丹参酚酸B盐对转化生长因子β1活化的大鼠肝星状细胞内p38丝裂原活化蛋白激酶通路及其转录因子的影响

目的 探讨丹参酚酸B盐(SA-B)对转化生长因子β1(TGFβ1)活化的大鼠肝星状细胞(HSC)内p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号传导通路的影响. 方法 分离并培养正常大鼠HSC,将TGFβ1和SA-B直接添加于原代HSC的无血清培养液中,用p38信号通路特异性阻断剂SB203580和细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路特异性阻断剂PD98059分别阻断HSC内p38MAPK和ERK信号通路.细胞内总的P38蛋白、MKK3/6蛋白及MEF2A、MEF2C的测定分为空白对照组、SA-B组、SA-B+ TGF β1组和TGFβ1组;磷酸化P38蛋白、MKK3/6蛋白和α-SMA蛋白的测定分为空白对照组、SA-B组、SA-B+ TGF β1组、TGFβ1组、PD98059、PD98059+ SA-B组、PD98059+ TGFβ1组和SA-B+ PD98059+ TGFβ1组;SA-B对TGFβ1刺激的HSC内MEF2和Ⅰ型胶原报道基因的影响分为突变型(mt)对照组、野生型(wt)对照组、TGFβ1组、SA-B+ TGF β1组、SA-B组、SB203580+ TGF β1组、SB203580组.Western blot法检测HSC内磷酸化和总P38蛋白、MAPK激酶3/6 (MKK3/6)蛋白、肌细胞增强因子2(MEF2)A、MEF2C、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达;荧光素酶报道基因测定法检测MEF2报道基因和Ⅰ型胶原启动子的活性.多组间数据的多重比较用q检验.结果 SA-B组磷酸化P38蛋白相对表达量为0.33±0.05,明显低于空白对照组(q=7.08,P＜0.01); SA-B +TGF β1组的磷酸化P38蛋白相对表达量为0.46±0.04,明显低于TGFβ1组(q=10.45,P＜0.01);SA-B组磷酸化MKK3/6蛋白相对表达量为0.11±0.07,明显低于空白对照组(q=3.944,P＜0.05);SA-B+ TGF β1组磷酸化MKK3/6蛋白相对表达量为0.28±0.07,明显低于TGFβ1组(q=7.91,P＜0.01);SA-B+ TGFβ1组和SB203580+ TGF β1组MEF2报道基因的相对荧光素酶活性分别为2.93±0.09和2.50±0.05,均明显低于TGFβ1组(q值分别为35.35和37.2,P值均＜0.01);SA-B组MEF2C及MEF2A的相对表达量分别为15.82±0.97和13.00±0.40,均明显低于空白对照组(q值分别为5.18和13.32,P值均＜0.01);SA-B+ TGF β1组MEF2C及MEF2A的相对表达量分别为13.40±0.72和20.47±0.83,均明显低于TGF β1组(q值分别为43.93和12.52,P值均＜0.01); SA-B+ TGFβ1组α-SMA相对表达量为8.76±0.44,明显低于TGFβ1组(q=20.35,P＜0.01); SA-B+ SB203580+TGF β1组α-SMA相对表达量仅为3.57±0.49,明显低于TGFβ1组(q=39.78,P＜0.01);SA-B+ TGF β1组和SB203580+ TGF β1组Ⅰ型胶原报道基因的相对荧光素酶活性分别为1.61±0.05和1.42±0.07,较TGFβ1组明显降低(q值分别为26.4和27.62,P值均＜0.01).结论 SA-B可能通过抑制原代HSC内TGFβ 1的p38MAPK信号传导通路,抑制HSC的活化.     

NF-κB通路在肝纤维化进展和中药抗肝纤维化机制中的作用

核因子-κB(NF-κB)可以通过调控基因表达,在细胞存活、生长、增殖、活化、凋亡等多种生理和病理过程中起着重要作用,尤其在肝纤维化进展中,NF-κB信号通路发挥重要调节作用。对NF-κB的结构与功能,目前有关NF-κB在参与肝纤维化进展中,对肝细胞、Kupffer细胞、肝星状细胞的调节,以及中药通过调控NF-κB通路活性发挥抗肝纤维化作用的机制作一综述。揭示了相关疾病条件下,NF-κB与多个细胞之间复杂的相互作用机制,突出中药抑制NF-κB的活性从而减轻肝纤维化这一潜在的临床意义。     

中医药调控肝纤维化细胞机制研究进展

肝纤维化是指各种致病因素所致的肝脏内纤维结缔组织增生,其特点是大量细胞外基质(extracellular matrix,ECM)在窦周间隙沉积,为诸多慢性肝病发展至肝硬化过程中所共有的病理组织学变化,是影响慢性肝病预后的重要环节.近年来,中医药调控肝纤维化的细胞机制的研究取得了较大进展,笔者按照肝脏细胞在肝纤维化中的作用及中医药对其的调控作用机制综述如下.     

