树鼩副粘病毒(TPMV)PCR方法的建立及初步应用

目的建立树鼩副粘病毒(Tupaia paramyxovirus,TPMV)PCR检测方法,并进行初步应用。方法根据NCBI公布的TPMV基因组序列,选择8231 bp~8720 bp区域人工合成一段DNA序列并转入质粒中,作为阳性标准质粒。根据TPMV保守区域设计一对特异性引物,考察方法的特异性和灵敏度,并应用于60份树鼩呼吸道咽拭子c DNA及12份树鼩肺组织c DNA的检测中。结果所建立的PCR检测方法特异性好,灵敏度高,可达11.5×10-5μg/m L。60份树鼩呼吸道咽拭子c DNA及12份树鼩肺组织c DNA检测均为阴性。结论建立的树鼩副粘病毒PCR检测方法特异性强,灵敏度高,可用于树鼩副粘病毒的常规检测中。     

蓝氏贾第鞭毛虫诊断

目的：蓝氏贾第鞭毛虫作为一种重要的人兽共患寄生虫病贾第虫病的病原,其对SPF实验动物质量造成的潜在威胁不容忽视。本研究的目的是建立蓝氏贾第鞭毛虫快速诊断方法,并对17个生产厂家516批2562只SPF实验动物检查结果进行分析。方法用直接镜检法、快速姬姆萨染色法和多重PCR方法,对蓝氏贾第鞭毛虫进行检测。结果在SPF实验动物中检出数量众多的蓝氏贾第鞭毛虫滋养体和包囊,鉴定出蓝氏贾第鞭毛虫18S rDNA、β－giardin、TPI和GDH基因。直接镜检法、快速姬姆萨染色法和多重PCR方法均能检出蓝氏贾第鞭毛虫。17个生产厂家516批2562只SPF实验动物蓝氏贾第鞭毛虫阳性检出率22．9％（586／2562）。结论直接镜检法、快速姬姆萨染色法和多重PCR方法具有高度的敏感性和特异性,可用于蓝氏贾第鞭毛虫的快速诊断。17个生产厂家516批SPF实验动物蓝氏贾第鞭毛虫检查结果未能全部符合规定。     

关于我国实验动物社会化的思考

本文作者提出了一个快速发展我国实验动物科学非常重要的关键课题。 2 1世纪 ,人类将进入生命科学新时代。实验动物科学系未来生物医学、药学等生命科学前沿的基础科学和重要支撑条件。实验动物科学的发展速度、规模、质量 ,将直接影响未来生物高科技发展进程。现代生物高科技———克隆技术 ,转基因和基因敲除技术 ,胚胎干细胞 (ES细胞 )技术 ,基因工程技术 ,基因芯片 ,生物信息 ,后基因组学的基因整体表达模式动物等等 ,均需要以高质量实验动物及模式动物资源为基础 ,否则 ,上述高科技发展就等于空中楼阁。作者提出了发展实验动物科学的基本问题 ,欢迎广大同仁对此展开讨论     

实验动物新型垫料的开发

实验动物垫料直接与机体接触,带来的污染机会多。所以。垫料的灭菌处理是成功地饲养高等级实验动物的关键之一。当今世界上公认的优质垫料是椴木屑,但我国椴木产量有限,成本较高,开发新型优质垫料迫在眉睫。我们选用资源丰富、成本低廉、极少公害的蒲草作为开发对象,与椴木屑、玉米棒芯、高梁秸芯等材料进行了比较试验。     

三个品系小鼠的遗传监测

目的检测新培育的IRM-1近交系小鼠的基因纯合性,并与IRM-2、615近交系小鼠进行比较,确定其遗传特性。方法按照国家标准GB/T14927.1-2001、GB/T14927.2-2001遗传检测操作规程,对IRM-1近交系小鼠进行Akpl等25个遗传生化标记基因纯合度、组织相容性基因纯合度的测定,用同系异体间进行移植试验;以及毛色基因测试。结果IRM-1近交系小鼠的25个遗传生化标记基因均为纯合体,其中有5个生化标记基因多态性位点与IRM-2近交系小鼠不同,有8个生化标记基因多态性位点与615近交系小鼠不同;皮肤移植100d后,未见排斥现象;毛色基因测试,F1的毛色全部为野生色,基因型为aaBBCCDD。结论IRM-1小鼠遗传纯合度已达国家标准,是基因位点高度纯合的近交系小鼠。     

