SDF-1 cDNA转染人骨髓间充质干细胞的实验研究

本研究旨在探讨基质细胞衍生因子-1（SDF-1）cDNA瞬时转染人骨髓间充质干细胞（hBMSCs）前后hBMSCs中SDF-1mRNA表达的情况。在分离、培养、鉴定人骨髓间充质干细胞（hBMSCs）和构建SDF-1-pIRES2-EGFP真核表达载体的基础上,通过脂质体介导法将SDF-1真核表达质粒转染至hBMSCs,观测绿色荧光蛋白的表达并用RT-PCR方法检测瞬时转染效率。结果发现：SDF-1-pIRES2-EGFP瞬时转染后hBMSCs的SDF-1mRNA表达增高约20%左右。结论：阳离子脂质体可以将SDF-1cDNA真核表达质粒瞬时转染入hBMSCs,但转染效率低下,不能获得足够数量的稳定转染细胞供后续实验,因此需对转染方法作进一步的探讨。     

自体外周血干细胞移植治疗血液肿瘤206例观察

目的:观察自体外周血干细胞移植(APBSCT)治疗血液恶性肿瘤临床疗效。方法:自2001年3月—2006年12月对206例血液肿瘤患者施行APBSCT,其中急性淋巴细胞白血病(ALL)40例,急性髓细胞白血病(AML)29例,非何杰金淋巴瘤(NHL)95例,何杰金淋巴瘤(HD)26例,多发性骨髓瘤(MM)16例,观察临床疗效和并发症。结果:除1例ALL外,205例患者移植后造血功能均快速重建。急性淋巴细胞白血病首次完全缓解(ALL-CR1)25例,其中无病存活17例,带病存活2例,死亡6例,急性淋巴细胞白血病再次完全缓解(ALL-CR2)15例,其中无病存活3例,带病存活3例,死亡9例;急性髓细胞白血病首次完全缓解(AML-CR1)17,其中无病存活10例,带病存活2例,死亡5例,急性髓细胞白血病再次完全缓解(AML-CR2)12例,其中无病存活5例,带病存活1例,死亡6例;非何杰金淋巴瘤首次缓解(NHL-CR1)57例,其中无病存活42例,带病存活6例,死亡9例,非何杰金淋巴瘤再次缓解(NHL-CR2)28例,其中无病存活18例,带病存活4例,死亡6例,非何杰金淋巴瘤未缓解(NHL-NR)10例,其中无病存活2例,带病存活3例,死亡5例;何杰金淋巴瘤首次缓解(HD-CR1)8例,其中无病存活8例;何杰金淋巴瘤部分缓解(HD-PR)13例,其中无病存活11例,带病存活2例;RE5例,其中无病存活3例,带病存活1例,死亡1例;MM16例,其中无病存活5例,带病存活4例,死亡7例。结论:APBSCT是一种治疗血液肿瘤安全有效的方法。     

Co^60γ辐照对裸鼠血像及造血微环境功能影响的动态观察

目的探索建立供移植实验使用的裸鼠造血微环境损伤动物模型。方法分别用3．5、5．0、6．5、8．0Gy4个Co^60γ辐照裸鼠，检测经过辐照后各组裸鼠1、3、5、7、14、21d血像变化，检测辐照后1、7、14、21d裸鼠骨髓基质CFU-F形成情况并用流式细胞仪检测辐照后1、7、14、21d骨髓基质细胞血管内皮细胞黏附分子-1（VCAM-1）的表达。结果8．0Gy辐照剂量裸鼠死亡率100％；3．5、5．0、6．5Gy辐照剂量组裸鼠的造血损伤均能在辐照后21d之内自我恢复；6．5Gy组骨髓CFU—F于移植7（22．00±6．00）、14d（33．00±6．00）后较3．5、5．0Gy组均显著降低（P〈0．01），VCAM-1表达于7（21．67±7．45）、14（22．33±9．07）、21d（23．33±4．51）较对照组显著降低（P〈0．01），较3．5Gy组差异有统计学意义（P〈0.05），21d（23．33±4．51）较5．0Gy组（34．00±4．36）差异有统计学意义（P〈0．05）。结论6．5Gy是裸鼠造血微环境损伤实验动物模型的适宜辐照剂量。     

大剂量化疗、自体外周血造血干细胞移植、长间歇维持化疗序贯治疗成人急性淋巴细胞白血病疗效观察

急性淋巴细胞白血病（ALL）是一种常见的血液系统恶性肿瘤，其治疗包括常规化疗和造血干细胞移植（HSCT）。常规化疗对成人ALL效果较差，据报道其长期生存率只有20％～30％，而且要进行长期维持治疗。2001年3月至2003年8月，我们对我院14例初次诱导治疗缓解的成人ALL患者进行连续3个周期大剂量甲氨蝶呤（Hi—MTX）治疗，之后行自体外周血造血干细胞移植（auto—PBSCT），移植后长间歇常规剂量化疗维持2年，取得了较好的治疗效果。     

临床医学生实习岗前培训探析

医学生临床实习是全面培养临床实践能力,将理论知识转化为临床技能知识,促进理论与实践相结合的重要时期,也是培养实用型医学人才的关键环节.作为教学医院,长期承担大量的实习教学任务.结合目前医学实习教学模式中存在的问题和我院高等院校教学评价体会,探讨临床医学生实习岗前培训的必要性和方法,从而提高教学质量,加强师资队伍.     