《肝纤维化中西医结合诊疗指南(2019年版)》解读

由中国中西医结合学会肝病专业委员会撰写的《肝纤维化中西医结合诊疗指南(2019年版)》(以下简称“新指南”)已正式颁布。相较于2006年颁布的旧指南,新指南内容更贴近临床,推出16条证据等级较高的推荐意见。新指南中新增了肝纤维化的病理机制一节,诊断部分肯定了无创诊断肝纤维化技术的优势,治疗部分强调了病因治疗和抗肝纤维化治疗并重的原则并主要推荐了若干中成药及中药方剂,疗效评估部分转达了肝纤维化领域对于“逆转”肝纤维化或肝硬化定义的主流观点,新增了有关疗程、停药与随访的建议,最后提出了4个需要重视并改进的问题。     

扶正化瘀方抑制大鼠肝贮脂细胞增殖及胶原生成的血清药理学研究

以传代培养的大鼠肝贮脂细胞(FSC)增殖为参数。观察扶正化瘀(FZHY)方灌胃给药后药物血清的生物学效应。FZHY 0．46g／kg体重(0．46g)剂量一次给药后2小时的药物血清可抑制FSC增殖，但不显著；一次给药2小时后以同剂量再次给药，其后1小时、2小时及3小时的药物血清均能显著抑制FSC的增殖。再次给药后1小时药物血清对FSC增殖的抑制效果随给药剂量及血清浓度的提高而增强；药物血清对细胞形态无明显影响，尚能提高细胞的活力。不同剂量再次给药后1小时药物血清对细胞内、外的胶原生成率均有抑制作用，0．46g药物血清的作用与秋水仙碱相近，其抑制效果同样随着药物血清浓度的提高而增强，提示抑制FSC增殖及其胶原生成可能是FZHY方抗肝纤维化的主要作用机制之一。     

实验性肝纤维化时贮脂细胞的变化及桃仁提取物对其影响

采用免疫组化法检测肝脏石蜡切片中的贮脂细胞(FSC),发现肝纤维化预防对照组和治疗对照组的阳性细胞均明显多于正常大鼠,且以前者为显著。这反映 CCl_4造模初期 FSC 活化后增殖相当明显;当 CCl_4刺激因素去除后,FSC 活化程度减低,增殖减少。桃仁预防组阳性细胞少于预防对照组,提示当 CCl_4刺激时,桃仁提取物在某种程度上抑制了 FSC 活化和增殖;桃仁治疗组各例切片中很难找到阳性细胞,提示桃仁提取物在 CCl_1刺激因素去除后,抑制了 FSC 进一步活化和增殖。推测桃仁提取物抗肝纤维化的作用机制与其对 FSC 的影响有关。     

肝窦毛细血管化的形成机制研究

目的　探讨二甲基亚硝胺 (DMN)致大鼠肝纤维化过程中肝窦壁病理变化及其与门脉压力的关系。方法　雄性Wistar大鼠 4 0只用 0 .5 %DMN每周连续 3d共 4周 12次腹腔注射制作大鼠肝纤维化模型 ,分别于造模后 1d、2d、3d、1周、2周、4周、6周、8周作为动态观察时相点 ;分别取 5只模型大鼠和 3只正常大鼠肠系膜前静脉分支插管法测门脉压力 (Ppv) ;免疫组化染色观察肝组织Ⅳ型胶原(ColⅣ )、层粘连蛋白 (LM)和Ⅰ型胶原 (ColⅠ )表达 ;透射电镜观察肝组织超微结构。结果　正常大鼠肝窦壁ColⅣ阳性表达 ;模型组肝窦壁除ColⅣ阳性染色呈现为先弱后强外 ,LM和ColⅠ的沉积均随造模时间的延长而进行性增加 ,4周时表达最为明显 ,电镜下可见肝窦内皮失窗孔和内皮下完整基底膜形成 ;模型组Ppv与肝窦壁LM的表达量呈显著正相关 (P <0 .0 5 )。结论　DMN大鼠肝窦内皮下基底膜是在功能性基底膜破坏的基础上 ,随着LM与新合成ColⅣ沉积以及两者结合的增加、加之ColⅠ的沉积而形成     

转化生长因子β的丝裂原激活蛋白激酶通路与肝纤维化

转化生长因子β(transforming growth factor-β,TGF-β)是一个结构相关生长因子大家族的一员,这个家族包括TGF-β、激活素和骨形成蛋白。TGF-β是一个多功能的生长因子,由多种细胞产生,对细胞的生长、分化、迁移、凋亡及细胞外基质(extra-cellular matrix,ECM)的生成发挥调节作用,但在病理情况下,TGF-β是肝纤维化最主要的促纤维形成细胞因子。在纤维化形成过程中活化的肝星状细胞     

肝硬化腹水的治疗

肝硬化是多种肝病终末期的共同病理变化,其失代偿阶段的标志之一是腹水生成.近年来,国内外有关肝硬化腹水治疗的论文甚多,提供了不少有益的治疗经验.结合我科的临床体会,综述如下.