乙型肝炎病毒基因亚型研究进展

近年来,各国学者对乙型肝炎病毒（HBV）基因型及其亚型的研究十分关注。HBV基因型不仅能反映核酸变异程度和病毒种系发生关系,而且与感染者的临床表现、预后及疗效有关。目前,根据HBV全基因组序列差异≥8％,或S基因序列≥4％,将HBV分为A、B、C、D、E、F、G、H等8个基因型,但基因型H是否是独立于F的一个新基因型,还有待进一步证实。各基因型之间还存在混合感染,如B与C、C与D混合感染等∞。有人认为,混合感染可能与重叠感染或基因型之间的同源重组或部分转换有关。值得注意的是：近年来,除研究HBV基因型外,对HBV基因亚型也进行了深入研究,发现A基因型可进一步分为Aa和Ae亚型0;B型可分为B1（Bi）、B2（Ba）、B3和B4亚型N;C型可分为c1、c2、c3和c4亚型;D型可分为D1、D2、D3和D4亚型,F型可分为F1和F2亚型等（见表1）。     

新发现的肝炎相关病毒

庄辉,教授,博士生导师,中国工程院院士,学术专长为医学微生物学、病毒性肝炎病原学、实验室诊断及预防。1961年毕业于前苏联莫斯科第一医学院。1961～1963年任中山医科大学卫生学教研室助教。1963年到北京医科大学工作至今。1980年3月～1982年6月、1993年2月～8月及1999年7月～12月先后三次作为访问学者赴澳大利亚 Fairfield 医院病毒科、生物安全性及协作研究中心进行病毒性肝炎研究。曾任北京医科大学微生物学系主任,现任国际戊型肝炎研究会副主席、国务院学位委员会学科评议组和卫生部肝炎防治领导小组成员、国家科技奖励医药卫生专业组评委会、卫生部病毒性肝炎专家咨询委员会、卫生部生物制品标准化委员会委员、中华医学会肝病学会主任委员、中国肝病防治基金会理事及第四军医大学等四所大学名誉教授等职。同时担任《中华肝脏病杂志》和《国外医学病毒学》杂志副主编,《World Journal of Gas-troenterology》、《中华流行病学杂志》、《中华实验和临床病毒学杂志》等十余种期刊的常务编委或编委。曾任世界卫生组织病毒学肝炎技术咨询小组成员、亚太地区公共卫生学联合会理事、卫生部药品审评委员会委员、北京市肝炎研究所副所长、北京医科大学公共卫生学院院长等职务。     

肝组织中HBV cccDNA荧光定量聚合酶链反应检测法的建立

Objective To establish and optimize a sensitive and specific quantitative realtime polymerase chain reaction(PCR)method for detection of hepatitis B virus covalently closed circular DNA(HBV cccDNA)in liver tissue. Methods Specific primers and probes were designed to detect HBV DNA(tDNA)and cccDNA. A series of plasmids(3.44 × 100-3.44 × 109 copies/μl)containing a full double-stranded copies of HBV genome(genotype C)were used to establish the standard curve of real-time PCR. Liver samples of 33 patients with HBV related hepatocellular carcinoma(HCC), 13 Chronic hepatitis B patients(CHB)and 10 non-HBV patients were collected to verify the sensitivity and specificity of the assay. A fraction of extracted DNA was digested with a Plasmid-Safe ATP-dependent Dnase(PSAD)for HBV cccDNA detection and the remaining was used for tDNA and β-globin detection. The amount(copies/cell)of HBV cccDNA and tDNA were measured by a real-time PCR, using β-globin housekeeping gene as a quantitation standard. Results The standard curves of real-time PCR with a linear range of 3.44 × 100 to 3.44 × 109 copies/μl were established for detecting HBV cccDNA and tDNA, and both of the lowest detection limits of HBV cccDNA and tDNA were 3.44 × 100 copies/μl. The lowest quantitation levels of HBV cccDNA in liver tissues tested in 33 HBV related HCC patients and 13 CHB patients were 0.003 copies/cell and 0.031copies/cell, respectively. HBV cccDNA and tDNA in liver tissue of 10 non-HBV patient appeared to be negative. The true positive rate was increasing through the digestion of HBV DNA by PSAD, and the analytic specificity of cccDNA detection improved by 7.24 × 102 times. Liver tissues of 2 patients were retested 5 times in the PCR for detecting cccDNA and the coefficience of variations on cycle threshold (Ct)were between 0.224%-0.609%. Conclusion A highly sensitive and specific quantitative real time PCR method for the detection of HBV cccDNA in liver tissue was established and could be used for clinical and epidemiological studies.     

