非霍奇金淋巴瘤侵犯骨髓时Cx43表达情况

目的:研究非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin' s lymphoma,NHL)骨髓侵犯患者骨髓病灶中间隙连接蛋白（connexin,Cx）43表达情况。 方法:选取我院确诊的非霍奇金淋巴瘤骨髓侵犯患者26例,骨髓组织中查见呈灶性分布且已通过免疫组化证实为反应性淋巴细胞增生的患者9例,正常骨髓组织10例行免疫组化染色,根据阳性率及阳性程度评分后进行统计学分析。 结果:Cx43在NHL样本中的阳性率（30.8%）低于在反应性淋巴细胞增生样本（88.9%）及正常样本（100%）中的阳性率,差异有统计学意义（P<0.05）。而反应性淋巴细胞增生样本和正常样本间Cx43阳性率无统计学意义（P>0.05）,但反应性淋巴细胞增生样本的阳性积分明显低于正常样本（P<0.05）。结论:非霍奇金淋巴瘤骨髓侵犯时病灶处Cx43表达情况显著低于反应性淋巴细胞增生及正常骨髓组织。     

做好骨髓细胞形态学检验室内质量控制要素分析及改进

骨髓细胞形态学的实验室质量控制（QC）主要由室间质控（EQA）和室内质控（IQC）两部分组成。目前,EQA主要是参加卫生部临检中心设置的骨髓细胞质控评价。IQC与其他实验室相比有其特殊性,除了重视标本、试剂及实验操作流程的IQC外,对检验人员的质控也十分重要。     

罕见母细胞性浆细胞样树突细胞肿瘤诊断1例及文献复习

正母细胞性浆细胞样树突细胞肿瘤(BPDCN)是一组非常罕见的淋巴造血系统的恶性肿瘤。2008年世界卫生组织(WHO)将BPDCN列为一个单独类型,划归为急性髓系白血病(AML)及相关前体细胞肿瘤目录下[1],曾被命名为母细胞性自然杀伤细胞淋巴瘤或造血细胞肿瘤等[2-3]。肿瘤细胞高表达CD123(IL-3α链受体),还表达浆细胞样树突细胞     

不同类型异基因造血干细胞移植后的急性白血病患者骨髓形态学比较

目的观察单体型相合造血干细胞移植及全相合异基因造血干细胞移植后骨髓形态学差异及造血重建情况。方法在235名实施异基因造血干细胞移植患者中,单体型相合120名,采用外周血造血干细胞联合骨髓移植;115名全相合的患者,采用单纯的外周血造血干细胞移植。在造血干细胞移植成功出层流室+30 d行骨髓穿刺抽吸涂片观察骨髓形态学差异,并观察造血重建情况。结果 235名患者均成功重建造血。全相合患者白细胞及血小板重建的时间分别14.7 d(12～26 d)及20.6 d(13～32 d);单体型相合造血干细胞移植患者白细胞及血小板重建的时间分别12 d(10～21 d)及18 d(15～30 d);2者之间的差异具有统计学意义(P0.05)。2组患者造血干细胞移植后骨髓全部完全缓解。在骨髓增生程度、粒红比例和细胞形态等方面有差异,但差异无统计学意义(P0.05)。结论单体型相合造血干细胞移植较全相合移植造血重建早,移植后骨髓形态学有差异,但差异无统计学意义。     

-80℃条件下不同细胞浓度外周血干细胞冻存效果的实验观察

目的　观察不同细胞浓度外周血干细胞在 - 80℃条件下的冻存效果。方法　采用一种简便的 - 80℃干细胞冻存方法 ,其干细胞保护剂终浓度为 5 %二甲基亚砜 (DMSO) ,3%羟乙基淀粉 (HES)和 4 %人血白蛋白 (HSA) ,不经程序降温 ,直接 -80℃冰箱冻存外周血干细胞 ,并在不同时相点 (冻存后 1、3、6、9、1 2个月 )对推荐细胞浓度组 (1 .3～ 3.9)× 1 0 7/ml、调整细胞浓度组 (8.0～ 2 9.9)× 1 0 7/ml和高细胞浓度组 (30 .1～ 70 .1 )× 1 0 7/ml的外周血干细胞的细胞活性进行检测 ,观察台盼蓝拒染率和MNC、CFU GM、CD34+ 细胞的回收率。结果　 3组干细胞活性在 1 2个月内无明显下降 ;干细胞冻存后 9个月期间 ,3组冻存细胞的台盼蓝拒染率 ,MNC回收率、CFU GM回收率、CD34+ 细胞回收率都在 80 %以上。冻存 1 2个月中 ,3组在冻存后同一时间相互比较无统计学差异 (P >0 .0 5 ) ,说明该 - 80℃干细胞冻存方法适用于不同浓度的细胞液 ,短期内具有良好的冻存效果。结论　5 %DMSO、3%HES和 4 %HAS作为干细胞冷冻保护剂直接 - 80℃冰箱冻存外周血干细胞的方法能有效地保护不同浓度细胞液的外周血干细胞活性 ,适当地提高细胞保存时的浓度 ,减少回输量 ,可避免因干细胞冻存而引起的副作用     

