一种高效制备α-L-岩藻糖苷酶的方法和应用

α-L-岩藻糖苷酶(α-L-fucosidase,AFU)[EC 3.2.1.51]是一种外切糖苷酶,从细菌到哺乳动物体内都广泛存在[1],参与多种基础生化反应.免疫化学交叉反应和纯系化研究显示,不同物种间 AFU 的氨基酸序列与结构十分相似,具有较高的保守性[2].人体中存在高分子量(约 100 kD)和低分子量(约...     

山东省十二种熟啤酒氨基酸含量

<正> 啤酒中含有各种营养成份,氨基酸是其中之一,国外已有啤酒中氨基酸含量的报告,国内尚未见有其含量报告,食物成份表中也无此项数据。为了获得国内啤酒中氨基酸含量的数据,并为新食物成份表提供参考资料,我们用日立835-50型氨基酸分析仪,对山东省十二个牌号的熟啤酒进行了氨基酸分析。 一、采样:     

对4个HbA1c测定系统的精密度和正确度验证

目的验证4个HbA1C测定系统的正确度、精密度,以判断是否符合相关要求,为临床实验室的使用提供相关依据。方法采用一种简便的实验方案,在5d内,对3个基于离子交换高效液相色谱法和1个基于免疫比浊法原理的HbA1c测定系统进行精密度和正确度验证实验,计算各个系统的批内精密度、实验室内精密度及测定结果的正确度。结果4个系统的批内精密度CV为0．26％～1．02％,实验室内精密度CV为0．28％～1．50％;4个系统测定标准物质的均值[美国国家HbA,C标准化计划（NGSP）值]和标准物质定值的偏倚为-0．34％HbA1c～0．41％HbA1C,与国际临床化学与检验医学联合会（IFCC）定值导出的NGSP值的偏倚为-0．14％HbA1c～0．60％HbA1c。结论4个系统的批内精密度和实验室内精密度及正确度性能符合相关要求,能满足临床工作的需要。     

慢性心力衰竭患者凝血功能及C反应蛋白的改变

目的:研究慢性心力衰竭(心衰)患者中血浆组织因子(tissue factor,TF)活性、组织因子途径抑制物(tissue factor pathway inhibitor,TFPI)活性、血浆纤维蛋白原(Fibrinogen,Fg)等高凝状态指标,以及高敏C反应蛋白(high-sensitivity C-reactive protein,hs-CRP),探讨慢性心衰患者中凝血系统激活状态以及炎症反应。方法:采用发色底物法分别测定慢性心衰患者(心衰患者根据是否有心房颤动分为两组:心衰1组为无心房颤动者,心衰2组为合并有心房颤动者)、心功能正常的心脏病患者(心脏病心功能正常组)和正常人(正常对照组)血浆TF活性和TFPI活性。用酶联免疫吸附法测定血浆D-二聚体、用全自动血凝分析仪测定血浆Fg、用免疫浊度法测定hs-CRP。结果:慢性心衰患者各组TF活性、TFPI活性、D-二聚体、Fg水平显著高于心脏病心功能正常组及正常对照组(P< 0．05-0．01)。慢性心衰患者各组中hs-CRP也显著高于心脏病心功能正常组及正常对照组(P<0．01)。心衰1组和心衰2组之间TF活性、TFPI活性、D-二聚体、Fg、hs-CRP的差异无显著性(P>0．05)。相关性分析显示心衰患者中TF活性与LVEF负相关(r=-0．38,P<0．05),Fg水平与hs-CRP正相关(r=0．37,P<0．05)。结论:慢性心衰患者中存在凝血系统的激活,TF促凝活性明显增加,存在明显的高凝状态,并且左心室收缩功能越低的患者中TF促凝活性越高。慢性心衰患者中hs-CRP显著升高提示心衰中存在炎症反应,并且与高凝状态有一定的关联。     

