基因转染技术提高体内构建组织工程化软骨质量的实验研究

目的：研究转化生长因子β(TGF—β1)cDNA基因转染对软骨细胞Ⅱ型胶原表达的调控作用，为基因转染技术在软骨组织工程中的应用提供理论依据。方法：利用脂质体Fugene6将含TGF-β1基因的其核表达载体及空白载体分别转染至软骨细胞(基因转染组和对照组)，RT—PCR、Nonhem—Blots、原位杂交及免疫组化检测TGF—β1调节体外培养软骨细胞II型胶原表达的变化。结果：TGF-β1基因转染软骨细胞后，其II型前胶原mRNA及其蛋白的表达均显著增强，且随着TGF—β1蛋白表达的丧失，其对软骨细胞II型前胶原mRNA表达的促进作用亦逐渐减弱。结论：TGF—β1可以上调体外培养软骨细胞II型胶原的表达。     

中医足部按摩加药浴在工伤康复治疗中的应用

应用中医足部按摩加药浴治疗工伤患者,能取得良好疗效,笔者将10 a来临床应用情况总结报道如下。1临床资料抽选其中80例工伤患者均为男性住院患者,其中骨科患者65例,外科患者15例;年龄最大54岁,最小22岁;病程1个月~5 a。其中颅脑损伤者6例,颈椎及脊髓损伤者14例,上、     

急性胆源性胰腺炎48例外科治疗体会

目的 探讨急性胆源性胰腺炎治疗方法 的不同选择.方法 分析48例急性胆源性胰腺炎的临床资料.结果 23例经费手术治疗缓解,3周后行延期手术,平均住院天数33天,20例在发病3天内行急诊手术,平均住院天数9天,5例行非手术治疗,平均住院天数20天;延期手术组3例死亡(病死率13.04%),早期手术组2例死亡(病死率10.00%),非手术组1例死亡(病死率20%).结论 急性胆源性胰腺炎早期应选择手术治疗;绝大多数急性胆源性胰腺炎的患者手术是安全的.     

神经外科昏迷患者气管切开术后的护理体会

<正>神经外科的昏迷患者中,为保证呼吸道通畅,预防呼吸道并发症,降低脑外科患者的死亡率,气管切开起到重要作用,我院自2005年1月至2012年1月,期间共收治住院患者5897例,其中,行气管切开术的患者931例,占患者总数的15.8%,其中,年龄最大者79岁,最小者9岁,气管切开最长时间378天,最短时间2天,平均46.4天。     

基于干细胞的骨组织工程研究与临床应用

目的寻找满足要求和易于操作的种子细胞。方法参阅国内外相关文献,对近年来干细胞的骨组织工程的应用研究作一综述。结果干细胞的研究为解决组织工程种子细胞来源问题开辟了新的途径。结论满足要求和易于操作的种子细胞为脂源性干细胞。     

美容就医者眼整形照片拍摄的优化效果

探讨整形外科照相流程优化在眼整形患者接诊的效果。2018年5月至2019年5月, 北京世纪坛医院整形外科对就诊患者146例(男6例、女140例, 年龄18～66岁, 中位年龄42岁)进行了照片拍摄流程改进。在眼整形患者接诊过程中, 可得到质量可靠的眼部多角度照片, 并及时向患者进行讲解, 优化就诊流程。146例患者对就诊过程整体满意度及对手术方案的认可程度较传统接诊方式明显提升, 满意132例, 占90.4%。该方法利于眼整形诊断与制定方案、便于资料积累, 值得临床应用。     

