抗阿尔茨海默病神经保护肽[Gly14]-Humanin融合基因工程菌发酵工艺研究

目的优化大肠杆菌表达重组[Gly14]-Humanin(HNG)融合基因工程菌的发酵工艺。方法在15L发酵罐内,研究培养基、培养条件和诱导时间对工程菌生长和目的蛋白表达的影响,并考察工程菌中重组质粒的遗传稳定性。结果工程菌在pH7.4的2×YT培养基中诱导5h,菌体湿重可达80g/L,目的蛋白表达量约占总蛋白的36%,所构建的重组质粒在BL21宿主菌中传代稳定。结论优化了HNG融合基因工程菌的发酵和表达条件,为药物中试研究和规模化生产奠定了基础。     

两种蛋白电泳染色方法的比较

十二烷基硫酸钠．聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）可用于检测蛋白质的相对分子质量，但常规的考马斯亮蓝R-250染色法耗时长，成本高，废弃的甲醇和冰醋酸还可造成对实验室和周围环境的污染。我们在实验过程中逐渐摸索出一种非常省时、成本很低并且对环境无污染的染色方法。     

益气养阴活血解毒方药联合化疗减少非小细胞肺癌颅内转移的效果观察

目的观察益气养阴活血解毒方联合化疗减少非小细胞肺癌颅内转移的效果。方法以益气养阴活血解毒方联合化疗治疗32例中、晚期非小细胞肺癌患者,并与化疗组进行对照,观察2组病人颅内转移情况。结果益气养阴活血解毒方联合化疗组颅内转移率为18.7%明显低于化疗组的34.4%(P<0.05)。结论益气养阴活血解毒方具有抑制肺癌颅内转移的作用,其抑制转移的机理有待进一步探讨。     

关于生物化学与分子生物学教学改革的实施与思考

生物化学内容涉及面广，理论性和实践性强，教学难度较大。本着边研究、边实践、边提高的原则，从理论教学和实验教学两方面，对教学手段、课程体系、教学内容等方面进行了改革和尝试。理论教学方面，增加了课后串讲，要求学生撰写辅导性论文，开设了专题讨论课，并申报省级精品课程；实验教学方面，设立了生物化学开放实验室，增加了综合性、设计性实验，并在实验内容中加强了分子生物学实验，取得了较好的效果。     

AP-2α基因转染对人类结肠癌SW480细胞体外增生及侵袭能力的影响

目的 探讨AP-2α基因对人类结肠癌SW480细胞体外增生及侵袭能力的影响.方法 构建PODNA3.1(+)-AP-2α真核表达载体,利用脂质体介导pcDNA3.1(+)-AP-2α和pcDNA3.1(+)转染5W480细胞,并以正常SW480细胞作为空白对照;采用RT-PCR与Western blotting分别检测转染48 h后各组细胞中AP-2αmRNA与蛋白的表达情况;采用平板克隆、软琼脂克隆形成试验以及Transweil侵袭试验,分别检测各组细胞体外增生及侵袭能力.结果 SW480细胞内源性AP-2α蛋白表达缺失;转染AP-2α基因后,在SW480细胞中可检测到高水平的AP-2αmRNA及蛋白,细胞克隆形成率降低(P<0.05),软琼脂克隆体积小且数量少,细胞侵袭能力下降(P<0.05).结论 转染AP-2α基因可以抑制人类结肠癌SW480细胞的体外恶性增生以及侵袭能力.     

大肠腺瘤及癌组织APC基因突变分析

目的探讨腺瘤、大肠癌组织与APC基因突变的关系。方法41例大肠癌与腺瘤组织标本,采用银染单链构相多态性技术分析APC基因突变情况。结果35例原发性结、直肠癌组织有16例发生APC基因突变,突变率为45.7%。8例腺瘤组织检出突变3例,突变率为37.5%。APC基因在散发性大肠腺瘤与大肠癌中均有较高突变频率,两者差异无统计学意义。结果还表明,APC基因突变与年龄、性别、肿瘤性质、位置、类型、分期、淋巴结转移无关。结论APC基因突变在大肠腺瘤阶段就出现,属于大肠癌发生的早期阶段。检测APC基因突变能预测腺瘤的癌变倾向,有助于早期发现大肠癌。     

