AML-M2a细胞诱导自体及异体克隆性增殖T细胞及其特异性细胞毒性作用的研究

目的:了解急性粒细胞白血病(AML)M_2a细胞诱导自体及异体T细胞受体(TCR)Vβ亚家族T细胞克隆性增殖情况及其细胞毒性。方法:采用混合淋巴细胞/肿瘤细胞培养(MLTC)方法,用M_2a细胞体外诱导正常人和M_2a患者自体的外周血T细胞,用RT-PCR扩增经MLTC获得的自体和异体T细胞的24个TCRVβ亚家族基因的互补决定区(CDR3),阳性产物进一步经基因扫描分析确定M_2a细胞诱导的T细胞克隆性特点。同时用MTT法对淋巴细胞因子激活的杀伤细胞(LAK细胞)和MLTC获得的T细胞进行细胞毒性分析。结果:M_2a细胞诱导的自体及异体T细胞均出现了4-17个TCRVβ亚家族的优势表达,部分表达的Vβ亚家族T细胞具有克隆性增殖的特点。MLTC的不同时期和不同个体来源对TCRVβ亚家族T细胞表达及克隆性增殖有所影响。与LAK细胞相比,MLTC获得的T细胞以CD8⁺T细胞为主,对M_2a细胞具有较高的特异性细胞毒性作用。结论:MLTC获得的TCRVβ亚家族克隆性T细胞是自体和异体T细胞对M_2a细胞刺激所产生的一种特异性细胞免疫反应。M_2a细胞诱导后的T细胞对M_2a细胞具有特异性细胞毒性作用。     

慢性粒细胞白血病相关的TCR Vβ T细胞的诱导及其限制性和克隆性分析

目的:了解体外诱导CML细胞相关TCRVβ亚家族T细胞克隆性增殖及其杀伤性的情况。方法:采用混合淋巴细胞/白血病细胞培养法(MLTC)体外将CML细胞、K562细胞和bcr-abl多肽与供者外周血单个核细胞混合培养和扩增,利用RT-PCR-基因扫描技术分析培养后T细胞的TCRVβ谱系的限制性利用和克隆性增殖情况,并经LDH法分析诱导增殖T细胞的杀伤性。结果:经bcr-abl多肽、CML细胞和K562细胞诱导扩增1-2周后,供者外周血T细胞表达10-13个Vβ亚家族,在Vβ16和Vβ21出现克隆性增殖T细胞,在Vβ5和Vβ13出现寡克隆生长趋势T细胞。诱导扩增后的T细胞对CML和K562细胞具有特异性杀伤作用。结论:利用CML细胞、K562细胞和bcr-abl多肽可在体外诱导出CML细胞特异性CTL,该CTL可能为优势表达的Vβ亚家族克隆性T细胞。     

夏至草醇提物对失血性休克大鼠器官一氧化氮及其合酶的影响

目的观察夏至草醇提物对失血性休克大鼠器官组织一氧化氮（NO）及其合酶（NOS）的影响。方法Wistar雄性大鼠18只，随机分为夏至草组、模型组和对照组（均n=6）。夏至草组和模型组复制失血性休克模型，维持90min，对照组仅手术。夏至草组自颈静脉缓慢推注夏至草醇提物（5g／ml，6g／kg．bw），其它两组以等量生理盐水代替。40min后，制备肝、肾、心肌、肺组织匀浆，检测各器官组织匀浆NO含量及NOS活性的变化。结果模型组肝、肾、心肌、肺组织匀浆NO含量及NOS活性均显著高于对照组（P〈0．01～0．05）；夏至草组各器官组织匀浆NO含量及NOS活性显著低于模型组（P〈0．01～0．05），且各指标与对照组无统计学意义（P〉0．05）。结论夏至草醇提物减轻大鼠重症失血性休克后器官损伤的机制与降低NO的生成和释放有关。     

益母草注射液对急性血瘀大鼠肠系膜淋巴微循环的作用

活血化瘀疗效与现代医学微循环的改善关系密切,淋巴微循环作为微循环的重要组成部分,经常与血液微循环互相影响,发挥着协同作用[1].益母草(Leonurus heterophyllus sweet的干燥地上部分)作为我国历版药典收载的常用中药,具有活血化瘀、利尿消肿的功能,临床常用于月经不调、心肌缺血、高粘血症和急性肾炎等疾病的治疗,多年来,由于实验手段的限制,其药效学研究多集中在改善血循环方面,未涉及对淋巴微循环的作用,为进一步了解益母草的活血化瘀作用,我们观察了益母草注射液对急性血瘀大鼠肠系膜淋巴微循环的作用,旨在深入研究益母草改善微循环的淋巴机制.     

