经下腔静脉逆灌注对肝移植大鼠早期肾功能的影响

目的 观察经下腔静脉逆灌注对自体原位肝移植大鼠早期肾功能的影响.方法 将70只自体原位肝移植SD大鼠按肝脏的灌注方式不同随机分为经下腔静脉逆灌注组与经门静脉正灌注组,各组35只.各组再随机分成术前对照组、术后6、12、24、48h5个亚组,各亚组7只.经下腔静脉逆灌注组:先开放下腔静脉,再同时开放门静脉与肝动脉；经门静脉正灌注组:先开放门静脉,再依次开放下腔静脉、肝动脉.分别检测两组中各亚组的血清肌酐( Scr)、尿素氮(BUN)、肾损伤分子(KIM)-1及肿瘤坏死因子(TNF)-α水平；取各亚组左肾组织行光镜检查,观察肾组织KIM-1免疫组织化学,计算KIM-1阳性细胞计数.结果 两组术前Scr、BUN、KIM-1及TNF-α比较差异无统计学意义(P＞0.05).与正灌注组比较,术后6、12及24 h逆灌注组的Scr、BUN及TNF-α水平显著降低[术后6h,Scr:(57.4±14.2) mol/L比(48.0±14.0) mol/L,BUN:(14.1±1.5) mmol/L比(8.0±1.1)mmol/L,TNF-α:( 330.1±11.6) ng/L比(294.5±16.2) ng/L;术后12 h,Scr:(125.0±40.4) mol/L比(105.4 ±40.6) mol/L,BUN:(32.2±2.8)mmol/L比(19.6±2.1)mmol/L;TNF-α:(503.6 ±46.6)ng/L比(261.8±9.1)ng/L;术后24h,Scr:(57.8±12.6)mol/L比(45.4±11.8) mol/L,BUN:(16.4±3.0) mmol/L比(13.6±3.2) mmol/L,TNF-α:(408.2±20.9) ng/L比(226.0±21.1) ng/L]；术后48 h差异无统计学意义(P＞0.05)；术后6、12、24、48 h逆灌注组血清KIM-1水平均显著降低[术后6h,(107.8±2.1)ng/L比(87.3±1.3)ng/L;术后12 h,(107.8±2.1)ng/L比(87.3±1.3) ng/L;术后24 h,(101.7±1.8)比(81.9±1.6) ng/L;术后48 h:(99.7 ±2.6) ng/L比(77.5±0.6)ng/L;P ＜0.05],肾组织中KIM-1阳性细胞计数及免疫组织化学评分显著降低(术后6h,40±3比26 ±2;术后12h,45 ±3比31 ±3;术后24 h,56 ±4比35±4；术后48 h:60±3比32±2;P＜0.05).结论 经下腔静脉逆灌注可减轻SD大鼠自体原位肝移植术后早期肾功能的损害.     

热休克蛋白A12B对内毒素血症所致心功能不全的保护作用

目的探讨高表达热休克蛋白A12B（HSPA12B）对内毒素血症所致心功能不全的影响。方法 （1）采用western blot法鉴定HSPA12B在HSPA12B转基因（HSPA12B Tg）鼠心脏中的表达;（2）HSPA12B Tg和野生型（WT）对照鼠均腹腔注射内毒素（LPS）10mg/kg,6h后以超声心动图测定心功能;（3）LPS注射后6h,收集心脏,石蜡切片,HE染色,分析组织水肿和白细胞浸润程度。结果 （1）HSPA12B Tg鼠心肌组织中HSPA12B表达较WT鼠升高12倍（P〈0.01）;（2）LPS使WT和HSPA12B Tg鼠心功能均显著下降,但与WT鼠比较,HSPA12BTg鼠的心功能显著改善（P〈0.01）,射血分数（EF）增加了56.0%,缩短分数（FS）增加了72.5%;（3）LPS使WT和HSPA12B Tg鼠心肌间质中白细胞浸润,但与WT鼠比较,HSPA12B Tg鼠的心肌间质中白细胞浸润数量显著减少45.1%（P〈0.05）。结论 HSPA12B高表达显著抑制内毒素血症所致的心功能不全、减轻白细胞在心肌间质的浸润程度。     

