛋白。结论获得了效价和特异性较高的HA117多克隆抗体。