DAPI标记的骨髓间充质干细胞体内外示踪实验研究

<正>骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)是成体干细胞的一种,除参与构成造血微环境外,可分化为成骨、成软骨、脂肪、胰岛、骨骼肌、肌腱样组织等结构。在组织工程和细胞治疗方面具有广阔的应用前景。MSCs移植为糖尿病等代谢性疾病治疗带来希望,是目前研究的热点。4,6-联脒     

瘦素对人骨髓间充质干细胞成骨分化的影响

背景：瘦素及其受体在中枢和外周多个部位均有表达,具有多种生物学功能,对于骨代谢有着重要的影响作用,但目前瘦素影响骨重建的机制尚未完全明了。 目的：探讨瘦素对人骨髓间充质干细胞成骨分化能力的影响。 设计、时间及地点：细胞学体外观察,于2008-03/2008-09在山西医科大学生化与分子生物学实验室完成。 材料：健康志愿者髂骨骨髓由山西医科大学第二医院提供。瘦素为Sigma公司产品。 方法：采用全骨髓法体外分离培养人骨髓间充质干细胞,传至第3代以1×108 L-1密度接种至预置盖玻片的6孔培养板中,设立3组：成骨诱导组添加原代培养液后,再加入含10-8 mol/L地塞米松、10 mmol/L β-磷酸甘油、50 mg/L维生素C的成骨诱导培养基;成骨+瘦素诱导组添加成骨诱导培养基后,再加入50 nmol/L瘦素;空白对照组仅加入含体积分数为10%胎牛血清的LG-DMEM培养液。 主要观察指标：骨髓间充质干细胞表面标志表达、钙化结节染色结果、碱性磷酸酶活性、Ⅰ型胶原及骨钙素含量、骨保护素和RANKL蛋白的表达。 结果：第3代骨髓间充质干细胞CD44和CD71阳性率分别为95.21%,72.31%,CD34阳性率仅为0.39%。成骨诱导21 d后von Kossa染色可见呈棕黑色的细胞外基质钙盐沉积。诱导14 d与空白对照组比较,成骨诱导组、成骨+瘦素诱导组骨髓间充质干细胞内碱性磷酸酶活性及Ⅰ型胶原、骨钙素含量均明显升高(P < 0.05);且成骨+瘦素诱导组各指标升高幅度明显高于成骨诱导组(P < 0.05)。与成骨诱导组比较,成骨+瘦素诱导组骨髓间充质干细胞骨保护素蛋白的表达明显上调(P < 0.05),RANKL蛋白的表达明显下调(P < 0.05)。 结论：瘦素作用于人骨髓间充质干细胞后可促使其向成骨细胞分化,可能通过骨保护素/RANKL途径发挥对骨代谢的调节作用。     

超顺磁性氧化铁标记骨髓间充质干细胞的体外标准化实验

超顺磁性氧化铁颗粒标记成像可在体观察标记细胞移植后情况,但结合临床细胞治疗剂量,其标记浓度及标记时间对细胞标记率、标记活性及标记后成像效果的综合影响还需进一步分析。 目的：筛选超顺磁性氧化铁体外标记大鼠骨髓间充质干细胞的标准化剂量,拟为体内成像提供最佳标记“浓度-时间”。 设计、时间及地点：细胞学体外对照观察,于2008-02/10在山西医科大学完成。 材料：清洁级Wistar大鼠10只,由山西医科大学动物实验中心提供。Resovist中含超顺磁性氧化铁铁颗粒28 g/L,为德国Schering公司产品。 方法：全骨髓法分离培养大鼠骨髓间充质干细胞。取Resovist,分别配制含终浓度为0,25,50,75,100,150 mg/L超顺磁性氧化铁的培养基,加入P3代骨髓间充质干细胞中进行孵育标记。 主要观察指标：普鲁士蓝法检测细胞标记率,锥虫蓝拒染法检测标记细胞活性,观察标记细胞体外磁共振成像情况。 结果：细胞标记率达100%,随着标记时间的延长,胞质内蓝染颗粒逐渐减少。标记1 d和3 d时,与0 mg/L超顺磁性氧化铁组比较,25,50 mg/L组锥虫蓝拒染率无明显差异(F=0.28~3.15,P > 0.05);与25 mg/L超顺磁性氧化铁组比较,50 mg/L组锥虫蓝拒染率无明显差异(F=0.28~0.79,P > 0.05)。体外磁共振成像示标记3 d时,标记浓度为50 mg/L组的T2WI及T2*WI信号降低最明显。 结论：超顺磁性氧化铁“50 mg/L-3 d”体外标记效率高,对细胞活性无影响,且磁共振成像信号降低最明显,为最适“浓度-时间”组合。     

