增加细胞内三氧化二砷浓度恢复耐三氧化二砷的K562细胞对其敏感性的研究

目的 探讨耐受三氧化二砷（ATO）的白血病ATO耐药K562细胞（K562/AS2细胞）内砷浓度与耐药性的关系.方法 亲代敏感K562细胞（K562/S细胞）按照逐步增加ATO浓度诱导,建立K562/AS2细胞.采用原子荧光光谱法检测细胞内砷浓度.采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测不同浓度ATO对细胞的毒性作用.结果 1μg/ml ATO培养24、48、72h后,K562/S细胞内的砷浓度比K562/AS2细胞增高[（15.63±0.42） μg/L比0μg/L、（22.27±0.15） μg/L比（3.51±0.12） μg/L、（24.31±0.21） μg/L比（3.61±0.11） μg/L;均P＜0.05].随着ATO浓度的增加及培养时间的延长,K562/AS2细胞内砷浓度逐渐增加（P＜0.05）,在1μg/ml和2μg/ml间砷浓度增加较快.K562/AS2细胞生长抑制率也逐渐增加（P＜0.05）,在1μg/ml和2μg/ml间增加较快.直线相关分析显示,当K562/AS2细胞与ATO接触分别为24、48和72 h时,其细胞生长抑制率均与细胞内ATO浓度呈正相关.结论 增加ATO浓度或延长ATO作用时间均可增加耐药细胞内ATO浓度,细胞内ATO浓度与ATO对细胞的毒性呈正相关,增加细胞内ATO浓度能够增强耐ATO K562细胞对ATO的敏感性.     

α地中海贫血HKαα／--SEA基因型家系分析

目的：研究巢式 PCR 结合家系分析的方法对罕见α地中海贫血（α地贫）的诊断价值。方法对先证者及12名家系成员,采用血常规分析、红细胞脆性及血红蛋白电泳进行地贫筛查;采用 PCR-反向斑点杂交（ PCR-reverse dot blot , RDB ）技术诊断非缺失α地贫点突变和17种β地贫基因点突变;采用跨越断裂点聚合酶链反应（ Gap-PCR ）进行缺失型α地贫基因型分析;采用巢式 PCR 检测 HKαα基因型;绘制α地贫基因遗传图谱。结果12例家系成员中,4例 MCV、MCH、红细胞脆性低于正常参考值,8例血液学指标均无异常;12例血红蛋白电泳均正常;12例家系成员中--SEA／αα和αα／αα基因型各2例, HKαα／αα基因型6例, HKαα／--SEA基因型2例;均无17种常见β地贫和3种常见非缺失α地贫。结论巢式PCR 结合家系分析方法是发现罕见地贫基因型并减少HKαα地贫的漏诊误诊的重要方法。     

短发夹RNA抑制三氧化二砷耐药的白血病K562／AS2细胞MRP1基因表达的实验研究

 目的　研究短发夹RNA（shRNA）对耐三氧化二砷（As2O3）的白血病K562／AS2细胞MRP1基因表达的抑制作用。方法　设计并合成3条针对MRP1基因的shRNA序列,在脂质体的介导下转染K562／AS2细胞;用荧光实时定量PCR分析MRP1 mRNA的表达水平;流式细胞术检测MRP1蛋白表达和细胞内柔红霉素蓄积量。结果　经MRP1 shRNA作用24 h后,K562／AS2细胞株中MRP1 mRNA和蛋白表达水平明显下降,最大下调幅度分别为（79.1±0.07）% 和（62.48±0.86）%（P＜0.05）,同时细胞内柔红霉素蓄积量显著增加（P＜0.05）。结论　MRP1 shRNA可抑制As2O3耐药的白血病细胞株K562／AS2细胞MRP1基因的表达。     

血浆NT-pro BNP和Big ET-1在冠心病的代谢变化及其临床价值

目的:探讨冠心病(CHD)患者血浆N末端脑钠肽原(NT-proBNP)与大内皮素-1(Big ET-1)水平的变化及其与心功能的关系.方法:采用酶联免疫吸附试验双抗体夹心法对136例CHD患者及55例健康对照者进行血浆NT-proBNP和Big ET-1测定,同时以彩色多普勒超声心电动仪测定CHD患者左心室舒张末期内径...     

血浆C反应蛋白及D-二聚体检测在脊柱手术中的应用

目的:探讨血浆C反应蛋白及D-二聚体检测在脊柱手术中的应用.方法:2010年1月至2011年12月,对80例脊柱手术患者进行术前和术后血浆C反应蛋白及D-二聚体检测.血浆C反应蛋白采用免疫扩散法测定,血浆D-二聚体采用免疫散射比浊法测定.结果:术后出现感染者6例,其术后3d的血浆C反应蛋白含量明显升高,术后5d仍高于正常值;术后未感染者74例,其术后3d的血浆C反应蛋白含量逐渐下降并恢复正常.术后出现深静脉血栓者4例,其术后3～5d的血浆D-二聚体含量均高于正常值;术后未出现深静脉血栓者76例,其术后3d的血浆D-二聚体含量逐渐下降恢复正常.结论:血浆C反应蛋白及D-二聚体含量的变化与脊柱手术患者的病情发展密切相关,血浆C反应蛋白含量变化可提示有无感染,血浆D-二聚体含量变化对诊断有无深静脉血栓等并发症意义重大.     