我国特殊蛋白质检验指标允许总误差和允许不精密度的初步研究

目的初步探讨如何通过室间质量评价(EQA)和室内质量控制(IQC)数据,结合米兰会议最新确定的性能规范设定模式,为我国特殊蛋白质各检验指标推荐允许总误差(TEa)和允许不精密度(允许CV)。方法采用基于Web方式的EQA软件,收集参加国家卫生与计划生育委员会临床检验中心2015年第1次全国特殊蛋白质指标EQA活动的925家实验室数据以及上报当月IQC结果的742家实验室数据。用Excel 2010和SP_SS 19.0软件分别统计Ig A、Ig G、Ig M、补体3(C3)、补体4(C4)、C反应蛋白(CRP_)、类风湿因子(RF)、转铁蛋白、前清蛋白、Ig E、抗链球菌溶血素O(ASO)共11个指标的EQA数据,按批号计算每个实验室的"百分差值"及其P_10、P_90。分别统计11个指标的IQC数据,按批号计算所有实验室"在控变异系数(CV)"的P_80。前9个指标的EQA"百分差值"和IQC"在控CV"分别与基于生物学变异推导出的TEa和允许CV进行比较。结果 EQA数据显示,仅转铁蛋白、Ig E和ASO 3个指标采用基于当前技术水平推导出的TEa(分别为9.38%、12.02%和9.92%)作为各自TEa的推荐标准;其他指标均有80%以上的实验室达到基于生物学变异推导出的TEa的要求,可用基于生物学变异推导出的TEa作为推荐标准。IQC数据显示,CRP_和前清蛋白指标有80%以上实验室分别满足基于生物学变异推导出的最佳和适当水平允许CV的要求,而其他指标均不足80%的实验室满足基于生物学变异推导出的最低水平允许CV的要求,进而除CRP_和前清蛋白指标外,其他指标均使用基于当前技术水平推导出的允许CV作为推荐标准。结论初步研究了我国特殊蛋白质检验指标在当前技术水平下所能达到的性能水平,并为各指标推荐符合我国现状的TEa和允许CV。     

铁死亡调控基因亚精胺/精胺N1-乙酰基转移酶1在脑胶质瘤中的表达及临床意义

目的 探讨铁死亡调控基因亚精胺/精胺N1-乙酰基转移酶1(SAT1)在脑胶质瘤患者中的表达趋势及临床意义.方法 纳入中国脑胶质瘤基因组图谱计划(CGGA,http://www.cgga.org.cn/)及美国癌症基因组图谱计划(TCGA,http://www.cancergenome.nih.gov/)数据库中3批次共...     

半胱氨酸蛋白酶抑制剂 Ｃ 重组蛋白的制备

摘要：目的 构建半胱氨酸蛋白酶抑制剂 Ｃ（ＣｙｓＣ）原核表达载体，用以快速获取低成本、高浓度、高纯度的 ＣｙｓＣ 纯化蛋白，为 制备应用于临床实验室检测的 ＣｙｓＣ 标准物质和质控品奠定基础。 方法 用 Ｃｏｄｏｎ Ａｄａｐｔａｔｉｏｎ Ｔｏｏｌ 将人的 ＣｙｓＣ 编码序列优化 为大肠杆菌偏好的密码子序列，再将合成的 ＤＮＡ 片段克隆至 ｐＥＴ?２８ａ（＋）原核表达载体。 将重组 ＣｙｓＣ 表达质粒转化至Ｅ． ｃｏｌｉ ＢＬ２１ 感受态中，优化诱导表达条件、确定最优表达条件组合及有效表达序列，并用融合标签对重组蛋白进行纯化。 结果 成 功构建重组 ＣｙｓＣ 原核表达质粒，明确 ＣｙｓＣ 表达序列，确定异丙基硫代半乳糖苷（ＩＰＴＧ）诱导重组蛋白表达浓度、诱导温度等 条件，纯化的 ＣｙｓＣ 蛋白可通过临床检测，且稀释倍数与检测浓度间呈现线性关系。 结论 成功构建重组 ＣｙｓＣ 的高效原核表 达系统，重组 ＣｙｓＣ 蛋白纯度大、浓度高、生产周期短，有望为 ＣｙｓＣ 标准物质和质控品的制备提供物质基础。     

糖化血红蛋白实验室检测指南

<正>为提高我国HbA1c测定质量,适应HbA1c临床应用发展的需要,更科学、合理、有效地运用糖化血红蛋白,充分发挥其作用,卫生部临床检验中心、国家食品药品监督管理局医疗器械检验所和糖尿病学专家根据我国HbA1c检测现状,结合国内外相关研究进展,共同制定糖化血红蛋白实验室检     

腹腔镜在消化性溃疡穿孔手术中的应用

消化性溃疡穿孔的传统治疗方法多采用开腹手术，随着微创理论的普及、腹腔镜外科手术设备的提高和手术经验的积累，越来越多的临床医师采用腹腔镜穿孔修补术治疗消化性溃疡穿孔。2004年7月至2008年12月，作者采用腹腔镜微创外科技术治疗胃十二指肠溃疡穿孔61例，疗效满意。     

腹腔镜在上消化道穿孔手术中的应用

消化性溃疡穿孔的治疗方法传统多采用开腹手术，随着微创理论的普及、腹腔镜外科手术设备的提高和手术经验的积累，越来越多的临床医师采用腹腔镜穿孔修补术治疗消化性溃疡穿孔。2004年7月至2008年12月，作者采用腹腔镜微创外科技术治疗胃十二指肠溃疡穿孔61例，疗效满意。