幽门螺杆菌尿素酶B基因的克隆与高效表达

目的克隆并表达幽门螺杆菌尿素酶B基因.方法提取幽门螺杆菌染色体DNA,用PCR方法扩增尿素酶B基因.将其克隆至表达载体pQE30,转化大肠杆菌M15,IPTG诱导表达.结果分离得到了1.7kb的ureB基因片段,并在大肠杆菌中实现了该基医的高效表达.在37℃诱导表达4h后,表达产物约占细菌总蛋白的34.0%.表达以可溶性蛋白和包涵体两种形式存在,其中主要包涵体的形式,目的蛋白占不溶性蛋白的55.8%.结论幽门螺杆菌ureB基因的克隆与表达为Hp疫苗的研制打下了基础.     

肠毒素大肠埃希菌载体活菌疫苗的安全性和免疫性研究

目的 研究肠毒素大肠埃希菌活菌载体疫苗FE3、FE16的安全性和免疫原性。方法 通过肠毒素大肠埃希菌肠毒素毒力试验、新西兰大白兔免疫试验、小鼠口服和鼻饲途径免疫试验，检测载体疫苗的毒性、免疫原性和免疫效果。结果 毒力试验中所有检测均为阴性；免疫4次后大白兔血清对福氏2a型茵的凝集效价均不低于1：640，对肠毒素大肠埃希菌菌毛抗原的凝集效价均不低于1：1280；通过口服和鼻饲方式免疫小鼠后，血清中IgG显著升高，同时能够在粪便中检测到分泌型IgA，而灭活苗免疫未能检测到分泌型IgA。结论 活菌载体疫苗株FE3和FE16具有良好的安全性和免疫原性，同时能够刺激机体产生体液免疫和黏膜免疫反应。     

酵母双杂交系统：探寻与内皮素受体相互作用的蛋白质

酵母双杂交系统：探寻与内皮素受体相互作用的蛋白质文立民张兆山黄翠芬军事医学科学院生物工程研究所北京１０００７１内皮素是近年来新发现的一种血管活性多肽。它是迄今所知体内最强烈、最持久的血管收缩因子，不仅可促进血管收缩，而且可刺激心血管系统的细胞增生及肥...     

表达幽门螺杆菌粘附素BabA重组蛋白菌株的构建及其粘附活性评价

目的构建表达幽门螺杆菌(Hp)粘附素BabA重组蛋白的候选菌株并测定其粘附活性。方法用PCR方法从Hp染色体DNA上扩增粘附素babA2基因,将其定向插入表达载体pET-22b( )中,并在BL21(DE3)大肠杆菌中表达,利用光镜计数法测定其粘附活性。结果DNA序列分析表明,所克隆的粘附素babA2基因序列与GeneBank公布的一致。在37 ℃诱导表达3 h后,粘附素BabA重组蛋白表达量占菌体总蛋白的34.8%,体外实验证实BabA参与了粘附过程。结论本研究获得了表达有生物活性的Hp粘附素BabA的克隆,为深入研究其相关功能奠定了良好基础。     

幽门螺杆菌热休克蛋白A与尿素酶B融合表达产物的初步纯化及其在小鼠体内免疫效应活性分析

目的 :探讨幽门螺杆菌热休克蛋白A与尿素酶B融合蛋白的免疫生物学活性。方法 :采用亲和层析、离子交换和凝胶过滤对幽门螺杆菌热休克蛋白A与尿素酶B融合蛋白进行初步纯化 ,用粗纯化蛋白对小鼠进行免疫 ,然后分析其免疫活性。结果 :采用亲和层析或离子交换和凝胶过滤后 ,融合蛋白的纯度分别可达到 6 5 .6 %和90 .2 %。该融合蛋白可诱导小鼠产生抗幽门螺杆菌的胃肠黏液IgA和血清IgG抗体 ,并促使免疫小鼠脾脏T淋巴细胞CD4 CD8 比值的增加。结论 :重组热休克蛋白A与尿素酶B融合蛋白可以诱导在未来免疫预防中起积极作用的免疫应答反应     

幽门螺杆菌黏附素基因babA2的克隆表达及定位

目的: 克隆并表达H.pylori黏附素babA2基因. 方法: 提取H.pylori染色体基因,用PCR方法扩增babA2基因,将其克隆至表达载体pET-22b( ),并在BL21(DE3)大肠杆菌中表达及定位分析. 结果: 分离得到了2.2 kb的babA2基因片段,在37℃诱导表达3 h后,重组蛋白表达量占菌体总蛋白的34.8%,其中分泌表达占周质总蛋白的22.7%,可溶性表达占上清的15.0%,包涵体占沉淀的86.7%. 结论: H.pylori babA2基因的克隆与表达为H.pylori黏附机制研究及疫苗的研制打下了基础.     

编码大肠杆菌不耐热肠毒素和耐热肠毒素基因的融合

致腹泻性大肠杆菌产生两种肠毒素。一种是不耐热肠毒素(LT),LT是一种高分子量的具有免疫原性的蛋白质;另一种为耐热肠毒素(ST),分子量低,不具免疫原性。ST在致病中起非常重要的作用,几乎所有重症腹泻患者的样本中,只要分离到产肠毒素大肠杆菌(ETEC),大都产生ST。如何增强ST的免疫原性,是当今大肠菌肠毒素研究的热门课题之一。本研究采用不耐热肠毒素B亚单位(LT-B)基因作为载体分子,将编码ST抗原决定簇的寡核苷酸连接在消除了终止密码子的LT-B基因下游,并使之处于同一开放阅读框架中,构建成三种不同的LT-B/ST融合基因。核苷酸序列分析证实了融合基因有正确的阅读框架。ELISA检测表明,这些     

幽门螺杆菌热休克蛋白60基因的克隆、表达及免疫原性研究

目的构建表达幽门螺杆菌热休克蛋白60(Hsp60)的候选菌株并研究其免疫原性。方法利用PCR技术扩增Hsp60基因,将其定向插入pET-22b(+)载体,在BL21(DE3)大肠杆菌中表达并通过动物实验研究其免疫原性。结果克隆的Hsp60基因序列与Genbank公布的一致,Hsp60重组蛋白表达量占菌体总蛋白的27.2%,并可被幽门螺杆菌感染者血清所识别,用其免疫小鼠可产生抗该重组蛋白的抗体。结论Hsp60有可能成为一种有效的疫苗用于幽门螺杆菌感染的预防和治疗。     

抑瘤素M研究新进展

抑瘤素Ｍ是继白细胞介素，白血病抑制因子、肿瘤坏死因子等抗瘤细胞因子之后发现的又一重要生物反应调节剂，体外实验证明：ＯＳＭ可以通过多种不同途径产生抑瘤或化瘤活性。同时根据ＯＳＭ与其它细胞调节因子如ＬＩＦ、Ｇ－ＣＳＦ、ＣＮＴＦ及ＴＬ－６间相互区别而又相互联系的生物学特点，可以认为：ＯＳＭ在枘本免疫应答网络、细胞抗感染免疫及多种细胞因子间的功能协调等方面发挥着广泛而又重要的作用。