基因重组人血管生长素衍生物Asp116His的原核表达

目的:在大肠杆菌内表达基因重组人血管生长素衍生物Asp116His(rhD116H-ANG)并恢复其天然活性。方法:采用EcoR和BamH双酶切,重组构建pBV220/D116H-ANG表达载体,转化大肠杆菌TG1基因工程菌,温控表达,破菌提取包涵体,变性、溶解、纯化、复性、浓缩,以鸡胚绒毛尿囊膜法及RNA降解试验测活。结果:成功表达rhD116H-ANG,表达量约30%,经纯化、复性、测活,证实获得活性蛋白,并取得较高得率及复性效率。结论:本实验建立的原核表达体系是获取活性rhD116H-ANG的有效途径,为规模化制备奠定了技术基础。     

人表皮生长因子基因体外转染人角质形成细胞的研究

基因治疗已开始用于多种疾病的治疗,而表皮作为人体最易获取的组织则显示了良好的应用前景 [1]。我们拟采用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)扩增人表皮生长因子 (hEGF)及其信号肽 cDNA,并构建到 pBK CMV穿梭质粒中,再经脂质体 LipofectAMINE介导转染培养的人角质形成细胞,以期获得真核表达的 hEGF蛋白,为表皮组织基因治疗的研究打下基础。 一、材料和方法 (一 )主要试剂：限制性内切酶、 T4 DNA连接酶及 PCR试剂盒等均为美国 Bio Rad公司产品;逆转录试剂盒为 Boehringer Mannheim公司产品; DMEM、 Opti MEM…     

组织多普勒测量Tei指数对风湿性心脏病二尖瓣狭窄经球囊扩张术后心室功能的评价

目的 探讨运用组织多普勒成像技术(tissue Doppler imaging,TDI)测量左、右心室Tei指数来评价风湿性心脏病二尖瓣狭窄(rheumatic mitral stenosis,MS)患者经皮二尖瓣球囊扩张术(percutaneous mitral ballon valvuloplasty,PBMV)后心室功能变化的可行性及临床意义.方法 36例MS患者,平均年龄(40.83±13.93)岁;正常对照组40例,平均年龄(39.56±12.34)岁.使用Philips iE33型彩色多普勒超声显像仪,测量正常对照组及入选病例术前、术后1d、术后1年左、右心室的Tei指数.分别比较正常对照组、MS术前组、术后1d组及术后1年组之间的差异性.结果 (1)术前组左、右心室Tei指数均较正常对照组高,差异有统计学意义(P均＜0.01);(2) PBMV术后1d组右心室Tei指数较术前减低,差异有统计学意义(P＜0.01);(3) PBMV术后1年组左、右心室Tei指数较术前组、术后1d组均减低,差异有统计学意义(P均＜0.01).结论 组织多普勒脉冲法获取的心室Tei指数,能很好的反映心室整体功能,而且更简便、易行,是对传统测量心室功能的改进及有益补充.     

一条人类砷相关新cDNA基因的克隆及功能预测

目的 探讨砷化物与基因的相互作用，克隆砷相关基因，利用生物信息学分析克隆基因。方法 利用SMART方法构建cDNA文库，杂交筛选并克隆基因，生物信息学对克隆基因进行结构和功能的分析。6μmol／LNaAsO2处理人正常肝L—02细胞2h，抽提RNA做基因芯片杂交。结果 成功克隆一条新cDNA基因，生物信息学分析发现7到456有一个完整的ORF，在编码起始区有典型的Kozak序列，编码149个氨基酸的蛋白质。核酸同源性比对发现与人类lp36．2—36．3染色体DNA序列同源性达98％，编码蛋白质同Alu亚家族SB序列同源性达85％。染砷细胞基因芯片杂交发现克隆基因表达增高。结论 克隆了人类砷相关基因，该基因编码蛋白质与Alu亚家族SB序列同源性高。     

基因重组碱性成纤维细胞生长因子促进猪深Ⅱ度烧伤创面愈合的实验研究

将基因重组的碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)作为外源性生长因子来观察比较不同浓度的 bFGF 对猪深Ⅱ度烧伤创面愈合的影响。结果表明连续用药3～5天后,创面外观及电脑图像分析显示,bFGF 对猪深Ⅱ度烧伤创面的愈合有一剂量效应。创面活检标本经用流式细胞计数仪做细胞 DNA的周期分析表明,用 bFGF 后创面细胞的 G_1期比例下降,S 期和 G_2 M 期比例增多;其变化规律与创面所用的 bFGF 浓度有关,并与电脑图像分析所得的数据相一致。提示浓度合适的 bFGF 能明显地促进创面的愈合。     

生物瓣膜材料体外内皮化形态学观察方法的探讨

在牦牛心包生理心瓣膜材料体外内皮化实验中，采用瑞氏染色法，成功地在普通光镜下观察到了心包片上种植的血管内皮细胞形态，多少及排列状况。与扫描电镜相比，该方法简便易行，时效性强，可随时进行，为实验进行生物材料内皮化的形态学观察提供了方便，具有推广价值。     

hCG嵌合肽(CP1)基因的化学合成和原核系统表达

鉴于人绒毛膜促性腺激素 (ｈＣＧ)疫苗研究的现状和现代疫苗发展的趋势 ,我们提出了研制ｈＣＧ嵌合肽免疫原的生物工程路线 ,其优点是可以任意组合多种广谱Ｔ细胞表位 (ＴＣＥ)和靶抗原的三个线性Ｂ细胞表位 (ＢＣＥ) ,从而在无需特殊佐剂的情况下达到抗体生成水平高、中和性及亲和性强、无ＭＨＣ限制的目的。通过生物合成所设计ｈＣＧ嵌合肽 ,也便于工厂化生产并降低疫苗成本。ｈＣＧ嵌合肽设计 :选用外源ＨＢｓＡｇ19 3 3基金项目 :国家自然科学基金资助项目(39870 856)作者单位 :2 0 0 0 32上海市计划生育科学研究所 (徐万祥 ,邱德义 ,廖…     

大鼠实验性高脂血症五种造模方法的比较

目的选择理想的大鼠高脂血症动物模型造模方法。方法参考文献选取5种大鼠高脂血症动物模型配方,并将其制成乳剂给大鼠灌胃,分别在d10、d20、d30眼眶取血测定血清中胆固醇、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白、甘油三酯的含量。结果其中四种高脂配方均不同程度的使大鼠血清中脂代谢紊乱,形成高血脂动物模型。结论在猪油和胆固醇的基础上同时加入胆盐和丙基硫氧嘧啶可以形成理想的大鼠高脂血症动物模型。     

急慢性砷染毒的肝细胞L-02的基因芯片分析

目的用基因芯片分析急慢性砷染毒时人正常肝细胞(L-02细胞)基因表达谱的变化。方法6omol／L的亚砷酸钠染毒L-02细胞2，15，24h，4μmol／L的亚酸钠染毒L-02细胞2周，分别与未染毒的L-02细胞抽提RNA作表达谱基因芯片杂交。结果急性和慢性砷诱导细胞基因表达谱截然不同。染砷后首先激活的是解毒功能相关的基因和一些蛋白质合成相关的基因。长期染砷后与肿瘤发生及氧化还原有关的基因表达量升高。结论细胞短期染砷毒后，应激和解毒功能有关的蛋白表达上调，长期染砷后与肿瘤有关的基因表达上调，急慢性砷刺激下细胞以不同的方式抵抗砷毒。