Cx43和GFP双基因共表达重组腺病毒载体的构建和鉴定

目的构建间隙连接蛋白43（Cx43）和绿色荧光蛋白（GFP）双基因共表达重组腺病毒载体。方法利用PCR方法从真核表达载体pcDNA3.0-Cx43扩增Cx43片断,利用DNA重组技术,将目的基因Cx43克隆至含有报告基因GFP的穿梭质粒pAdTrack-CMV,然后在BJ5183细胞中将重组穿梭质粒pAdTrack-Cx43与pAdeasy-l质粒进行同源重组,产生重组腺病毒载体pAd-Cx43-GFP,用PacⅠ单酶切鉴定重组载体;将pAd-Cx43-GFP转入293细胞中包装,荧光显微镜观察报告基因GFP的表达,Western blot方法检测293细胞中Cx43表达。结果（1）通过PCR方法从载体pcDNA3.0-Cx43扩增出单一条带,与Cx43片断大小相符;（2）重组穿梭质粒pAdTrack-Cx43经NotⅠ/XhoⅠ双酶切后,电泳可见2个大小约为9、1kb条带,证明pAdTrack-Cx43构建成功;（3）同源重组产物pAd-Cx43-GFP经PacⅠ酶切后,电泳可观察到2个大小约为31、4kb左右条带,与预期结果相符,提示同源重组成功;（4）荧光显微镜下观察可见转染pAd-Cx43-GFP后293细胞在培养1-2d即有绿色荧光表达;（5）利用WesternBlot法检测到转染pAd-Cx43-GFP后293细胞中Cx43的表达较未转染组增强。结论Ad-Cx43-GFP重组腺病毒载体构建成功。     

自体外周血干细胞移植联合生物治疗及长间歇维持化疗序贯治疗成人急性非淋巴细胞白血病的临床研究

目的 评价大剂量化疗、自体外周血干细胞移植、生物治疗,长间歇维持化疗序贯治疗成人急性非淋巴细胞白血病(ANLL)的疗效.方法 32例成人急性非淋巴细胞白血病患者首次缓解并经3个周期大剂量阿糖胞苷强化治疗后,行自体外周血干细胞移植,预处理方案采用MAC、CEAC等,造血重建后予以大剂量IL-2生物治疗4个疗程,之后每3～4个月予以长间歇化疗1次,共维持2年,常用方案包括TA、MA、HEA 等.结果 32例患者移植后均成功重建造血,无一例移植相关死亡.长间歇维持化疗满2年的12例中,有8例存活;存活中位时间为确诊后1268(953-1926)d,移植后986(725-1742)d,平均生存时间为1475.7 d,3年无病存活率为(66.7±8.1)%;其余维持化疗还未到2年的20例患者中,有2例复发(10.0%),其中1例死亡(5.0%),其余18例至今病情稳定.结论 大剂量化疗、自体外周血干细胞移植、生物治疗、长间歇维持化疗序贯治疗成人急性非淋巴细胞白血病,治疗相关死亡率低,无病生存率较高,可作为改善成人ANLL治疗效果的重要措施.     

3种G-CSF动员224例外周血干细胞效果比较

目的比较3种粒细胞集落刺激因子(G-CSF)对外周血干细胞的动员效果。方法我科自体外周血干细胞移植病人224例,采用3种粒细胞集落刺激因子(吉赛欣、欣粒生、惠尔血)进行外周血干细胞动员,对干细胞动员情况、干细胞质量、移植后造血重建和药物毒副作用进行比较。结果224例病人全部移植成功,其动员效果、干细胞质量及在移植后造血重建中的临床效果差异均无显著性,毒副作用小。结论吉赛欣和欣粒生两种国产制剂及惠尔血能可靠用于外周血干细胞动员及造血重建,尤其是国产制剂的价格明显低于进口产品,在有效保证动员效果的同时大大减轻了病员的经济负担,值得临床应用推广。     

Effects of anti-CXCR4 monoclonal antibody 12G5 on proliferation and apoptosis of human acute myelocytic leukemia cell line HL-60

Objective:To investigate the expression of CXCR, on HL-60 cell line and the proliferation, apoptosis of HL-60 cell line cocultured with bone marrow stromal cells, so as to assess the possibility of 12G5. an anti-CXCR4 monoclonal antibody, in eradicating the minimal residual disease. Methods:The activity of SDF-1 was inhibited by 10μg/ml 12G5. After treatment with 12G5. the status of adhesion was observed, and the adhesion rates, apoptosis and cell cycles were detected after 24 h of treatment. Cell growth rates were measured by trypan blue exclusion. Cell growth curve was plotted, and the expression of PCNA and apoptosis related protein including PCNA, Bcl-2 and Fas were detected with immunohis-tochemical technique. Results :(1) There was middling degree expression of CXCR4 on HL-60 membrane. From 0 h to 6 h, as the time of 12G5 incubation along, the expression of CXCR4 decreased gradually. (2) After treatment for 24 h, the adhesion rates in the experiment group and the control were (39. 4±7. 9)% and (51. 4±5. 9)%, respectively. (3)After treatment for 24 h, the percentage of HL-60 cells in G0/G1 phase were (55. 21±4. 9)%, and that in S phase and G2/M phase were (30. 40±4. 1)% and (14. 39±5.2)%, respectively, with the corresponding proportions being (44. 67±2. 2) % , (45. 30±3. 7)% . and (10. 03±2. 6)% in the control. (4) The percentage of apoptotic HL-60 cells was (8. 95±1. 7)% in the experiment group, compared to (3. 97±2. 4)% in the control. (5)The survival rates of HL-60 cells decreased markedly at 48 h to 96 h, and the proliferation slowed down at this time duration. (6)The expression of PCNA and Bcl-2 down-regulated significantly, but the Fas protein expression was up-regulated. Conclusion :12G5 could inhibit the capability of adhesion and proliferation of HL-60 cells and it can induce more cells to enter G0/G1 phase and promote apoptosis. It may be helpful by inhibiting the bioactivity of SDF-1 with 12G5 in the therapy of marrow residual disease.