落新妇甙对肝缺血再灌注损伤的保护作用

背景：肝脏是对缺血再灌注损伤最敏感的器官之一。黄酮类化合物落新妇甙可作为递氢体清除氧自由基,从而可能在减轻肝脏缺血再灌注损伤等方面发挥作用。 目的：观察落新妇甙对肝脏热缺血再灌注损伤的保护作用,对其机制进行初步探讨。 方法：C57BL/6小鼠随机分为4组：假手术组、模型组、小剂量干预组和大剂量干预组。干预组小鼠于缺血前24 h和1 h分别给予10或40 mg/kg的落新妇甙腹腔注射,然后建立70%部分肝缺血再灌注模型。采集血液和肝脏组织样本。检测血清丙氨酸氨基转移酶活性,ELISA测血清肿瘤坏死因子α水平,化学比色法测定肝组织中超氧化物歧化酶、丙二醛含量。肝脏组织病理学检测。Westernblot检测肝组织中肿瘤坏死因子α蛋白含量,RT-PCR检测肿瘤坏死因子α mRNA。 结果与结论：落新妇甙干预能有效降低血清丙氨酸氨基转移酶水平,干预组肝组织丙二醛含量较模型对照组明显下降(P < 0.01);而超氧化物歧化酶含量明显上升(P < 0.01);干预组血清肿瘤坏死因子α含量较模型组对照组明显下降(P < 0.01);小、大剂量干预组肝组织中肿瘤坏死因子α蛋白表达与模型组模型对照组比较渐次降低,与半定量RT-PCR结果相符(小剂量干预组P < 0.05,大剂量干预组P < 0.01)。落新妇甙保护肝脏热缺血再灌注损伤显示出剂量-效应关系趋势。结果提示,落新妇甙干预能减轻小鼠肝脏热缺血再灌注损伤后的炎症反应和脂质过氧化损伤,有效改善肝功能和肝脏病理损害;机制可能在于其能抑制缺血再灌注损伤肝组织中肿瘤坏死因子α的高表达。     

一种新的大鼠门静脉动脉化模型*

背景：目前文献报道的大鼠门静脉动脉化模型有缝合法或支架法,2种方法在血管通畅率及操作便利性上均不太理想。 目的：建立稳定的操作简便的大鼠门静脉动脉化动物模型。 方法：采用同种异体血管套入式缝合及袖套法建立大鼠门静脉动脉化模型40例。切除左肾,将左肾动脉与门静脉残端通过同种异体血管连接,左肾静脉借助袖套与肠系膜上静脉连接。另取10只大鼠作为假手术组。术后观察大鼠的体质量变化和存活情况,2周行磁共振血管成像,1个月检测大鼠肝功能,2个月处死大鼠探查门静脉血流通畅情况并观察肝脏的病理学改变。 结果与结论：造模过程中有1只大鼠死亡,其余39只均存活至术后2个月,造模成功率为98%(39/40)。术后1个月,模型组与假手术组大鼠体质量,血清白蛋白、谷丙转氨酶、碱性磷酸酶和胆碱酯酶差异均无显著性意义(P > 0.05)。术后2个月,模型组门静脉通畅率为95%(37/39)。磁共振血管成像及病理结果均未见明显异常。提示,利用同种异体血管套入式缝合及袖套法建立的大鼠门静脉动脉化模型操作简便、省时、成功率高,是一种可行、稳定、可靠、可重复性强的方法。     

瘦素受体突变对老年大鼠心肌的影响

目的 探讨瘦素受体突变与心肌老化之间的关系.方法 选择20月龄的瘦素受体基因突变老年大鼠(实验组)为对象,同月龄野生型CB57BL/6小鼠为对照组,观察瘦素受体基因突变对老年大鼠心肌老化(左心室射血分数、短轴缩短率、心肌超微结构和细胞凋亡及活性氧自由基水平)的影响. 结果 与对照组比较,实验组左心室射血分数下降42.8%(P＜0.01),短轴缩短率下降了48.8%(P＜0.01);实验组心肌超微结构发生明显退变,而对照组鼠的心肌超微结构正常;与对照组比较,心肌细胞凋亡数量显著增加[分别为(2.53±0.37)个/200倍视野与(5.90±2.06)个/200倍视野,P＜0.05];心肌胞内总活性氧自由基水平显著升高[分别为(2630.0±249.5)mfu与(3273.0±334.4)mfu,P＜0.05].结论 瘦素受体突变,加快、加重了心肌老化,其机制可能与线粒体细胞凋亡、氧化应激有关.     

