视网膜母细胞瘤(RB)银染核仁组织者区和银染近端着丝粒染色体联合的观察

人类近端着丝粒染色体的次缢痕区经银染技术处理后,可特异的染色,称之为银染核仁组织者区(Ag—NOR),目前认为该区是rRWA基因编码的部位。Ag—NOR的频率和大小可反应rRNA基因的转录活性。银染近端着丝粒染色体的联合(Ag—AA)表示染色体之间有银染物丝     

IL-6R基因多态性与2型糖尿病的关系

白细胞介素6受体(Interleukin 6 recepor,IL-6R)属细胞因子受体超家族,是介导白细胞介素6(Interleukin 6,IL-6)信号转导的"中介分子",在IL-6信号传导过程中起关键作用.IL-6是一种多功能的细胞因子,可由不同种类细胞产生,如淋巴细胞、脂肪细胞、肝细胞、内皮细胞等,在免疫和炎症反应中发挥重要作用.机体IL-6水平上升,可导致许多疾病的发生.     

miR-150对糖尿病肾病小鼠MSCs中迁移相关蛋白表达的影响

目的探讨miR-150对糖尿病肾病小鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)中趋化因子受体4(CXCR4)蛋白表达的影响。方法提取糖尿病肾病(DN)小鼠与正常小鼠MSCs,通过成骨、成脂诱导及表面分子的特征鉴定MSCs;通过RT-PCR检测DN小鼠与正常小鼠MSCs中miR-150的表达情况;Western blot检测CXCR4和基质细胞衍生因子-1(SDF-1)蛋白的表达;Transwell实验检测细胞迁移能力。结果 MSCs诱导分化为脂肪细胞和骨细胞,并且其CD29(97.6%±2.2%)和CD90(99.1%±0.6%)表达阳性,CD45呈阴性表达(17.3%±4.5%),符合干细胞特性。miR-150在DN组MSCs中呈低表达(P0.05),在正常小鼠MSCs中,抑制miR-150表达后,CXCR4蛋白表达明显增加;过表达miR-150后,CXCR4及SDF-1的表达显著降低(P0.05)。结论 DN组MSCs中miR-150表达异常可能是其表达迁移相关蛋白异常的重要原因。     

PCR及Real-time PCR评价细菌DNA提取方法

目的:比较几种不同的细菌DNA提取方法,建立一种适于PCR和Real-time PCR的细菌DNA提取方法.方法:分别用蛋白酶K法、碱裂解法、Chelex-100 NP40、Chelex-100 TritonX-100法和水煮法提取同种浓度大肠杆菌DNA,测定OD260/280;用不同方法提取不同浓度的大肠杆菌DNA,进行PCR和实时荧光定量PCR扩增,比较灵敏度.结果:5种方法提取细菌DNA,其中Chelex-100 NP40 法纯度(OD260/280=1.79±0.03)最高,此方法所提取的DNA产物进行PCR及Real-time PCR扩增未见假阳性及假阴性,其灵敏度为10个/ml细菌浓度.结论:Chelex-100 NP40的细菌DNA提取方法纯度及灵敏度高,且适应于PCR及Real-time PCR.     

microRNA let-7a-3基因甲基化与糖尿病肾病的关系

目的探讨微RNAlet-7a-3基因启动子甲基化与糖尿病肾病的关系。方法采用生物信息学方法预测let-7a-3基因启动子区域甲基化位点,采用real-time PCR及甲基化特异性PCR检测20例糖尿病肾病(DN)患者、20例糖尿病患者(DM)以及20例正常对照(CON)的let-7a-3表达水平及启动子区域甲基化水平。结果 let-7a-3在DN组呈低表达。同时,DN组的平均甲基化率为96.2%±6.2%,DM组的平均甲基化率为76.6%±18.9%,正常组的平均甲基化率为63.2%±28.4%。DN组的平均甲基化水平较DM组和正常组显著增高(P0.01)。结论 let-7a-3启动子区域高甲基化可能是糖尿病肾病患者let-7a-3低表达的一个重要因素,并参与调控糖尿病肾病的发生与发展。     

