呼肠孤病毒Ⅲ型(Reo3)RT-PCR检测方法的建立

目的建立呼肠孤病毒Ⅲ型(Reo3)RT-PCR检测方法,应用于实验动物及人用动物源性材料及生物制品外源Reo3的检测。方法根据已发表的呼肠孤病毒Ⅲ型(Reo3)M1基因序列,设计合成引物。提取Reo3细胞毒RNA,以其为模板,进行PCR扩增。优化反应条件,进行特异性、敏感性、重复性试验。结果建立的Reo3RT-PCR检测方法特异、敏感、稳定。以Reo3 RNA逆转录产物为模板,所能检测RNA最小模板浓度为0.42pg/μL,可检测病毒最小滴度为10-9/mL。结论建立的呼肠孤病毒Ⅲ型(Reo3)RT-PCR检测方法可用于实验动物及人用动物源性材料及生物制品外源Reo3的检测。     

中国灰仓鼠气管和回盲部细菌分离鉴定及药敏试验

目的 对新疆灰仓鼠气管和回盲部携带的细菌种群分布情况及耐药性进行调查分析.方法 对新疆灰仓鼠采样进行细菌学分离和生化鉴定,并选择主要细菌进行药敏试验.结果 共分离到22株细菌.结果 表明,中国灰仓鼠气管和回盲部携带的细菌种群主要有埃希菌属(大肠埃希氏菌)、假单胞菌属(铜绿假单胞菌)、葡萄球菌属(松鼠葡萄球菌)、巴斯德氏菌属(嗜肺巴斯德氏菌、产气巴斯德氏菌、多杀巴斯德氏菌)和芽孢杆菌属(短小芽孢杆菌、蜂房芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌)等,这些菌株对四环素、左氧沙星等药物有很高的敏感性,而对氨苄西林、青霉素G等药物不敏感.结论 中国灰仓鼠携带的细菌种群具有多样性,研究结果为中国灰仓鼠的细菌学检测以及质量标准的制定提供了科学依据.     

近交系剑尾鱼的STR遗传检测技术

目的 建立近交系实验用鱼DNA检测方法,用于遗传质量控制.方法 以RR-B、RW-H、BY-F三个近交系剑尾鱼的基因组DNA为主要研究对象,并以非选育剑尾鱼作对照,采用STR (short tandem repeat) 引物扩增方法检测不同品系在DNA上的异同.设计10对STR引物,优化PCR电泳条件,使用相同的实验条件进行重复,以得到可靠的扩增条带,筛选出特异性引物.结果 有4对引物可扩增出稳定条带,1对引物(AY204223)的PCR扩增条带在非选育群中表现多态性,在RR-B与BY-F系表型一致,与RW-H表型不同.这些STR位点能够区分剑尾鱼三个近交系品系.结论 STR检测技术可望用于近交系剑尾鱼的遗传质量监测.     

乙型脑炎病毒(JEV)ELISA检测方法的建立

目的建立猪乙型脑炎病毒（JEV）抗体ELISA检测方法。方法培养BHK21细胞,接种JEV病毒,制备BHK21正常抗原和JEV特异抗原,滴定酶结合物和抗原最佳工作浓度,并进行精密性、敏感性、稳定性、特异性实验。结果正常、特异抗原和酶结合物最佳工作浓度分别为0.2μg/mL、10μg/mL和1∶20000;正常、特异抗原批内变异系数分别为8.3%和6.4%,批间平均变异系数分别为9.7%和11.5%;检测灵敏度为1∶1280;与猪瘟病毒（CSFV）、猪细小病毒（PPV）均无交叉反应。稳定性试验相对偏差小于25%。结论建立的ELISA方法重复性、稳定性好,特异性、敏感性强。可用于猪JEV抗体的检测。     