热休克蛋白27改善实验性小鼠心力衰竭的机制研究

目的 探讨热休克蛋白27(Hsp27)改善实验性小鼠心力衰竭的机制.方法 (1)心肌损伤诱导:Hsp27转基因鼠(TG)和作为对照组的野生型鼠(WT),分别腹腔注射阿霉素(25 mg/kg)或生理盐水.(2)组织学检杳:给药后第3天,取心脏石蜡切片并HE染色.在石蜡切片上进行细胞凋亡(TUNEL染色)、心肌细胞、细胞核的三重荧光染色,激光共聚焦显微镜观察.小鼠死亡后,观察胸腔、腹腔有无积液,取心和肺进行石蜡切片和HE染色.(3)线粒体超微结构:给药后第3天,取左心室肌制超薄切片,在电镜下观察.(4)蛋白质氧化修饰测定:给药后第3天取心脏,进行抗DNP免疫印迹分析.结果 尸检结果:死亡小鼠均出现明显的胸腔积液和腹腔积液,肺泡中出现红细胞渗出和肺泡塌陷,WT和TG鼠心肌细胞空泡变性,WT鼠心肌出现纤维化,而TG鼠心肌没有相应变化.阿霉素给药后第3天:WT和TG鼠心肌细胞凋亡都显著增加,但与WT鼠心肌相比,TG鼠的心肌细胞凋亡则被显著抑制;WT和TG鼠心肌的羰基化显著增加,但与阿霉素-WT鼠心肌相比较,阿霉素-TG鼠心肌的羰基化反应被显著抑制;WT和TG鼠心肌细胞中出现了几种线粒体的结构改变如电子密度增加,嵴肿胀、模糊和消失,但这些改变在WT鼠心肌中要比TG鼠中严重.结论 线粒体相关的氧化应激和细胞凋亡可能参与了Hsp27对阿霉素诱导心力衰竭的保护作用.     

人心肌热休克蛋白27基因克隆及其高表达对大鼠心肌细胞氧化损伤的保护作用

目的克隆和重组人心肌热休克蛋白27(HSP27)基因,观察HSP27高表达对大鼠心肌细胞氧化应激的影响。方法将RTPCR获得的人心肌HSP27基因全长cDNA,重组入质粒载体pCDNA31 。将重组体pCDNA31 /HSP27转染大鼠心肌细胞系H9c2,经G418选择性培养获得稳定转染细胞系;观察HSP27高表达对H2O2诱导的乳酸脱氢酶(LDH)释放和细胞凋亡的影响。结果(1)pCDNA31 /HSP27在293T和H9c2中表达良好;(2)0、100、250、500、1000μmol/LH2O2引起的LDH释放,在HSP27高表达组和野生型组分别为0396±0017和0390±0009、0437±0014和0416±0015、0471±0018和0417±0009、0505±0030和0657±0022、0547±0027和0661±0011(均为P<0001);(3)150μmol/LH2O2诱导的细胞凋亡在HSP27高表达和野生型组分别为总细胞数的(10693±1122)%和(4027±1628)%,P<001。结论人心肌HSP27基因被成功克隆和重组,其在大鼠心肌细胞系H9c2的高度表达显著保护了该细胞的过氧化损伤。     

床旁经皮经肝胆囊穿刺引流术在高龄急性化脓性胆囊炎患者中的应用价值

目的评价床旁B超引导下经皮经肝胆囊穿刺引流术(PTGD)对高龄急性化脓性胆囊炎患者的应用价值。方法回顾性分析2010年8月～2011年3月接受治疗的25例高龄急性化脓性胆囊炎患者的临床资料。结果 25例均置管成功。1例87岁女性患者PTGD术后7天死于多器官功能衰竭。其余24例在行PTGD术后2周～2月间择期行腹腔镜胆囊切除术,其中中转开腹3例,胆囊切除术后均未死亡。结论 PTGD治疗高龄化脓性胆囊炎是一项安全、有效、简便的方法。     

肝移植术后早期肺部细菌感染的危险因素分析

目的 分析原位肝移植术后早期肺部细菌感染的发生情况及其危险因素。方法 回顾性分析笔者所在医院2010年1月至2012年6月期间行下腔静脉逆灌注法原位肝移植术的96例终末期肝病患者的临床资料。采用多因素非条件logistic回归分析探索肝移植术后早期肺部细菌感染的危险因素。结果 96例患者中有29例于肝移植术后早期发生肺部细菌感染,感染率为30.21%,其中感染G-需氧菌19例（65.52%）,感染G＋需氧菌10例（34.48%）。患者的术前终末期肝病模型评分（OR=2.165,P=0.001）、术中输血量（OR=1.952,P=0.003）、术后3 d血肌酐平均值（OR=1.913,P=0.001）、术后3 d液体负平衡时间（OR=0.196,P=0.023）及术后住院时间（OR=1.923,P=0.003）均与术后早期肺部细菌感染有关。结论 原位肝移植术后早期易发生肺部细菌感染。术前改善患者基础状况、术中控制输血量、术后控制输液量和住院时间及术后改善肾功能均可减少术后早期肺部细菌感染的发生。     

肝移植术中供肝门静脉与受者结肠中动脉吻合并脾切除一例

患者,男性,55岁.因患乙型肝炎30余年,肝硬化伴上消化道反复出血2年余,于2008年10月行原位肝移植.术前肝功能示:白蛋白32 U/L,总胆红素32 μmol/L,丙氨酸转氨酶36 U/L,天冬氨酸转氨酶20 U/L,胆碱脂酶3670U/L,凝血酶原时间15 s;血常规示:白细胞2.01×109/L,血红蛋白浓度80 g/L,血小板35×109/L;钡餐示:食管胃底静脉重度曲张;CT示:肝硬化、门静脉血栓形成累及肠系肠上静脉.