腺病毒介导的血管内皮生长因子体外转染心肌细胞的研究

目的:构建携带人血管内皮生长因子(VEGF)基因的重组腺病毒载体,并转染体外培养的心肌细胞,检测VEGF的表达.方法:将人源性的VEGF165cDNA正向插入到腺病毒载体PDC315,构建重组质粒,通过脂质体共转染293细胞,经同源重组获得携带人VEGF165基因的重组腺病毒,通过PCR扩增法鉴定所构建的腺病毒,扩增并测定滴度后,体外转染培养的心肌细胞,利用ELISA、Western印迹分析等方法检测VEGF在心肌细胞中的表达.结果:人VEGF165cDNA成功地正向插入到PDC315载体中,以重组病毒基因组DNA为模板,同时扩增出了610bp的VEGF165cDNA基因片段,证实了所构建病毒的正确性,病毒滴度为2.8×108 pfu/ml,Ad VEGF165体外转染心肌细胞3 d后,在培养细胞的上清液及细胞内检测到了VEGF的表达.结论:成功构建了表达人VEGF 165基因的腺病毒载体,体外转染心肌细胞后能够满意表达VEGF,为基因治疗心肌缺血奠定基础.     

术前放疗与术后放疗对中晚期食管癌预后的影响

目的比较术前放疗与术后放疗对中晚期食管癌预后的影响。方法 95例中晚期食管癌分为术前放疗(A组,45例)和术后放疗(B组,50例)两组。随访5年,用Kaplan-Merier法计算生存率。结果 A组和B组1年和3年生存率相仿(95.8%vs.90.0%和77.8%vs.62.0%)(P>0.05);A组5年生存率明显大于B组(62.2%vs.34.0%)(P<0.05)。淋巴结阳性的患者5年生存率明显大于淋巴结阴性患者(55.0%vs.15.4%)(P<0.05)。肿瘤长度>5 cm患者5年生存率明显大于≤5 cm患者(66.7%vs.32.2%)(P<0.05)。肿瘤外侵(+)患者5年生存率明显大于外侵(-)患者(52.6%vs.13.0%)(P<0.05)。结论与术后放疗相比,术前放疗能显著的提高中晚期食管癌患者5年生存率。对于肿瘤长度>5 cm、有外侵和有淋巴结转移的中晚期食管癌患者宜常规在根治术前行放射治疗。     

长春新碱对非小细胞肺癌中Livin基因表达的影响

目的:研究化疗药物长春新碱(Vincristine,VCR)对人肺癌细胞株A549生长的抑制作用以及Livin基因表达的变化.方法:将VCR按100、50、25、12.5、6.25、3.13、1.56、0.78 μg/ml浓度加入A549后,分别作用24、48、72小时,用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖抑制率;实时荧光定量PCR检测Livin mRNA的表达,免疫印迹法(Western blot法)检测Livin蛋白的变化.结果:VCR对A549具有一定增殖抑制作用,呈时间和剂最依赖性.VCR早期可抑制A549中Livin基因表达,作用72h后Livin基因表达量开始增加.结论:VCR可抑制A549肺癌细胞的增殖,在一定时间内呈剂量、时间依赖性.VCR可能诱导了Livin基因的表达,Livin可能参与了肺癌细胞对VCR的耐药机制.     

不同年龄大鼠心肌中CNTF表达的免疫组织化学研究

目的 :为了解睫状神经营养因子 ( CNTF)在大鼠生后心肌中的表达变化。方法 :用免疫组织化学法和计算机图像处理系统 ,研究 1天龄、1月龄、2月龄、3月龄、2年龄大鼠心肌中 CNTF免疫反应的变化。结果 :在各年龄组中均存在阳性免疫反应 ,阳性免疫反应见于心肌细胞膜上 ,各年龄组的平均灰度值分别为 2 5 .12± 0 .5 4、5 0 .12± 0 .6 7、5 7.2 5± 0 .6 2、43 .81± 0 .83、3 2 .14± 0 .73。结论 :睫状神经节因子在出生后的心肌细胞内即存在 ,其含量随心肌的发育而有所变化     

新辅助化疗对乳腺癌ER PR HER-2影响的研究

ER(雌激素受体)、PR(孕激素受体)及HER2在判断乳腺癌的预后、选择内分泌治疗、化疗及预测疗效方面都具有重要意义。本研究的目的旨在了解化疗前后ER、PR、HER2状态的变化。1资料和方法1.1研究对象2002年6月至2005年11月北京大学第一医院普通外科对43例T13N02M0女性乳腺癌初治病人行新辅助化疗,年龄27～74岁[(49.7±10.01)岁];临床分期:Ⅰ期8例、Ⅱa期21例、Ⅱb期8例、Ⅲa期6例。术后病理检查发现3例肿瘤病理完全缓解(pCR),无法行免疫组化检查。对余下的40例病人资料进行分析。所有肿瘤病灶均经16G活检针穿刺组织学检查证实为乳腺癌…     