猫疱疹病毒Ⅰ型PCR检测方法的建立及初步应用

目的建立猫疱疹病毒Ⅰ型（FHV-1）PCR检测方法,应用于临床样品中FHV-1的快速检测。方法根据已发表的FHV-1TK基因序列设计合成引物,并以此建立FHV-1的PCR检测方法,并对方法的特异性、敏感性、稳定性等进行验证。用建立的方法对15份猫临床样品进行检测。结果建立的FHV-1PCR检测方法与单纯疱疹病毒Ⅰ型（HSV-1）、犬疱疹病毒（CHV）、猪伪狂犬病毒（PRV）、猫细小病毒（FPV）均无交叉反应;可检测病毒最小滴度为7lg TCID50/ml,相应的DNA模板浓度为1.46×102拷贝/ml;FHV-1DNA在-30℃冰箱放置12个月仍可检测出目的条带。应用该方法从15份猫临床样本中检测出10份FHV-1核酸阳性。结论建立的FHV-1PCR检测方法具有特异、敏感及稳定的特点,适合于临床FHV-1的感染检测。     

泰泽氏菌TaqManMGB探针荧光定量PCR方法的—立及应用

目的 建立泰泽氏菌的TaqMan小沟结合物(MGB)探针荧光定量PCR检测方法.方法 针对泰泽氏菌16S rRNA基因的保守区设计特异性引物和探针,建立MGB探针荧光定量PCR方法,并验证该方法的特异性、敏感性和稳定性.对2008-2011年采集的1156份临床样本进行检测,同时进行普通PCR检测作为对照.结果 泰泽氏菌TaqMan MGB探针荧光定量PCR方法具有高度特异性,与肝螺杆菌、幽门螺杆菌、空肠弯曲菌、侵肺巴斯德氏菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌之间无交叉反应,检测灵敏度达2.2 copy/μl.标准曲线显示各浓度范围内具有良好线性关系,相关系数为0.999,斜率为-3.204,PCR效率为100％.对1156份临床样本进行检测,荧光定量PCR检出101份泰泽氏菌阳性样本,而普通PCR则仅检出44份.荧光定量PCR方法从临床样本中检出泰泽氏菌DNA仅需2h.结论 TaqMan MGB探针荧光定量PCR方法具有特异、灵敏和稳定性,适于泰泽氏菌的快速检测.     

PCR技术在小鼠CAR杆菌检测中的初步应用

目的 建立有效的CAR杆菌（Cilia-associated respiratory bacillus）PCR检测方法,并进行初步应用.方法 针对NCBI公布的CAR杆菌序列,选取大小合适的序列,合成质粒,并设计特异性引物,对实际样品进行检测,扩增出的阳性片段进行测序,验证该方法的可靠性.结果 成功建立了CAR杆菌的PCR检测方法,初步应用验证了该方法的可靠性.结论 该方法的建立为实验动物CAR杆菌的检测奠定基础.     

豚鼠遗传检测方法研究进展

豚鼠作为一种常用的实验动物,广泛应用于生物医学研究中的各个领域,其遗传质量的稳定性直接影响着它的发展和应用。遗传检测目的是为了证实各品系动物应具有的遗传特性,检查是否发生遗传污染和遗传突变等,确保被检对象符合该品系的要求。生化标记和分子标记技术的出现,为实验豚鼠基因纯合度、遗传类型检测、遗传质量监测提供了更为简便可靠的研究手段。本文就生化标记、细胞学标记和分子标记在豚鼠多样性研究中的应用及研究进展进行了论述,为豚鼠遗传检测方法的建立提供帮助。     

牛副流感病毒3型RT-PCR方法的建立及初步应用

目的建立用于牛源性样本中牛副流感病毒3型(BPIV3)RT-PCR检测方法。方法选择已发表的BPIV3神经氨酸酶(HN)基因高度保守区域作为靶基因,设计合成引物,建立BPIV3 RT-PCR方法。并对方法的特异性、敏感性、重复性、稳定性等进行方法学评价。同时用建立的RT-PCR方法检测137份牛源性样本。结果建立的BPIV3RT-PCR方法与牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛鼻气管炎病毒(BHV-1)、仙台病毒(SV)均无交叉反应;可检测病毒最小滴度为6 lgTCID_(50)/mL;BPIV3cDNA在-30℃冰箱放置12个月仍可检测出目的条带;应用建立的方法检测137份牛源样本,核酸阳性率为14.6%。结论建立的BPIV3荧光定量PCR检测方法具有快速、特异、敏感及稳定的特点,可用于牛源性样本中BPIV3核酸的检测。