新疆维吾尔族慢性乙型肝炎患者HBV基因型及亚型分析

目的探讨新疆维吾尔族(维族)慢性乙型肝炎患者中乙型肝炎病毒(HBV)基因型及基因亚型。方法用本实验室建立的HBV基因型及基因亚型特异性引物巢式聚合酶链反应(nPCR)法,对54份新疆维族慢性乙型肝炎患者血清样本进行HBV基因型及亚型分析。随机选取11株经nPCR法鉴定为D基因型的样本,同时进行PreS/S区及PreC/C区测序以鉴定D基因亚型。随机选取2株D型HBV进行基因组全长扩增并克隆测序。从GenBank下载75株各国HBVD1亚型参考序列,根据Kimuratwo-parameter法计算中国新疆地区与其他国家的HBVD1亚型株进化距离。结果新疆维族人群HBV感染以D基因型为主,占66.67%,同时存在B(5.56%)、C(5.56%)基因型及混合感染(22.22%)。新疆存在D1和D3两种亚型,以D1亚型为主。新疆D1亚型与中亚哈萨克斯坦、乌兹别克斯坦、蒙古等国及中东地区土耳其、伊朗、埃及等国的进化距离较近。结论新疆维族慢性乙肝患者中D基因型为优势株,主要为D1亚型,其进化距离与中亚中东等国较为接近。     

2009年猪源性甲型流感大流行的公共卫生介入管理

1918-1919年H1N1流感大流行导致全球几千万人死亡,社会动荡和经济损失惨不忍睹。其后近百年来,人类为减少流感大流行造成生命和财产损失不懈努力。公共卫生系统建设和流感公共卫生介入管理研究在其后H2N2和H3N2流感毒株大流行时得到进一步发展。2009年新的H1N1流感病毒株幽灵重现,公共卫生系统及其流感介入管理策略再一次面临挑战,以史为鉴,尊重科学,有条不紊,全球应战。本文就流感大流行的历史、这次流感病毒株的特点和公共卫生介入管理的依据、效果评价模型、实践与挑战以及当前和未来的发展策略简要阐述。     

北京市成人诺如病毒性腹泻流行病学调查

目的探讨北京市成人诺如病毒性腹泻的流行病学特点。方法采集2007年10月~2008年1月在中日友好医院就诊的232例成人急性腹泻患者的粪便样本,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测粪便诺如病毒抗原。统计学处理采用SPSS 10.0统计软件,率的差异用χ2检验,P0.05为差异有统计学意义。结果232份粪便样本中诺如病毒抗原阳性136例,阳性率为58.62%,各年龄组间阳性率差异无统计学意义(P0.05)。10月份诺如病毒检出率最高,为63.30%(69/109),12月份检出率最低,为44.44%(20/45),差异有统计学意义(P0.05)。136例诺如病毒阳性患者中,出现呕吐症状者占47.79%(65/136),而诺如病毒阴性患者为26.04%(25/96),差异有统计学意义(P0.001)。结论本调查研究表明,诺如病毒是北京市秋冬季成人散发性腹泻的主要病原体,成人诺如病毒性腹泻患者易出现呕吐症状。     

慢性乙型肝炎病毒DNA定量检测的临床意义

近年来,随着核酸及核酸类似物、聚乙二醇干扰素α等抗病毒药物的问世,使得慢性乙型肝炎临床抗病毒治疗取得了明显发展,同时对乙型病毒肝炎的实验室检测也提出了新的要求,促进了实验室诊断技术的发展.本研究着重讨论临床抗病毒治疗中乙型肝炎病毒DNA定量检测的应用和重要性,指出HBV DNA的定量检测病毒学应答对于判定抗病毒疗效、调整临床抗病毒治疗方案、停药后随访及预测预后等有重要意义.     

丙型肝炎病毒血清学分型应用的可行性研究

目的 探讨丙型肝炎病毒血清学分型的可行性。方法 应用EIA法对兰州地区148例抗－HCV阳性者进行血清学分型。结果 血清学方法的分型率为56．08％（83／148）,其中血清1型占50．60％（42／83）,血清2型占43．47％（36／83）,1＋2混合型占6．03％（5／83）。对其中70例HCVRNA阳性血清的基因型与血清型结果进行比较,二者完全相符。结论 丙型肝炎病毒的血清学分型具有一定的临床应用价值。     

深圳市一般人群庚型肝炎病毒感染的调查

1995年Ｓｉｍｏｎｓ等[1] 首次发现庚型肝炎病毒 (ＨＧＶ) ,其后我国学者也相继报道了对ＨＧＶ的一些研究 ,但关于一般健康人群中ＨＧＶ的感染状况则很少报道。我们采用随机抽样法对深圳市 1843名一般人群ＨＧＶ感染状况进行了调查 ,结果报告如下。1.材料与方法 :(1)研究对象 :采用随机抽样法抽取研究对象。按整群抽样法从深圳市的罗湖、福田、南山及龙岗 4个区的健康体检单位各随机抽取 1个单位 ,在全市抽取中、小学各一所 ,被抽到的单位所有人均作为研究对象 ,并按统一调查表逐项询问 ,同时抽取静脉血 2ｍｌ,分离血清 - 2 0℃保存待测。(2…     

乙型肝炎表面抗原（HBsAg）胶体金试剂的研制

目的：研制乙型肝炎表面抗原（HBsAg)胶体金试剂,方法：用未加氢氧化铝佐剂的乙型肝炎血源疫苗原材料免疫BALB/c小鼠制备抗－HBs单克隆抗体,应用胶体金标记抗－HBs单克隆抗体,测定HBsAg胶体金剂试的稳定性,对该试剂进行临床考核及检定等,结果,经中国药品生物制品检定所检定,其灵敏度达到1ng/ml, 特异度为100％（20／20）,精密度为100％（10／10）,符合国家对HBsAg试剂僵的要求,临床考核合格,已通过国家药品监督管理局的新药评审,获国家新药证书,结论,HBsAg胶体金试剂可用于献血员HBsAg筛选,健康人群体检,乙型肝炎病毒（HBV）感染的流行病学调查和临床诊断。