血管内皮生长因子基因重组腺病毒载体的构建

目的 :构建携带人血管内皮生长因子基因的重组腺病毒载体。方法 :将人源性的 VEGF1 6 5c DNA正向插入到穿梭质粒 p HCMVSP1A的 CMV启动子之下 ,构建重组质粒 ,通过脂质体与 p JM17共转染 2 93细胞 ,经同源重组获得携带人 VEGF1 6 5基因的重组腺病毒 ,通过 PCR扩增法鉴定所构建的腺病毒 ,扩增、纯化并测定滴度。结果 :人VEGF1 6 5c DNA成功地正向插入到 p HCMVSP1A载体中 ,以重组病毒基因组 DNA为模板 ,同时扩增出 5 76 bp的VEGF1 6 5c DNA基因片段和 86 0 bp的腺病毒骨架基因片段 ,证实了所构建病毒的正确性 ,病毒滴度为 2 .5× 10 9pfu/ m l。结论 :成功构建了表达人 VEGF1 6 5基因重组腺病毒载体 ,使 VEGF基因的高效转染成为可能     

心脏肿瘤21例临床分析

回顾性分析心脏肿瘤21例，其中左心房粘液瘤19例，间叶性肉瘤1例，右心房间皮肉瘤1例。术前均经彩色心超确诊，20例在体外循环下行肿瘤摘除术，1例行肿瘤活检，心包开窗。无1例围手术期死亡。左心房粘液瘤效果满意，无复发及转移，恶性肿瘤预后不佳。故心脏肿瘤一旦确诊应尽快手术，彩色心超对诊断有重要作用。     

体外循环下气管肿瘤切除一例

患者 男,68岁.因刺激性咳嗽1个月,呼吸困难2周于2002年9月8日入院.患者咳嗽时口唇紫绀,呼吸极度困难,纤维支气管镜检查提示气管下端见一肿块几乎完全堵塞气管,肿块表面覆盖坏死组织,组织脆、易出血,CT检查示:气管隆突上4cm处见2.0 cm×1.5 cm肿块,占据气管腔的75%～80%.该患者27年前患食管上段癌经放疗后治愈,长期吸烟,有慢性支气管炎、肺气肿和哮喘病史.     

心脏手术中鱼精蛋白过敏性休克抢救成功3例

心脏手术体外循环结束后常规用鱼精蛋白中和肝素 ,使血液恢复到正常凝血状态。注射鱼精蛋白可引起变态反应或毒性反应 ,严重者可导致过敏性休克和心搏骤停 ,甚至死亡。本文报告 3例严重鱼精蛋白过敏性休克救治成功资料。1　病例介绍例 1　女 ,40岁 ,行二尖瓣置换术。经静脉缓慢滴注鱼精蛋白即将完毕时 ,突然血压骤降心脏膨胀 ,心跳微弱呈蠕动状 ,即刻停止滴注。再次肝素化建立体外循环 ,辅助循环后心跳恢复 ,同时静脉推注地塞米松 ,补足血容量。血压肾上腺素 0 .1 5 μg.kg-1/min,多巴酚丁胺 1 3μg.kg-1/ min,硝酸甘油 0 .4μg.kg-1/ min维…     

腺病毒介导的HSP70基因转染对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

目的:研究热休克蛋白70(HSP70)基因转染对体外培养的乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用。方法:体外原代培养乳鼠心肌细胞,以携带增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的腺病毒载体(Ad.EGFP)按不同感染倍数(MOI)感染体外心肌细胞,通过荧光显微镜、流式细胞仪观察所构建腺病毒的感染力和安全性;应用含有人HSP70基因的重组腺病毒(Ad.HSP70)进行体外感染,采用ELISA法、Western印迹法及免疫组化染色法检测HSP70基因在心肌细胞中的表达情况。利用体外心肌细胞缺氧/复氧损伤模型,研究HSP70基因转染对心肌细胞的保护作用。结果:原代培养获得高纯度的乳鼠心肌细胞,随着MOI值升高,Ad.EGFP的感染效率和基因表达增强,在MOI值为50时,Ad.EGFP感染心肌细胞的效率高于90%,在MOI值为200时,未见心肌细胞的生长明显受抑;ELISA法、Western印迹法证实转染的心肌细胞在正常生理状态下,可高水平表达HSP70。免疫组化染色法结果显示,表达的HSP70主要分布于心肌细胞的胞质和胞核中;利用体外的缺氧/复氧损伤模拟在体的缺血/再灌注损伤,结果显示Ad.HSP70感染组的细胞活力、MT...