共表达ETEC CFA／I、CS6福氏痢疾减毒株与单独表达CFA／I及CS6混合疫苗株的免疫原性比较

目的以减毒志贺菌为载体，研制肠毒素大肠杆菌(enterotoxigenic Escherichia coli，ETEC)多价疫苗可以有效防治细菌性腹泻。方法以共表达肠毒素大肠杆菌定居因子CFA/I和CS6的重组减毒福氏痢疾疫苗株FWL01(pZCF16)和两种混合的表达CFA/I的FWL01(pZHY21)和表达CS5的FWL01(pZLG6)减毒福氏痢疾疫苗株，分别以同等剂量口服免疫BMLB／c小鼠，比较二者肠毒素大肠杆菌定居因子的免疫效果。结果免疫BMLB／c小鼠全部产生了抗CFA/I和CS6的特异性血清抗体IgG和分泌型抗体sIgA，共表达CFA/I、CS6的减毒福氏痢疾菌FWL01(pZCF16)的免疫原性与混合的FWL01(pZHY21)和FWL01(pZLG6)相似或稍高。结论在同一菌株可以表达多种菌毛，构建。ETEC多价疫苗有效可行。     

Effect of selenium on human myocardial glutathione peroxidase gene expression

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肠毒素大肠杆菌耐热肠毒素与谷胱甘肽巯基转移酶融合蛋白的制备和耐热肠毒素抗体测定

目的：弥补ST的弱抗原性，实现ST抗体测定。方法：采用生物工程技术，融合表达GST和带有前导序列的突变耐热肠毒素proSTm，制备ST融合蛋白，测定ST抗体。结果：测到了抗ST的血清IgG和黏膜IgA。结论：融合蛋白GST／proSTm能有效提高ST的抗原活性，可直接用于ST抗体测定。     

幽门螺杆菌ureB及ureB-hspA融合基因在减毒鼠伤寒沙门菌中的表达及小鼠的免疫应答

目的　构建H .pyloriureB单基因及ureB和hspA融合基因的减毒鼠伤寒沙门菌疫苗候选株 ,并进行初步的免疫原性分析。方法　将H .pyloriureB单基因及ureB和hspA融合基因分别克隆入pTrc99A asd质粒的多克隆位点之内。挑取单菌落质粒鉴定后 ,分别将其电击经中间宿主X3730转入最终宿主X4 0 72 ,SDS PAGE和Westernblot检测蛋白表达。将疫苗候选株经口或鼻免疫BALB c小鼠。结果　疫苗候选株能够分别表达出相对分子质量 (Mr)为 6 4× 10 3的UreB蛋白及 77× 10 3的UreB HspA融合蛋白。在免疫BALB c小鼠的肠液和血清中可以分别检测到针对H .pylori的特异性分泌型IgA和IgG抗体。结论　构建了能够表达幽门螺杆菌UreB及UreB HspA融合蛋白的活菌疫苗候选株 ,为探索制备H .pylori口服活菌疫苗奠定了基础。     

TGFβ1正、反义基因转染60Co照射HELF对TGFβ1及I型前胶原mRNA表达调控影响

目的 观察TGFβ1正、反义基因转染^60Coγ射线照射的HELF后对其TGFβ1、mRNA及Ⅰ型前胶原mRNA表达调控的影响。方法 采用脂质体介导法进行基因稳定转染,转染细胞经PCR,DNA dot blot鉴定和RNA dot blot分析。结果 选择5Gy照射细胞,采用Lipofect AMINEuqf TGFβ1正、反义基因表达载体pMAM-TTGFβ1pMAMneo-AntiTGFβ1转入HELF,转染细胞经G418抗性筛选出来,在糖皮质激素地塞米松诱导下培养。提取培养细胞的RNA和染色体DNA,转染细胞DNA与地高辛标记的neo特异探针杂交阳性,且可用neo基因转导的PCR引物扩增出276bp的阳性片段。对提取的RNA地高辛标记的TGFβ1探针和α1（Ⅰ）寡核苷酸探针经RNA dot blot分析表明,转染pMAMneo-AntiTGFβ1的细胞其TGFβ1 mRNA水平下降,而转染pMAMneo-TGFβ1的细胞其TGFβ1 mRNA水平则升高。对于Ⅰ型前胶原mRNA,前者表达水平比未转染细胞低,后者则略高。结论 TGFβ1反义基因转染^60Co γ射线照射的人胚肺成纤维细胞后可以使细胞中TGFβ1 mRNA含量水平减少,使Ⅰ型前胶原mRNA表达水平降低。     