156例涂片诊断再生障碍性贫血患者的骨髓活检分析

目的 探讨再生障碍性贫血(AA)的诊断方法及发病机制.方法 应用骨髓塑料包埋病理检查.结果 156例中125例患者切片内造血组织比例小于20%,16例患者切片内造血组织所占比例为25%～50%,7例患者切片内造血组织比例小于25%,但残余造血组织内造血细胞生长旺盛,3例患者切片内造血组织/脂肪组织小于20%的同时检出粒系不成熟前体细胞异常定位(ALIP)现象,5例患者切片内造血组织减少,脂肪组织增多不明显,造血组织内造血细胞减少,剩余空间均被成熟红细胞充斥.结论 大多数患者切片内造血组织与脂肪组织比例下降明显,呈典型的AA骨髓活组织像;少部分介于骨髓活检诊断AA的临界值,需要对造血细胞增生度及巨核细胞数量联合判断.     

造血干细胞移植治疗儿童血液肿瘤及难治性血液病53例临床观察

目的观察造血干细胞移植治疗儿童血液肿瘤及其他难治性血液病的临床疗效。方法自2007年4月至2009年12月,我们共对53例血液病患儿实施了造血干细胞移植治疗,其中自体移植15例,异基因移植38例,观察其临床疗效和并发症。结果 15例患者行自体外周血造血干细胞移植后造血功能均能顺利重建,无严重并发症发生。异基因移植患儿除1例发生颅内出血早期死亡外,其余均顺利达到造血重建,但其中急性移植物抗宿主病发生率为18.4%,慢性移植物抗宿主病发生率2.6%;15例患儿于移植后0～24个月分别死于颅内出血、感染和疾病复发或进展;移植后6个月至2年存活率65%。结论造血干细胞移植是治疗儿童血液肿瘤及其他难治性血液病的有效方法,可明显改善预后;临床可根据患者原发疾病诊断、供者情况及家庭经济条件选择移植方式。     

单倍相合异基因骨髓移植前后骨髓像分析

目的观察单倍相合异基因骨髓移植前后骨髓像、造血能否重建。方法对22例患者造血干细胞移植前骨髓穿刺抽吸涂片镜检;骨髓移植成功出层流室首次骨髓穿刺抽吸涂片;每月定期复查骨髓穿刺抽吸涂片镜栓。同时观察外周血涂片和骨髓涂片2张或2张以上。结果22例患者单倍相合并基因造血干细胞移植后骨髓像全部达到正常,完全缓解。移植成功随访,其中6例患者随访中骨髓细胞出现少许病态造血现象,2例出现纯红细胞性再生障碍性贫血（PRCA）,余14例骨髓正常。结论单倍相合并基因骨髓移植能够使白血病和重型再障骨髓重建。造血重建恢复期可能继发骨髓增生异常综合症（MDS）和PRCA。     

抑制SDF-1活性对HL60细胞增殖影响的实验研究

目的：通过应用SDF-1受体CXCR4单克隆抗体(12G5)观察抑制SDF-1活性对HL60细胞增殖活性的影响，探讨趋化因子SDF-1在维持HL60细胞生存能力中的作用。方法：培养骨髓基质细胞，并与HL60细胞共培养，采用SDF-1受体CXCR4单克隆抗体阻断SDF-1生物活性后，用MTT法检测HL60细胞活力，流式细胞术观察HL60细胞增殖周期变化、检测细胞膜表面CXCR4表达，同时检测CXCR4单克隆抗体应用前后HL60细胞内游离钙离子浓度等。结果：应用抗CXCR4单克隆抗体后，HL60细胞出现下列变化：(1)细胞膜表面CXCR4表达下调；(2)增殖周期中G0／G1期的细胞增多，增殖期细胞减少；(3)细胞活性下降；(4)细胞内游离钙离子浓度降低，并与单抗浓度呈正相关。结论：抑制SDF-1活性可在一定程度上抑制白血病细胞增殖，但对于抑制髓内残留病变的形成尚需进一步研究。     

小剂量MIP-1α联合IL-8体外对人骨髓造血细胞集落形成的影响

目的 了解小剂量巨噬细胞炎症蛋白－1α(Macrophage inflammatory protein-α MIP-1α）联合白细胞介素－8（Interleukin-8,IL-8）对人骨髓造血细胞集落形成的影响。方法 取人骨髓，根据随机单位组方差分析设计，将每例标本分为空白组（不加MIP－1α和IL－8）；10ng/ml联合组（加入10ng/ml的MIP－1α和IL－18）。建立半固体培养体系，一定时间后，观察集落粒单细胞集落形成单位（CFU－GM）、红细胞集落形成单位（CFU－E）和混合信集落（CFU－E）和混合集落（CFU－Mix）的形成情况。结果 1ng/ml的浓度下，相同浓度的MIP－1α与IL－8联合使用对人骨髓造血细胞集落的形成没有明显的抑制作用；而在10ng/ml的浓度下，两者联合使用则能明显地抑制人骨髓造血细胞集落的形成。两种因子单独使用，未见明显的集落形成抑制作用。结论 10ng/mlMIP-1α与IL－8能相互协同抑制人骨髓造血细胞集落的形成。