携带人TGF-β1腺病毒载体的构建及鉴定

目的构建携带人转化生长因子β1(hTGF-β1)的腺病毒载体(Adeno-hTGF-β1),为hTGF-β1基因转染骨髓间质干细胞(BMSCs)的研究奠定基础。方法应用基因重组技术构建hTGF-β1腺病毒表达载体,分别用限制性内切酶酶切和聚合酶链反应(PCR)鉴定,并通过脂质体Fugene 6介导腺病毒DNA转染293细胞。结果重组hTGF-β1腺病毒DNA经限制性内切酶XhoⅠ酶切后,得到14.5、8.1、4.2、4.0、2.5、1.4、0.6 kb片段。与空白腺病毒相比,5.6 kb的片段已被置换成4.2 kb和4.0 kb片段;经PI-SceⅠ/I-CeuⅠ双酶切后,得到32.6 kb和2.6 kb含目的基因片段,片段大小无误,表明重组Adeno-hTGF-β1腺病毒表达系统构建成功。以重组Adeno-hTGF-β1DNA为模板的PCR产物中出现1.35 kb hTGF-β1目的基因片段,表明hTGF-β1基因成功连接至adeno-X腺病毒表达载体中。重组hTGF-β1腺病毒表达载体通过Fugene 6介导转染293包装细胞出现细胞病变效应(CPE)。采用PCR反应鉴定293细胞包装的腺病毒,证实扩增出247 bp的hTGF-β1目的基因片断和312 bp的腺病毒骨架基因片断。结论携带人hTGF-β1的腺病毒载体的构建成功,并能在293细胞包装,为hTGF-β1基因转染的BMSCs在软骨组织工程中的应用奠定了基础。     

力学刺激促进骨髓基质干细胞体外软骨分化

目的探讨离心力刺激对猪骨髓基质干细胞(BMSCs)体外成软骨分化的作用,以及对三维支架上构建组织工程化软骨的影响,明确力学刺激与细胞分化及组织形成的关系,为体外软骨构建提供适当参数。方法抽取8周龄猪髂嵴骨髓,应用贴壁法分选单个核细胞,体外培养扩增后获得第2代BMSCs,以5.0×107/cm3的细胞密度接种到聚羟基乙酸(PGA)制成的圆柱形三维支架上,7d后分成4组,在不同的力学条件及诱导条件下培养。8周后取材,行相关检测。结果力学诱导组形成的组织呈白色,细腻光泽,形状规则,体积无明显改变,有良好的弹性和硬度,并具有典型的软骨陷窝结构和大量软骨特异性细胞外基质,Ⅱ型胶原及丰富的聚合蛋白多糖(GAG)成分。GAG含量为(6.0±1.2)mg/g,抗压强度为(2.2±0.8)kPa,弹性模量为(7.4±1.6)kPa。各项指标均明显优于其他各组。结论力学刺激有利于促进BMSCs成软骨分化,并在三维支架材料上构建组织工程化软骨。     

聚乳酸-聚羟基乙酸膜体外复合兔脂肪源性间充质细胞的生长规律

背景:虽然国外已有报道应用间充质干细胞复合聚乳酸-聚羟基乙酸应用于组织的构建,但研究重点在于这些复合物能否修复组织缺损,尚缺乏间充质细胞与材料相容性的研究.目的:观察兔脂肪源性间充质细胞在聚乳酸-聚羟基乙酸膜上的黏附及生长情况.设计、时间及地点:体外观察实验,于2007-09/2009-03在复旦大学附属眼耳鼻喉科医院眼科研究所和上海组织工程重点实验室完成.材料:6月龄雌性新西兰大白兔6只用于提取脂肪源性间充质细胞.聚乳酸及聚羟基乙酸购自美国Sigma公司.方法:兔麻醉后取颈背处的皮下脂肪,I型胶原酶消化法获得原代细胞,接种至含体积分数为10%胎牛血清的DMEM培养液中,细胞达80%融合时传代,取第4代细胞用于实验.将聚乳酸与聚羟基乙酸按照7:3的比例合成聚乳酸-聚羟基乙酸膜,相对分子质量为104 900.主要观察指标:用Dio染料标记第4代细胞后测定不同接种浓度细胞在聚乳酸-聚羟基乙酸膜上的黏附率;在细胞与材料共培养1周以后,分别利用荧光倒置显微镜、扫描电镜及双光子显微镜观察细胞在材料表面及内部的生长情况.结果:不同接种浓度细胞与材料的黏附率最高可达99%.细胞与材料共培养1周以后.荧光倒置显微镜检查发现材料中有表达绿色荧光的大量细胞,形态呈纤维样或卵圆状;扫描电镜表明细胞在材料表面呈复层生长且与材料黏附良好,细胞分泌基质较旺盛;双光子显微镜检查提示细胞在内部分布均匀且形态以纤维样为主.结论:脂肪源性间充质细胞可在聚乳酸-聚羟基乙酸膜材料表面及内部生长,两者生物相容性较好.