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表达幽门螺杆菌粘附素BabA重组蛋白菌株的构建及其粘附活性评价 总被引:1,自引:1,他引:0
目的构建表达幽门螺杆菌(Hp)粘附素BabA重组蛋白的候选菌株并测定其粘附活性。方法用PCR方法从Hp染色体DNA上扩增粘附素babA2基因,将其定向插入表达载体pET-22b( )中,并在BL21(DE3)大肠杆菌中表达,利用光镜计数法测定其粘附活性。结果DNA序列分析表明,所克隆的粘附素babA2基因序列与GeneBank公布的一致。在37 ℃诱导表达3 h后,粘附素BabA重组蛋白表达量占菌体总蛋白的34.8%,体外实验证实BabA参与了粘附过程。结论本研究获得了表达有生物活性的Hp粘附素BabA的克隆,为深入研究其相关功能奠定了良好基础。 相似文献
73.
目的 :探讨幽门螺杆菌热休克蛋白A与尿素酶B融合蛋白的免疫生物学活性。方法 :采用亲和层析、离子交换和凝胶过滤对幽门螺杆菌热休克蛋白A与尿素酶B融合蛋白进行初步纯化 ,用粗纯化蛋白对小鼠进行免疫 ,然后分析其免疫活性。结果 :采用亲和层析或离子交换和凝胶过滤后 ,融合蛋白的纯度分别可达到 6 5 .6 %和90 .2 %。该融合蛋白可诱导小鼠产生抗幽门螺杆菌的胃肠黏液IgA和血清IgG抗体 ,并促使免疫小鼠脾脏T淋巴细胞CD4 CD8 比值的增加。结论 :重组热休克蛋白A与尿素酶B融合蛋白可以诱导在未来免疫预防中起积极作用的免疫应答反应 相似文献
74.
目的 研究肠毒素大肠埃希菌活菌载体疫苗FE3、FE16的安全性和免疫原性。方法 通过肠毒素大肠埃希菌肠毒素毒力试验、新西兰大白兔免疫试验、小鼠口服和鼻饲途径免疫试验,检测载体疫苗的毒性、免疫原性和免疫效果。结果 毒力试验中所有检测均为阴性;免疫4次后大白兔血清对福氏2a型茵的凝集效价均不低于1:640,对肠毒素大肠埃希菌菌毛抗原的凝集效价均不低于1:1280;通过口服和鼻饲方式免疫小鼠后,血清中IgG显著升高,同时能够在粪便中检测到分泌型IgA,而灭活苗免疫未能检测到分泌型IgA。结论 活菌载体疫苗株FE3和FE16具有良好的安全性和免疫原性,同时能够刺激机体产生体液免疫和黏膜免疫反应。 相似文献
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编码大肠杆菌不耐热肠毒素和耐热肠毒素基因的融合 总被引:2,自引:0,他引:2
致腹泻性大肠杆菌产生两种肠毒素。一种是不耐热肠毒素(LT),LT是一种高分子量的具有免疫原性的蛋白质;另一种为耐热肠毒素(ST),分子量低,不具免疫原性。ST在致病中起非常重要的作用,几乎所有重症腹泻患者的样本中,只要分离到产肠毒素大肠杆菌(ETEC),大都产生ST。如何增强ST的免疫原性,是当今大肠菌肠毒素研究的热门课题之一。本研究采用不耐热肠毒素B亚单位(LT-B)基因作为载体分子,将编码ST抗原决定簇的寡核苷酸连接在消除了终止密码子的LT-B基因下游,并使之处于同一开放阅读框架中,构建成三种不同的LT-B/ST融合基因。核苷酸序列分析证实了融合基因有正确的阅读框架。ELISA检测表明,这些 相似文献
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幽门螺杆菌热休克蛋白60基因的克隆、表达及免疫原性研究 总被引:2,自引:0,他引:2
目的构建表达幽门螺杆菌热休克蛋白60(Hsp60)的候选菌株并研究其免疫原性。方法利用PCR技术扩增Hsp60基因,将其定向插入pET-22b(+)载体,在BL21(DE3)大肠杆菌中表达并通过动物实验研究其免疫原性。结果克隆的Hsp60基因序列与Genbank公布的一致,Hsp60重组蛋白表达量占菌体总蛋白的27.2%,并可被幽门螺杆菌感染者血清所识别,用其免疫小鼠可产生抗该重组蛋白的抗体。结论Hsp60有可能成为一种有效的疫苗用于幽门螺杆菌感染的预防和治疗。 相似文献
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78.
用基因重组技术获得的高效表达肠毒素大肠杆菌定居日子抗原Ⅰ(CFA/Ⅰ)的重组克隆,通过匀浆破碎、硫酸铵分级盐析部分纯化,再经超速离心及DEAE-SephadexA50柱层析,得到了CPA/Ⅰ的纯化样品,得率约为0.9mg/g湿菌。聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)显示一条蛋白质带,其分子量为15kDa,与天然CFA/Ⅰ相同。免疫扩散和蛋白质印迹试验证明,纯化的重组克隆CFA/Ⅰ与天然CFA/Ⅰ具有相同的抗原性及免疫原性。并在电镜下观察了CFA/Ⅰ的菌毛形态。 相似文献
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目的 以减毒志贺菌为载体 ,研制肠毒素大肠杆菌 (enterotoxigenicEscherichiacoli,ETEC)多价疫苗可以有效防治细菌性腹泻。方法 以共表达肠毒素大肠杆菌定居因子CFA/Ⅰ和CS6的重组减毒福氏痢疾疫苗株FWL0 1(pZCF16 )和两种混合的表达CFA/Ⅰ的FWL0 1(pZHY2 1)和表达CS6的FWL0 1(pZLG6 )减毒福氏痢疾疫苗株 ,分别以同等剂量口服免疫BALB/c小鼠 ,比较二者肠毒素大肠杆菌定居因子的免疫效果。结果 免疫BALB/c小鼠全部产生了抗CFA/Ⅰ和CS6的特异性血清抗体IgG和分泌型抗体sIgA ,共表达CFA/Ⅰ、CS6的减毒福氏痢疾菌FWL0 1(pZCF16 )的免疫原性与混合的FWL0 1(pZHY2 1)和FWL0 1(pZLG6 )相似或稍高。结论 在同一菌株可以表达多种菌毛 ,构建ETEC多价疫苗有效可行 相似文献
80.
人源肠毒素大肠杆菌CS3纤毛基因的克隆及表达 总被引:4,自引:2,他引:4
Southern印迹结果证明在CFA/Ⅱ阳性菌E44815的诸多质粒中,编码CS3纤毛抗原的质粒为一约为60MD的大质粒;当这些质粒用HindⅢ消化时,该抗原的编码基因位于5.0kb的DNA片段上。回收该片段并插入到载体质粒pBR322的HindⅢ位点,构建了E.coliE44815株质粒的有限基因库。通过筛选,获得了两种插入方向的阳性重组子。全细胞ELISA测定结果表明,只有当插入片段的转录方向和载体质粒中的p1启动子的转录方向一致时,重组质粒才能有效地表达CS3纤毛抗原;宿主不同时表达水平存在一定差异。SDS-PAGE及Western印迹试验表明:CS3纤毛抗原有两种不同的单体形式,分子量大约分别为15.0kD和15.5kD。CS3纤毛抗原编码基因的克隆为研究CS3基因表达调控和研制预防ETEC腹泻疫苗打下了基础。 相似文献