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42.
目的 构建重组全长平滑肌肌球蛋白轻链激酶(myosin light chain kinase,MLCK)ATP结合位点突变体,以研究平滑肌MLCK的结构与功能.方法 利用试剂盒对MLCK ATP结合位点进行定点突变,构建全长平滑肌MLCK ATP结合位点突变体重组表达载体pCold/BsMLCK/△ATP,在大肠杆菌中表达:利用SDS-PAGE鉴定表达的重组全长平滑肌MLCK ATP结合位点突变体在细胞中的分布:运用亲和层析及凝胶过滤分离纯化重组全长MLCK并利用SDS-PAGE鉴定表达MLCK的纯度.结果 重组全长MLCK/△ATP(突变型)在大肠杆菌中以可溶的形式大量表达;在样品的上清和沉淀中均有重组全长MLCK/△ATP表达;经CaM-Sepharose 4B和Superose 6 HR纯化,SDS-PAGE鉴定得到单一的表达条带.结论 重组全长MLCK/△ATP(突变型)可以在大肠杆菌中以可溶形式大量表达;SDS-PAGE结果显示重组全长MLCK/△ATP可以通过亲和层析和凝胶过滤纯化得到单一的条带. 相似文献
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目的:以在某种程度上可反映成骨细胞增殖的成骨样细胞UMR106为靶细胞,考察蛇床子素对其细胞形态、增殖率和分化程度的影响。方法:实验于2003-03/2004-03,在中国人民武装警察部队医学院药物化学教研室药物活性筛选室进行。以大鼠成骨肉瘤细胞系UMR106为靶细胞,以雌二醇1×10-8mol/L为阳性对照,同时设空白对照组,蛇床子素干预组分为1×10-8mol/L,1×10-7mol/L,1×10-6mol/L3个浓度组。①调整细胞浓度为4×107L-1,接种于12孔培养板上。48h后,倒置显微镜下观察细胞形态变化。②调整细胞浓度为2×107L-1,接种于96孔培养板,采用四唑盐法测定各孔的吸光度,计算平均增殖率。③调整细胞浓度为2×107L-1,接种于24孔培养板,磷酸对硝基苯基质动力学法测定细胞内外碱性磷酸酶活性。上述实验每组均设8个复孔。结果:①培养基中加入蛇床子素培养48h后,与对照组相比UMR106细胞数量明显增多,核分裂期多见,1×10-6mol/L,1×10-7mol/L组可见细胞重叠生长,分泌基质堆积明显。②UMR106细胞经蛇床子素处理48h后,相对于对照组,1×10-6mol/L组增殖率为52%,1×10-7mol/L组为37%,1×10-8mol/L组为16%。3个给药组与对照组相比差异均有显著性(t=37.36,14.94,6.81,P<0.01)。③UMR106细胞经蛇床子素1×10-6mol/L和经雌二醇1×10-8mol/L处理24h和48h后,细胞内碱性磷酸酶活性均显著高于对照组犤(825.17±12.34),(775.16±8.67),(715.14±14.17)μkat/g;(2415.48±15.84),(2355.47±5.67),(2285.49±7.67)μkat/g;t=16.56,10.22;20.89,34.90,P<0.01犦。④UMR106细胞在浓度为1×10-6,1×10-7mol/L的蛇床子素及雌二醇10-8mol/L培养24h后,细胞外碱性磷酸酶活性显著高于对照组犤(781.66±11.50),(733.15±15.34),(728.81±9.84),(652.80±11.34)μkat/g;t=22.56,11.91,14.32,P<0.01犦。结论:蛇床子素可剂量依赖地促进UMR106细胞的增殖,刺激UMR106细胞的碱性磷酸酶活性,提示其可能具有直接促进成骨细胞增殖、分化的作用。 相似文献
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目的 研究桔梗皂苷胶囊的制备工艺.方法 以桔梗皂苷D含量为检测指标,应用L_9(3~4)正交试验设计对桔梗皂苷胶囊进行最佳制备工艺筛选.结果 最终得到桔梗皂苷胶囊的最佳提取工艺为:加水提取3 h、提取3次、加水量10倍、醇沉浓度为65%,药醇液静置48 h.结论 该工艺制备可靠,质量稳定,适合于工业化生产. 相似文献
45.
目的:探讨基于磁共振小肠造影对比增强序列的影像组学分析对小肠克罗恩病活动性炎症的诊断效能。方法:回顾性分析了82例末端回肠受累克罗恩病患者的磁共振小肠造影及临床资料,患者以磁共振活动指数(MaRIA)为参照标准分为无-轻度活动组和中-重度活动组,使用ITK-SNAP对磁共振小肠造影延迟增强图像上的感兴趣区进行勾画,运用PyRadiomics软件对感兴趣区进行特征提取,之后使用FeAture Explorer Pro将提取的特征按7:3比例随机分为训练集和测试集(训练集58例,31/27=阳性/阴性;测试集24例,13/11=阳性/阴性),并进行特征降维及建模。将建立的影像组学模型应用到测试集中进行验证。最后采用受试者操作特征曲线评估影像组学模型对克罗恩病活动性炎症的诊断效能。结果:从磁共振小肠造影延迟增强图像中共提取出374个特征,经过特征降维、筛选后,最终3个特征被纳入到影像组学模型中,克罗恩病活动性炎症影像组学模型为:1.248×wavelet-HLL_firstorder_Kurtosis+0.717×wavelet-LLL_first order_90Percentile+1.... 相似文献
46.
47.
糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)是糖尿病(DM)的主要微血管并发症,在西方(美国)是终末期肾病(end—stage renal disease,ESRD)的最主要原因,约占38%,我国由DN造成的ESRD亦逐年上升。我们对32例2型糖尿病DN患者在饮食、 相似文献
48.
目的:调查分析广东省东莞市横沥镇40岁及以上常住户籍居民新诊断2型糖尿病患者糖尿病视网膜病变患病率及其危险因素。方法以人群为基础的横断面流行病学调查。对广东省东莞市横沥镇1个社区和16个行政村,40岁及以上户籍常住居民进行普查。调查内容包括:基本信息、问卷调查、身体测量、实验室检查以及系统眼科检查。所有糖尿病患者均接受眼底照相检查。统计分析新诊断2型糖尿病患者糖尿病视网膜病变的患病率及危险因素。结果8952人参与糖尿病筛查和眼科检查,应答率为80.06%,新诊断2型糖尿病患者1072人,占71.09%,平均年龄为(58.94±7.74)岁,糖尿病视网膜病变患病率为12.64%。 Logistic逐步回归分析结果显示男性和糖化血红蛋白(≥6.5%)是影响新诊断2型糖尿病患者发生糖尿病视网膜病变的独立危险因素。结论广东省东莞市横沥镇40岁及以上常住户籍居民中新诊断2型糖尿病患者糖尿病视网膜病变患病率为12.64%,建议对新诊断2型糖尿病患者进行早期眼底筛查,尤其需要关注男性和糖化血红蛋白异常患者。 相似文献
49.
药物化学实验教学中设立开放性实验的尝试 总被引:10,自引:0,他引:10
在药物化学实验教学中尝试进行开放性实验,指导学生对实验中发现的问题通过查阅文献、归纳分析资料,提出新的解决办法如新的合成路线或后处理方法等,设计出实验方案,探索性地完成实验,最后写出实验论文。这种方法有利于培养学生的科研思维方式和创新意识;有利于提高学生分析问题和解决问题的能力。 相似文献