雌激素对Aβ25-35致PC12细胞损伤的影响

目的观察可溶性Aβ25-35作用下PC12细胞细胞活力的改变及17β-雌二醇(17βE2)对此改变的影响。方法培养的PC12细胞作为神经细胞体外模型,可溶性Aβ25-35作用于PC12细胞作为AD早期病理损害的细胞模型,实验设空白对照组、Aβ损伤组、雌激素干预组,雌激素干预组再分为五个剂量亚组,分别于培育各时间点(0.5,6,24,48,72 h),用噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力,乳酸脱氢酶(LDH)法检测细胞损伤程度。结果Aβ损伤组与空白对照组相比,PC12细胞代谢活力(MTT还原率)明显降低(P<0.01),细胞培养液上清中LDH漏出明显增多(P<0.01),以上损伤出现较早,并随着时间的延长而加重。与Aβ损伤组比较,在10-9-10-6mol/L各浓度下,17βE2组细胞MTT还原率均有显著提高,细胞培养液上清LDH漏出均有显著降低,且有剂量依赖性。结论超生理量的Aβ即使呈可溶解状态也可以对神经元细胞造成毒性损害,雌激素具有剂量依赖性的抗Aβ损伤和神经细胞保护作用。     

瘦素对人骨髓间充质干细胞成骨分化的影响

背景:瘦素及其受体在中枢和外周多个部位均有表达,具有多种生物学功能,对于骨代谢有着重要的影响作用,但目前瘦素影响骨重建的机制尚未完全明了.目的:探讨瘦素对入骨髓间充质干细胞成骨分化能力的影响.设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2008-03/2008-09在山西医科大学生化与分子生物学实验室完成.材料:健康志愿者髂骨骨髓由山西医科大学第二医院提供.瘦素为Sigma公司产品.方法:采用全骨髓法体外分离培养人骨髓间充质干细胞,传至第3代以1×108L-1密度接种至预置盖玻片的6孔培养板中,设立3组:成骨诱导组添加原代培养液后,再加入含10-8 mol/L地塞米松、10 mmol/L β-磷酸甘油,50 mg/L维生素C的成骨诱导培养基:成骨+瘦素诱导组添加成骨诱导培养基后,再加入50 nmol/L瘦素;空白对照组仅加入含体积分数为10%胎牛血清的LG-DMEM培养液.主要观察指标:骨髓间充质干细胞表面标志表达、钙化结节染色结果、碱性磷酸酶活性,Ⅰ型胶原及骨钙素含量、骨保护素和RANKL蛋白的表达.结果:第3代骨髓间充质干细胞CD44和CD71阳性率分别为95.21%,72.31%,CD34阳性率仅为0.39%.成骨诱导21 d后von Kossa染色可见呈棕黑色的细胞外基质钙盐沉积.诱导14 d与空白对照组比较,成骨诱导组、成骨+瘦素诱导组骨髓间充质干细胞内碱性磷酸酶活性及Ⅰ型胶原、骨钙素含量均明显升高(P＜0.05);且成骨+瘦素诱导组各指标升高幅度明显高于成骨诱导组(P＜0.05).与成骨诱导组比较,成骨+瘦素诱导组骨髓间充质干细胞骨保护素蛋白的表达明显上调(P＜0.05),RANKL蛋白的表达明显下调(P＜0.05).结论:瘦素作用于人骨髓间充质干细胞后可促使其向成骨细胞分化,可能通过骨保护素/RANKL途径发挥对骨代谢的调节作用.     

吡格列酮对高脂饮食大鼠胸主动脉PPARγ-核因子-κB途径的影响

目的观察吡格列酮对高脂饮食大鼠胸主动壁脉过氧化物酶增殖体激活受体(PPAR)γ mRNA表达及核因子(NF)-κB活性影响。方法雄性SD大鼠24只,随机分为3组:基础组(C)、高脂组(HL)、吡格列酮组(PI),每组8只。基础组饲基础饲料,其他两组饲高脂饲料。在饲喂饲料的同时,各组灌胃给相应干预剂。在0、3、6周尾静脉采血,测甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平。6周末留取胸主动脉组织。酶法测TG、TC、HDL-C水平,反转录聚合酶链反应(RT-PCR)测PPARγ mRNA表达,电泳迁移率变动分析(EMSA)测NF-κB活性。结果①HL组与C组相比,血清TG、TC含量明显升高(P<0.05),PI组较HL组明显降低(P<0.05),PI组与C组间差异无统计学意义。②HL组胸主动脉壁PPARγ mRNA表达较C组降低(P<0.05),NF-κB活性明显升高。③PI组主动脉壁PPARγ mRNA表达较HL组明显升高(P<0.05),NF-κB活性明显降低。结论吡格列酮具有降低血清TG、TC的作用;吡格列酮能通过上调高脂状态下大鼠胸主动脉壁PPARγ mRNA表达,抑制NF-κB激活。     

医学生物化学教学中分子结构式的运用

生物化学教学中目前存在对分子结构式教学不够重视的问题,为了让分子结构式的教学起到其应有的教学辅助作用,教师首先应重视分子结构式的教学,其次应帮助学生建立学习兴趣.此外,教学过程中还应把握一定的教学原则,如一一对应、联系反应规律、善于比较、联系实践和临床等.