rhG-CSF对化疗后骨髓抑制患者T淋巴细胞组成的影响

目的:观察重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)对化疗后骨髓抑制患者T淋巴细胞组成的影响。方法:化疗后出现Ⅱ°骨髓抑制的患者,给予皮下注射rhG-CSF150g,连续3d,用药前及用药后第3天用流式细胞仪检测外周血T淋巴细胞组成的变化。结果:流式细胞术分析发现,用药前CD4+T淋巴细胞占外周血CD3+T淋巴细胞比例为(52.96±8.45)%,用药后为(54.15±7.55)%,差异无统计学意义(P>0.05);用药前CD8+T淋巴细胞占外周血CD3+T淋巴细胞比例为(36.96±9.62)%,用药后为(34.56±8.32)%,差异无统计学意义(P>0.05);用药前CD4+CD25+T淋巴细胞占外周血CD4+T淋巴细胞比例为(4.56±1.32)%,用药后为(6.94±1.72)%,差异有统计学意义(P=0.000)。结论:rhG-CSF对化疗后骨髓抑制患者CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞在CD3+T淋巴细胞中的百分比无明显影响;但增加了CD4+CD25+T淋巴细胞在CD4+T淋巴细胞中的百分比。     

超速离心法与聚乙二醇沉淀法提取人多发性骨髓瘤细胞来源外泌体的比较

目的:鉴定比较超速离心法和聚乙二醇(PEG)沉淀法提取人多发性骨髓瘤细胞来源外泌体。方法:人多发性骨髓瘤细胞系RPMI 8226经去除外泌体无血清培养24~48 h培养后,分别使用超速离心法和PEG沉淀法进行外泌体的提取,分别测定两种方法所得外泌体的蛋白含量,并进行电镜鉴定比较。结果:超速离心法所提取外泌体测得实际浓度为(1.095±0.031)μg·μL~(-1),沉淀法所提取外泌体实际浓度为(2.069±0.086)μg·μL~(-1),组间比较,差异具有统计学意义(P0.001);超速离心法测得外泌体蛋白总量(109.513±3.113)μg,沉淀法所提取外泌体测得蛋白总量(206.883±8.580)μg,组间比较,差异具有统计学意义(P0.001)。电镜下超速离心法分离外泌体清晰可见,沉淀法提取的外泌体含有较多杂质,影响电镜观察。结论:超速离心法方法简单,耗时少,外泌体纯度高,可用于外泌体的蛋白、DNA和免疫功能研究。沉淀法耗时较长,所得外泌体杂质蛋白含量多,不适用于外泌体蛋白分析,可用于RNA分析。     

中老年人高尿酸血症与血糖血脂的关系

目的:分析中老年人高尿酸血症与血糖血脂的关系。方法:选取2013年2月至2015年3月来该院体检的中老年患者240例,按照血尿酸水平正常与否分为血尿酸水平正常组120例和高尿酸血症组120例。其中高尿酸血症组按照年龄分为老年组71例和中年组49例。分别检测并比较血尿酸正常组和高尿酸血症组的血糖(p G)、血脂(TC、TG)及血尿酸(SUA)水平,并比较高尿酸血症组中年和老年组合并高血脂(TC、TG)、高血糖的情况。结果:高尿酸血症组的TC、TG、BG和SUA水平显著高于SUA水平正常组,高尿酸血症组的老年患者单纯患SUA的发生率显著低于中年患者,合并高血脂和/(或)高血糖的发生率显著高于中年患者,组间比较差异均有统计学意义。结论:老年人的高尿酸血症与高血脂和高血糖密切相关,应引起高度重视。     

CD45设门多参数流式细胞术在急性白血病免疫表型分析中的应用

目的：分析急性白血病的抗原表达及其临床意义。方法：采用一组系列相关单抗直接免疫荧光标记CD45设门的多参数流式细胞术,检测35例急性白血病患者的免疫表型。结果：11例ALL中B－ALL8例,T－ALL3例,其中出现髓系抗原表达4例,占36．4％,CD34表达10例,占90．1％;24例AML中伴淋系抗原表达7例,占29．17％,CD34表达16例,占70．8％,DR的表达与CD34一致,5例M3患者均无CD34和HLA DR表达。伴髓系统原表达的ALL CR率低于髓系抗原阴性表达者（1／3及5／6）,但统计学上差异无显著性（P＞0．05）;伴淋系抗原表达的AML患者CR率明显低于淋系抗原阴性表达者（0／5及10／10）,两组间差异具有显著性（P＜0．01）。结论：CD45设门的多参数流式细胞术是分析白血病免疫表型的最好方法,白血病抗原的错义表达是预后不良的因素之一。