雌激素对Aβ25-35致PC12细胞膜流动性改变的影响

目的观察可溶性Aβ25-35作用下PC12细胞膜流动性的改变及17β-雌二醇(17βE2)对此改变的影响。方法培养的PC12细胞分为空白对照组,Aβ损伤组及雌激素干预组,根据浓度梯度雌激素干预组再分为5个剂量亚组,采用荧光偏振法动态检测不同组PC12细胞不同时间膜流动性的改变。结果Aβ损伤组在加入5μmol/L可溶性Aβ25-35后各时间点,与空白对照组比较,其微黏度η值均明显升高(P<0.01);17βE2干预组在10-10mol/L浓度的条件下各时间点η值与Aβ损伤组比较差异无显著性(P>0.05);而在10-9~10-6mol/L浓度的条件下各时间点η值与Aβ损伤组比较均显著降低(P<0.01),且这种作用具有剂量依赖性,17βE210-91、0-8、10-7、10-6mol/L干预组与Aβ损伤组比较,在24 h时PC12细胞微黏度η值分别降低了36.4%、49.6%、60%及68.4%。结论可溶性Aβ25-35 5μmol/L使PC12细胞微黏度明显升高,膜流动性明显下降;雌激素具有改善膜流动性保护神经元的作用,且这种作用具有剂量依赖性。     

益尔康治疗高脂蛋白血症疗效观察

应用益尔康对８８例高脂蛋白血症患者进行治疗，结果表明，ＴＣ、ＴＧ、ＬＤＬ－Ｃ、ＶＬＤＬ－Ｃ、ａｐｏ－Ｂ１００，Ｌｐ（ａ）治疗后较治疗前分别下降２３％、１８％、３２％、２６％、２１％、１６％（Ｐ〈０．００１、Ｐ〈０．０５、Ｐ〈０．００１、Ｐ〈０．０５、Ｐ〈０．００１、Ｐ〈０．００１），而ＨＤＬ－Ｃ／ＴＣ、ａｐｏ－Ａ则升高３１％、２６％（Ｐ〈０．００１、Ｐ〈０．００１）。且益尔康副作用小，实为治疗高脂     

降脂软化汤对实验性动脉粥样硬化家兔血清LDL-C及HDL-C含量的影响

<正> 早已证实血清总胆固醇含量增高与冠心病的发病有不可否定的关系。所谓血清总胆固醇的含量,主要是指存在于血清低密度脂蛋白(LDL)、极低密度脂蛋白(VLDL)及高密度脂蛋白(HDL)三者组分内胆固醇含量的总合,其中90%存于LDL 及HDL 颗粒内。近年来的研究证实LDL-C 有致动脉粥样硬化的作用;HDL-C 有保护人体抗动脉粥样硬化的作用。故血清中LDL-C 含量增高及HDL-C含量降低都是诱发冠心病的危险因素。本文研究了中药“降脂软化汤”对血清HDL-C 及LDL-C 含量的影响。     

NOD鼠甲状腺炎动物模型T细胞克隆的建立

目的为了阐明实验性免疫性甲状腺炎的诱发机制,本研究以甲状腺球蛋白(thyroglobulin,Tg)为抗原,树突状细胞(dendritic cells,DCs)为抗原提呈细胞(antigen-presenting cells,APCs),建立了T细胞克隆。方法NOD鼠饲养于无菌环境中喂养0.05%碘化钠8周后,每2周采血,用酶联免疫吸附试验(ELISA)测Tg水平,然后每只小鼠用100μg Tg的剂量混于完全弗氏佐剂(complete Freund adjuvant,CFA)中免疫小鼠2次,用增殖实验优化Tg的含量,寻找DCs摄取提呈Tg的最适抗原量,然后将免疫后鼠的脾细胞作为T细胞与同基因鼠的与抗原孵育过的DCs培养。结果建立了3个Tg特异性的T细胞克隆,这些细胞克隆在体外培养时间>2年以上,流式细胞仪检测其表型均为CD4+,而且分泌干扰素(IFN)-γ,不分泌白细胞介素(IL)-4。结论DCs起APCs的作用,在T细胞系及T细胞克隆的建立中起极为重要的作用。否则,T细胞即使在Tg及IL-2存在的培养环境中也仅能存活数天,此实验结论将为研究实验性免疫性甲状腺炎的诱发机制提供理论依据和实验手段。     

［Gly14］-humanin 多肽对β淀粉样蛋白引起的神经干细胞毒性的拮抗作用研究

目的：研究［Gly14］-humanin对β淀粉样蛋白1-42引起的神经干细胞毒性的作用。方法：用［Gly14］-humanin和β淀粉样蛋白1-42处理神经干细胞，观察其对神经干细胞增殖、分化的影响。结果：较低浓度的［Gly14］-humanin加入有β淀粉样蛋白1-42处理的神经干细胞培养基，经过琼脂糖凝胶电泳分析及流式细胞测定DNA含量，神经干细胞显示出对β淀粉样蛋白1-42的耐受，而对照组则显示神经干细胞出现凋亡现象。高浓度的［Gly14］-humanin加入培养基，经台盼蓝拒染法计数细胞，神经干细胞死亡率明显低于对照组，对照组神经干细胞出现大量死亡。结论：［Gly14］-humanin 不但具有抑制β淀粉样蛋白1-42对神经干细胞的毒性作用，而且在低浓度的情况下，可以促进神经干细胞的增殖和分化为神经元。