家族性进行性色素过度沉着症家系丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶11基因的克隆和序列鉴定

目的进行家族性进行性色素过度沉着症(FPH)家系中患者丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶11(STK11)基因的克隆和序列鉴定,以期检测FPH发生是否由于STK11突变所致。方法从FPH患者永生化的B淋巴细胞中提取总RNA,反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)获取cDNA序列,加入特异性引物经PCR扩增STK11 cDNA双链,再经过HindⅢ、EcoRI双酶切PCR产物及质粒载体pcDNA3.0,酶切产物经回收、连接,产物转化到大肠杆菌DH5α,选取阳性克隆菌落进行PCR鉴定、酶切鉴定和测序分析。结果成功构建重组质粒pcDNA3.0-STK11,其测序结果与美国国立生物技术信息中心查询的正常序列结果一致。结论该FPH家系发病并非由于STK11突变所致,在初步定位FPH致病基因的19p13.1-pter区段存在尚未发现的致病基因。     

膜表达的HLA-G1对同种反应性PBMC分泌Th1/Th2型细胞因子的影响

目的研究人脐静脉内皮细胞系(ECV304)表达的HLA-G1对同种异体外周血单个核细胞(PBMC)Th1/Th2型细胞因子分泌的影响。方法采用脂质体介导的基因转染技术将pcDNA3-HLA-G1转入ECV304,以间接免疫荧光技术在蛋白质水平上检测HLA-G1分子在ECV304上的表达;以表达HLA-G1的ECV304作为刺激细胞,灭活后,与健康人PBMC共同培养,用ELISA检测上清液中Th1/Th2型细胞因子的浓度,观察HLA-G1对同种异体抗原激活的PBMC分泌Th1/Th2型细胞因子的影响。结果与转染pcDNA3空质粒的对照组相比,HLA-G1能使PBMC的IL-10分泌增加(P<0.05),而IL-2,IFN-γI、L-4分泌无明显影响。结论HLA-G1能引起由同种异体抗原激活的PBMC分泌IL-10增加,提示HLA-G1有可能使Th1/Th2型细胞因子向Th2型偏移。     

原核表达、体外折叠的HLA-G5促进人外周血单核细胞产生TNF

通过原核表达获得HLA-G5重链和轻链(β2m),经初步纯化后,利用稀释法与人工合成的九肽(KGPPAALTL)一起进行体外复性折叠,形成HLA-G5-抗原肽复合物,经非变性PAGE/Western blot和夹心ELISA法鉴定,证实复性后成功获得天然构象的HLA-G5。利用PBMC受LPS刺激后产生TNF的特点,观察原核表达、体外折叠的HLA-G5对人PBMC分泌TNF的影响。TNF分泌量采用TNF敏感的L929细胞进行生物法测定,结果显示原核表达、体外折叠的HLA-G5促进人PBMC分泌TNF-α。     

硝酸甘油联合卡托普利治疗慢性肺源性心脏病心力衰竭32例

目的观察硝酸甘油联合卡托普利治疗慢性肺源性心脏病心力衰竭的疗效。方法回顾分析64例肺源性心脏病心力衰竭病人的临床资料。结果治疗组总有效率为96．9％，对照组总有效率为65．6％，两组比较有统计学意义（P〈0．05）。结论硝酸甘油联用卡托普利可提高肺源性心脏病心力衰竭病人的疗效。     