冠心病患者Cypher支架与Partner支架置入术前后CRP水平的变化

目的探讨冠心病患者经皮冠状动脉介入治疗（PCI）置入国产雷帕霉素支架（Partner,乐普）与进口雷帕霉素支架Cypher术前术后血清C反应蛋白（CRP）水平的改变及临床意义。方法92例临床表现为胸闷胸痛且经冠脉造影检查确诊为冠状动脉粥样硬化狭窄程度≥70%的患者,分为Partner组和Cypher组。所有患者在术前及术后48h、72h、2周测定CRP,并临床随访造影及主要心血管事件8个月。结果两组血清CRP水平48h均较术前增高（P〈0.05）,支架术后72hCRP持续升高的患者在随访中发生心血管事件风险增加,2周后CRP已下降,两组之间比较无统计学意义。Partner组48例患者共置入支架52枚,术后TIMI血流3级48例,成功率100%;44例接收随访,随访时间8个月,3例仍有心绞痛症状,无支架内再狭窄及心血管事件等发生。Cypher组44例患者共置入支架48枚,术后TIMI血流3级44例,临床成功率100%;40例接受随访,随访时间8个月,2例仍有心绞痛症状,无支架内再狭窄及心血管事件等发生。结论Partner支架和Cypher支架引起炎症介质CRP水平变化无统计学差异,国产Partner支架在冠心病患者中应用与Cypher支架近期具有一致的安全性和有效性。     

脐血中TCRVβ亚家族T细胞的分布和克隆性分析

目的:了解正常脐血中TCR Vβ亚家族T细胞的分布和克隆性。方法:利用RT-PCR分别扩增13例正常脐血单个核细胞的TCR Vβ 24个亚家族基因的CDR3,了解各Vβ亚家族的表达情况。阳性的PCR产物进一步经荧光素标记和基因扫描分析产物的CDR3长度,了解T细胞克隆性。10例正常人外周血和T细胞株Molt-4及Jurkat作为对照。 结果:正常脐血T细胞仅选择性表达24个Vβ亚家族的38.78%±16.26%,以Vβ3、5、8、9和13为多见,而正常人外周血T细胞则表达全部24个Vβ亚家族。基因扫描显示正常脐血和正常人外周血的全部PCR产物均呈多峰图象。结论:正常脐血存在不完全TCR Vβ亚家族T细胞,所有TCR Vβ亚家族T细胞均呈多克隆性。     

pVAX1-IL4/SYN-B核酸疫苗对鱼藤酮慢性帕金森病小鼠的治疗作用

目的探讨优化人α-突触核蛋白(humanα-synuclein,hα-syn)核酸疫苗pVAX1-IL4/SYN-B对鱼藤酮慢性帕金森病小鼠的治疗效果。方法采用鱼藤酮1 mg/kg给予背部皮下注射,1次/d,连续注射40 d,建立慢性帕金森病小鼠模型。建模后小鼠随机分为3组:核酸疫苗组、空质粒组、PBS组(n=8)。于小鼠双侧后肢胫前肌部位,分别注射pVAX1-IL4/SYN-B核酸疫苗,空质粒pVAX1,PBS各100μL,共免疫3次,每次间隔3周。末次免疫后2周,观察小鼠行为学变化;免疫组化方法检测小鼠脑黑质致密部α-syn表达和酪氨酸羟化酶阳性细胞数目变化;RT-PCR检测α-syn mRNA表达情况。结果行为学观察各组小鼠自由活动实验显示,核酸疫苗组与空质粒组及PBS组小鼠移动格子数和下肢站立次数均有明显改善(P<0.05)。免疫组化检测发现核酸疫苗组小鼠与空质粒组、PBS组相比,TH阳性细胞数增加51.43%、59.00%(P<0.05),α-syn表达减少45.64%、43.28%,(P<0.05)。RT-PCR检测发现核酸疫苗组α-syn mRNA表达水平(0.37±0.17)较空质粒组(0.80±0.01)及PBS组(0.74±0.05)明显减少(P<0.05)。结论 hα-syn核酸疫苗有较强改善帕金森病小鼠行为学的作用;能有效改善鱼藤酮神经毒素对黑质多巴胺能神经元的损害,能对帕金森病小鼠产生较好的免疫治疗作用。     