上海KM小鼠种子群体遗传状况分析

目的对国家啮齿类实验动物种子中心上海分中心KM小鼠种子群体进行群体遗传质量分析与评价。方法利用筛选出的30个微卫星位点设计引物,对种群中随机抽取的30只KM小鼠样本进行PCR扩增,扩增产物利用STR扫描技术进行测定,用Popgen1.32软件对所得结果进行处理分析。结果 KM小鼠种子群体共得到123个等位基因型,平均有效等位基因数为2.3989,平均杂合度为0.5342,平均多态性信息含量(PIC)为0.4735。结论上海分中心KM小鼠种子群体具有良好的遗传稳定性和多样性,符合封闭群动物的群体遗传概貌特征。     

实验犬布氏杆菌的多重PCR检测与分型鉴定

目的建立实验犬及相关生物制品布氏杆菌的多重PCR检测与分型鉴定方法。方法选择布氏杆菌Omp2基因同源性较高的区域设计引物对布氏杆菌进行多重PCR扩增,扩增结果一致的样本进行酶切以区分不同型,同时进行序列测定,以确定该方法的准确性;然后验证该方法的特异性和敏感性。结果成功扩增得到目的条带,并通过酶切区分五种布氏杆菌;PCR产物与布氏杆菌DNA序列同源性达到99%,并验证了该方法的检测结果。实验结果证明该方法特异性较好,灵敏性为1.8×10-7μg/mL。结论成功建立布氏杆菌多重PCR检测与分型鉴定方法,所建立的方法特异性好,灵敏度高。本研究对保证实验犬群的质量,保护饲养人员、实验人员的身体健康具有重要意义。     

小鼠胚胎干细胞制备嵌合体的方法——聚合法初探

目的利用胚胎干细胞株E14．1及新建立的C57BL／6J小鼠胚胎干细胞，采用聚合法进行嵌合体的构建。方法以E14．1及C57BL／6J干细胞为供体细胞，分为由5-10、10-15、15-20、20-25个单细胞组成的干细胞团。分别与C57BL／6J及ICR的8-16细胞期胚胎细胞聚合共培养24h再进行胚胎移植。结果E14．1与C57BL／6J胚胎的聚合及C57BL／6J与ICR胚胎的聚合均以10-15个单细胞组成的干细胞团产生的嵌合体效果最好，分别得到嵌合体小鼠11只和5只，嵌合率分别为27．50％和16．13％。结论使用聚合法成功构建嵌合体，为嵌合体的制备提供了一种简单易行的方法。     

SNP与Hbb基因多态性的关联性

目的从单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism，SNP）水平探索小鼠生化标记基因Hbb多态性的形成机理。方法从DNA、RNA和蛋白多肽3个方面分析研究Hbb基因的多态性。结果基因组DNA中有4个SNP位点与Hbbd/s多态性相关：分别为外显子1中的2个T（G），外显子2中的G（A）和外显子3中的A（G）；RNA水平有4个SNP位点与Hbbd/s多态性相关：分别对应为外显子1中的2个T（G），外显子2中的G（A）和外显子3中的A（G）；蛋白多肽水平第13、20和139位氨基酸残基，即Cys/Gly、Ser/Ala和Thr/Ala间的转换与Hbb/s多态性相关，分别对应于外显子1中的2个T（G）和外显子3中的A（G）。结论第13、20和139位氨基酸残基，即Cys/Gly、Ser/Ala和Thr/Ala间的转换可能是Hbbd/s多态性的形成原因。