长链非编码RNA Gm4419通过NF-κB信号通路调控高糖下系膜细胞炎症因子的表达

目的 探讨长链非编码RNA Gm4419通过核转录因子-kappa B(nuclear factor-kappa B,NF-κB)信号通路对高糖培养的肾小球系膜细胞炎症因子表达的影响.方法 在高、低糖培养的小鼠肾小球系膜细胞中,采用RT-qPCR检测Gm4419的亚细胞分布及NF-κB亚基p50和p65的表达水平;采用RT-qPCR及免疫荧光检测上、下调Gm4419后炎症相关因子TNF-α和MCP-1的表达;采用生物信息技术分析Gm4419与p50和p65关系;采用Western blot检测上、下调Gm4419后细胞核中p50和p65的表达水平,以及检测特异性p50抑制剂对过表达Gm4419影响MCP-1表达的作用.结果 Gm4419在肾小球系膜细胞高糖组表达水平显著高于低糖组(P＜0.05),且主要分布在系膜细胞的细胞质中.同时,在低糖组过表达Gm4419后MCP-1、TNF-α表达水平显著增加(P＜0.01);而在高糖组沉默Gm4419后MCP-1、TNF-α表达水平显著减少(P＜0.01).此外,Gm4419与NF-κB亚基p50和p65均存在潜在结合位点,过表达Gm4419后胞核p50和p65蛋白表达水平显著增加,NF-κB活化增强(P＜0.01);而沉默Gm4419后胞核p50和p65蛋白表达水平显著降低,NF-κB活化减弱(P＜0.01),且过表达Gm4419增加MCP-1表达的效应可被特异性p50抑制剂阻断.结论 Gm4419可能在促进高糖下系膜细胞炎症因子表达中扮演重要角色,其机制可能涉及NF-κB信号通路.     

蛋白酪氨酸磷酸酶1B与胰岛素抵抗及2型糖尿病的关系

蛋白质酪氨酸磷酸化是细胞代谢、信号传导及细胞周期调控的重要调节步骤。蛋白质酪氨酸磷酸酶-1B（Protein—tyrosine Phosphatase-1B,PTP1B）属于蛋白质酪氨酸磷酸酶家族,是在体内广泛表达的胞内蛋白质酪氨酸磷酸酶,由PTPN1基因编码,PTP1B通过对胰岛素受体激酶（insulin receptor kinase,IRK）或IRK活性片段的磷酸化酪氨酸残基去磷酸化作用对胰岛素信号传导进行负调节：PTP1B表达的改变,与人类的多种疾病相关,包括2型糖尿病和癌症等：越来越多的证据表明：PTP1B在调节胰岛素敏感性和能量代谢过程中均起着重要作用。     

中国汉族人内皮细胞型一氧化氮合酶基因多态性研究

目的:探讨内皮细胞型一氧化氮合酶(eNOS)基因(CA)n二核苷酸重复序列基因多态性在中国汉族人群中的分布.方法:应用聚合酶链反应结合聚丙烯酰胺凝胶电泳和硝酸银染色,对291名中国汉族人的eNOS基因(CA)n多态性进行研究.结果:eNOS基因(CA)n存在23种等位基因和93种基因型,基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡(P＞0.05).PCR扩增片段长度范围为144bp～188bp,所含CA重复次数分别为19～41,分布频率介于0.34%～14.1%.该位点杂合度为0.85,多态信息量(PIC)为0.83.中国人群与高加索人群差异显著的11个等位基因分别为(CA)22、(CA)23、(CA)26、(CA)27、(CA)28、(CA)30、(CA)31、(CA)32、(CA)33、(CA)34、(CA)35,x2检验P均＜0.05.结论:该基因位点是1个含有高度遗传信息的DNA标志,其等位基因频率分布存在种族差异.