Ph+和Ph-CML病人外周血TCR Vβ T细胞分布特点

为了解Ph^ 和Ph^-慢性粒细胞白血病（CML）病人外周血TCR Vβ亚家族T细胞的分布特点，利用RT－PCR分别扩增13例CML病人（Ph^ -b3a2型5例，Ph^ -b2a2型5例，Ph^-型3例）外周血单个核细胞的TCR Vβ的24个亚家族基因片段，了解病人各Vβ亚家族的利用情况。研究结果：发现与正常人有所不同，病人仅存在部分TCR Vβ亚家族T细胞，Ph^ -b3a2型CML表达4－16（平均10．2）个Vβ亚家族，Ph^ -b2a2型CML表达8－11（平均8．8）个Vβ亚家族，而Ph^-者表达506（平均5．7）个Vβ亚家族。各病人表达的Vβ亚家族分布有所不同，在Ph^ (b3a2型）全部病人表达Vβ10和Vβ16，其次为Vβ9和Vβ22；Ph^ （b2a2型）除与Ph^ (b3a2型）相同全部病人表达Vβ10和Vβ16外，还全部表达Vβ24，其次为Vβ8；而Ph^-者全部表达Vβ24，其次为Vβ3，Vβ10，Vβ13和Vβ22。结论：提示Ph^ 和Ph^-CML病人外周血的TCR Vβ亚家族T细胞存在倾斜性分布现象，不同类型CML病人T细胞的TCR Vβ选择性利用有所不同，这可能与CML细胞相关抗原的差异以及个体特异性免疫反应的差异有关。     

被动皮肤过敏反应大鼠肠系膜淋巴管的变化

目的观察被动皮肤过敏反应（PCA）大鼠肠系膜淋巴微循环的变化，探讨Ⅰ型变态反应性皮肤病的淋巴机制。方法清洁级雄性Wistar大鼠随机分为对照组、PCA1组、PCA2组、PCA3组。用卵清蛋白（OVA）作抗原制备抗血清，分别于大鼠背部脊柱两侧去毛处皮内注射5％、10％、20％抗血清，48h后再用10％OVA攻击致敏，复制PCA模型；对照组用生理盐水代替。各组动物分别于OVA攻击前10min及攻击后10min、20min、30min时测量肠系膜淋巴管口径，计算肠系膜淋巴管收缩性指数IndexⅠ、IndexⅡ、LD Index。结果成功复制了大鼠PCA模型。在OVA攻击前肠系膜淋巴微循环的各项指标均无统计学差异。在OVA攻击后30min，肠系膜淋巴管口径扩张、收缩频率增强、收缩性指数增加。结论PCA发生后，淋巴回流动力明显增强，可能是导致变态反应性皮肤病皮损区淋巴细胞浸润的重要因素之一。     

帕金森病脑脊液蛋白质组学研究

目的寻找头痛和帕金森病(PD)患者用药前、后脑脊液差异蛋白质点,确定PD疾病特异性蛋白(DSPs)和药物治疗对蛋白质表达谱的影响。方法收集2004—2006年重庆医科大学附属第一医院神经内科收治的24例PD患者及12例对照组头痛患者脑脊液。用双向凝胶电泳(2D-PAGE)分离蛋白质,银染染色,分析图像寻找有意义的差异蛋白点;进行质谱(MS)鉴定。结果脑脊液蛋白质点主要集中在pH 4~7,头痛组与帕金森用药前后脑脊液电泳图谱蛋白质点分布基本一致,符合临床脑脊液生化常规检查,甲状腺激素结合蛋白、载脂蛋白E在PD患者用药前后相对于对照组都消失,血清转铁蛋白在PD患者用药前后相对于对照组都明显上调。结论用药前后PD患者脑脊液蛋白质点与头痛组脑脊液蛋白质点存在差异,药物治疗对PD患者脑脊液蛋白质表达谱影响不明显。