北京生物工程研究所(张兆山);北京基础医学研究所(龙建银、王会信)TGF β1反义基因及表达荧光素酶的重组腺病毒对放射性肺纤维化体内基因治疗初探

目的探索TGFβ1反义基因和脂质体混合物以及重组腺病毒转移载体进行放射性肺纤维化体内基因治疗的可行性.方法通过支气管插管与滴注的方式进行.结果检测分析表明,转基因后1.5 d,肺组织DNA用neo基因特异引物PCR扩增阳性;第5.5天,PCR扩增67%(2/3)阳性.RNA dot blot分析表明,转染TGFβ1反义基因的肺组织TGFβ1 mRNA含量降低.转染35 d后取动物肺组织测定其羟脯氨酸含量表明,尽管转染TGFβ1反义基因的动物其肺组织羟脯氨酸含量比正常对照组高(P＜0.01),但它比生理盐水治疗对照组动物和转染TGFβ1正义基因的动物其肺内羟脯氨酸含量低(均为P＜0.01).用含有荧光素酶基因的复制缺陷型腺病毒感染大鼠,其肺脏均检测到了有荧光素酶活性蛋白的表达.结论由聚阳离子脂质体介导的TGFβ1反义基因进行的肺纤维化体内基因治疗是一个简单易行的方法,它可以减缓肺纤维化的发生;用复制缺陷的重组腺病毒进行肺脏的基因治疗是一种较为理想的方法,有望成为治疗肺纤维化的有效的新途径.     

幽门螺杆菌尿毒酶B基因的克隆与高效表达

目的 克隆并表达幽门螺杆菌尿素酶B基因。方法 提取幽门螺杆菌染色体DNA，用PCR方法扩增尿素酶B基因。将其克隆至表达载体pQE30,转化大肠杆菌M15，IPTG诱导表达。结果 分离得到了1．7kb的 ureB基因片段，并在大肠杆菌中实现了该基因的高效表达。在37℃诱导表达4h后，表达产物约占细菌总蛋白的34．0％，表达以可溶性蛋白和包涵体两种形式存在，其中主要是包涵体的形式，目的蛋白占不溶性蛋白的55．8％。结论 幽门螺杆菌ureB基因的克隆与表达为Hp疫苗的研制打下了基础。     

幽门螺杆菌过氧化氢酶基因的克隆、高效表达及活性评价

目的：构建高效表达幽门螺杆菌（Hp）过氧化氢酶重组蛋白的候选菌株并测定其活性。方法：用PCR方法从Hp染色体DNA上扩增过氧化氢酶基因，将其定向插入表达pET-22b(＋），并在BL21（DE3）大肠杆菌中表达，进一步利用贝尔斯－西策尔斯法测定其活性。结果：DNA序列分析表明，所克隆的过氧化氢酶基因序列与基因库公布的一致。在37℃诱导表达3h后，过氧化氢酶重组蛋白表达量占苗体总蛋白的24．4％，并显示了良好的活性。结论：本研究获得了表达高活性Hp过氧化氢酶的克隆，为深入研究其相关功能奠定了良好基因。     

肠毒素大肠杆菌攻毒小鼠模型的建立以及疫苗候选株保护效果的评价

目的:建立肠毒素大肠杆菌攻毒小鼠模型以及应用模型对疫苗候选株免疫效果进行评价．方法:通过鼻饲半数致死量(LD50)肠毒素大肠杆菌E44813,E44815和E11881A观察小鼠肺病理学变化、肺部细菌清除情况变化,建立肠毒素大肠杆菌鼻饲小鼠模型;应用鼻饲小鼠模型观察疫苗候选株FE1,FE3,FE6保护效果．结果:鼻饲LD50剂量肠毒素大肠杆菌小鼠的病理特征是肺组织存在大量的淋巴细胞、巨噬细胞、中性粒细胞和浆细胞,为多病灶支气管肺炎,肺部细菌清除缓慢,至第7天仍能检测到105数量级的细菌．应用疫苗候选株免疫后进行攻毒,小鼠没有发病和死亡,病理特征主要是淋巴细胞少量增多,肺部细菌清除迅速,至第7天已检测不到细菌,与对照有显著性差异(0 CFU／g vs 6．2×105,5．4×105,2．3×105 CFU／g,P<0．05)．结论:肠毒素大肠杆菌鼻饲小鼠模型能够为疫苗筛选和评价提供了有效途径,同时也证实了疫苗候选株FE1,FE3,FE6具有良好的免疫保护效果．