硝酸甘油、卡托普利治疗慢性肺心病心力衰竭30例疗效观察

笔者从2000年10月～2004年10月观察了在常规治疗基础上应用硝酸甘油、卡托普利治疗慢性肺心病心力衰竭患者30例疗效，现报告如下。     

一汉族念珠状发家系Ⅱ型毛发角蛋白基因突变的检测

目的 检测一个汉族念珠状发家系Ⅱ型毛发角蛋白（hHb）基因的突变情况。方法 在取得遗传学研究知情同意书后，采集先证者及其家系成员外周血并提取基因组DNA。运用聚合酶链式反应（PCR）扩增hHb1、hHb3、hHb6外显子1和外显子7，DNA直接测序，然后与GenBank中登记序列进行比对分析。对新发现的单核苷酸多态性（SNPs）进行限制性位点酶切分析加以验证。结果 经网上比对分析，该家系患者均未发现已报道的10种hHb致病突变，但发现该家系hHb1的外显子1存在第348位的单个碱基转换（G／A），经限制性位点酶切分析法证实为一个同义cSNPs（第348位G／A，R116R）。结论 该家系念珠状发患者的致病基因不同于现已报道的10种hHb致病突变，在他们hHb1外品子1存在一个同义cSNPs。     

老年人失眠治疗原则

失眠是指经常入睡时间不够,或睡眠不熟。轻者难以入寐,或睡中易醒,时寐时醒;重者整夜不眠。古代文献中也有称为“不寐”,“不得卧”或“不得眠”的。     

铋剂三联疗法治疗消化性溃疡30例体会

1引言 　　消化性溃疡是一常见病,以往认为“无酸,无溃疡“,治疗以抑酸为主.1983年,Warren和Marshall从胃黏膜活检中分离出幽门螺旋杆菌(Hp),并证实其在消化性溃疡发病中起重要作用,提出了“无Hp,无溃疡“,治疗以抗酸同时清除幽门螺杆菌,这样大大降低了溃疡病复发率.笔者采用铋剂、阿莫西林加呋喃唑酮三联疗法治疗消化性溃疡30例,疗效好、复发率低、病人服用依从性好. 　　……     

同种T细胞前体频率与MHC-抗原肽种类呈正相关

目的用种类数目不同的肽段加载T2（表达空载HLA-A2分子）细胞与HLA-A2阴性个体的PBL混合培养，探讨同种反应性CIL前体的频率与同种抗原表位种类多少的关系。方法通过人工合成HLA-A2限制性单一病毒抗原肽、10种细胞正常成分的肽段以及冻融酸处理法制备细胞混合肽。加载T2细胞，经丝裂霉素灭活后作为刺激细胞，与PKH67预染HLA-A2阴性个体PBL进行混合淋巴细胞培养，PKH67荧光强度随细胞增殖而递减，通过流式细胞仪增殖软件（ModFit）分析同种T细胞前体频率。结果单独PBL增殖不明显；空载T2细胞刺激同种反应性CTL前体的频率为0．052819；加载单一表位肽的T2细胞刺激时，前体的频率为0．030429；10种HLA-A2自身限制性的混合抗原肽负载时，前体的频率为0．144942；混合多肽负载时，前体的频率为0．203649。结论本研究结果显示了同种T细胞前体的频率随着同种抗原表位种类的增多而增高，与同种抗原的密度不相关；支持了强烈的同种反应的主要原因是同种细胞表面表达极其繁多的T细胞识别表位（即pMHC）。     

原核表达、稀释复性的可溶性HLA-G1抑制混合淋巴细胞培养中T细胞增殖

目的：探讨原核表达体外稀释复性的可溶性人类白细胞抗原G1（soluble　HLA-G1，sHLA-G1）对体外混合淋巴细胞反应中T细胞增殖的影响。方法利用原核表达的sHIA-G1的重链、轻链及人工合成的九肽，折叠形成正确构象的sHLA-G1．肽复合物；在混合淋巴细胞培养（MLC）体系中加入折叠所得的sHLA-G1-肽复合物及相同浓度的对照物，流式细胞仪检测T细胞的增殖情况。结果sHLA-G1．肽复合物加入到混合淋巴细胞培养中能够抑制T细胞的增殖，3个个体的抑制率分别为28．5％、32．5％及22．1％（Dunnett t检验，P〈0．05）；这种抑制作用可以被HLA-G特异性McAb（G11E5）所逆转。结论通过原核表达，体外稀释复性的方法可以大量制备正确构象的sHLA-G1-肽复合物，该复合物分子能够抑制混合淋巴细胞培养中T细胞的增殖。