封闭群斑马鱼的STR遗传检测技术

目的建立近交系实验用鱼DNA检测方法,用于遗传质量控制。方法以RR-B、RW-H、BY-F三个近交系剑尾鱼的基因组DNA为主要研究对象,并以非选育剑尾鱼作对照,采用STR（short tandem repeat）引物扩增方法检测不同品系在DNA上的异同。设计10对STR引物,优化PCR电泳条件,使用相同的实验条件进行重复,以得到可靠的扩增条带,筛选出特异性引物。结果有4对引物可扩增出稳定条带,1对引物（AY204223）的PCR扩增条带在非选育群中表现多态性,在RR-B与BY-F系表型一致,与RW-H表型不同。这些STR位点能够区分剑尾鱼三个近交系品系。结论STR检测技术可望用于近交系剑尾鱼的遗传质量监测。     

五种国产与进口小鼠病毒ELISA抗体检测试剂盒的比较研究

目的评价国产小鼠病毒抗体ELISA检测试剂盒。方法选择国产与进口小鼠淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)、肝炎病毒(MHV)、仙台病毒(SV)、腺病毒(MAV)、细小病毒(MPV)ELISA抗体检测试剂盒,进行敏感性、特异性、精密性、稳定性、可信度试验比较。结果国产与进口试剂盒:同种试剂盒之间灵敏度相差最低为2倍,差异显著(P<0.05),最高为16倍,差异极显著(P<0.01);特异性试验显示每种试剂盒,与其他4种病毒均无交叉反应;精密性试验显示5种试剂盒批内平均变异系数均小于10%;稳定性试验显示5种试剂盒相对偏差均小于25%;分别选择已知36份小鼠血清进行检测,国产和进口LCMV、MHV、SV、MPV符合率均为100%;国产MAV符合率为86.1%,进口MAV符合率均为100%,二者之间差异极显著(P<0.01)。结论除国产MAV试剂盒敏感性、可信度低于进口外,国产LCMV、MHV、SV、MPV试剂盒与进口同种试剂盒相比,在敏感性、特异性、精密性、稳定性和可信度方面均良好。     

单管双向等位基因专一性扩增方法在近交系小鼠遗传检测中的应用

目的将新近建立的单管双向等位基因专一性扩增(single-tube bi-directional allele specific amplification,SB-ASA)方法用于分析近交系小鼠基因组中的单核苷酸多态性(SNP)。方法以5个近交系小鼠为研究对象,采用SB-ASA方法对其16个SNP位点进行检测,并通过双盲实验和测序验证该方法的可靠性;且考察了该方法中PCR反应各成分及扩增条件对结果的影响。结果16个SNP位点,SB-ASA都成功地对5个品系小鼠进行了分型,与测序结果完全一致;双盲实验结果显示通过3个SNP位点即可鉴别5个品系。结论SB-ASA方法可用于近交系小鼠SNP的遗传检测,可望作为一种新的分子生物学遗传检测方法推广应用。     

实验室能力验证用酯酶-3标准样品的均匀性和稳定性研究

目的:制备均匀性和稳定性良好的能力验证用酯酶-3样品(a型、c型、ac型),为标准样品的制备、保存和发放等提供基础科研数据。方法:均匀性实验按照随机原则抽取4%比例的样品进行测定。稳定性实验以4℃、室温(RT)和37℃这3个温度为观测纵坐标,1、4、7、14、30、60、90 d为观测横坐标,在每个坐标交点,a型、c型及ac型样品分别随机抽取2瓶,测定各型别样品在不同条件下的稳定性。结果:在均匀性测定实验中,a型、c型及ac型均表现为各自型别的清晰条带。经稳定性实验测定表明,在4℃条件下,a型、c型和ac型标准样品分别可以稳定存放60、90、30 d;在室温条件下,a型、c型和ac型标准样品分别可以稳定存放7、30、7 d;在37℃条件下,所有样品均可稳定存放1 d。结论:酯酶-3标准样品均匀性良好,符合能力验证标准样品制备、发放和实验的要求;标准样品的稳定性对温度变化比较敏感,应避开高温天气运输或采用冷链运输。     

KH-550/PPy/PET单丝制备及生物相容性评价

背景：目前关于移植毛发的研究大部分是以患者本身拥有足够的毛发为基础,对于治疗大面积的秃发没有明显的效果,而植入性人造头发可解决这一问题。 目的：制备硅烷偶联剂γ-氨基丙基三乙氧基硅烷/聚吡咯膜/涤纶（KH-550/PPy/PET）单丝复合材料作为植入性人造头发,并对制备效果进行评定,测定复合材料对小鼠成纤维细胞L929的细胞毒性。 方法：涤纶单丝经过去污处理、碱减量处理、硅烷偶联剂处理和聚吡咯镀膜等一系列过程制备成KH-550/PPy/PET复合材料。采用直接接触法,将此复合材料和L929细胞共孵育。采用CCK-8法于培养第1,2,3,5,7天进行细胞毒性检测。 结果与结论：制备所得的复合材料表面光滑,聚吡咯镀膜完整,无断裂,且耐磨性能良好,不易脱落。从扫描电子显微镜、傅里叶变换红外分光检测减量处理后的涤纶单丝表面聚吡咯的镀膜量明显高于未经过碱减量处理的涤纶单丝。复合材料和L929细胞共孵育,培养第1,2,3,5,7天细胞存活率依次为100%,80.37%,73.26%,81.96%,77.50%,细胞毒级为1级。结果表明,硅烷偶联剂γ-氨基丙基三乙氧基硅烷的引入有效地提高了聚吡咯膜与涤纶单丝的结合力,实验所制备的硅烷偶联剂γ-氨基丙基三乙氧基硅烷/聚吡咯膜/涤纶复合材料生物相容性较好,无明显细胞毒性。     

嗜血杆菌属CODEHOP PCR检测方法的建立及在树鼩检测中的应用北大核心CSCD

目的建立树鼩中嗜血杆菌的CODEHOP PCR快速检测方法,为树鼩微生物质量控制提供参考。方法应用CODEHOP在线简并引物设计工具,比对NCBI中6株嗜血杆菌的外膜蛋白序列设计简并引物。通过4株嗜血杆菌标准菌株和24株它属菌株进行特异性和敏感性评价,将建立CODEHOP PCR检测方法,应用于树鼩嗜血杆菌的检测。结果简并引物HF1/HR8和HF3/HR3扩增标准菌株副鸡嗜血杆菌(ATCC 29545)、溶血嗜血杆菌(ATCC 33390)、流感嗜血杆菌(ATCC33391)、副流感嗜血杆菌(ATCC 33392)的目的片段分别为506bp^535bp和344bp^390bp,经测序和NCBI Blast比对,结果准确。两对引物组合,能够有效的区分嗜血杆菌属菌株与它属菌株,检测限最低可达2.1pg/μL。在受试的野生树鼩呼吸道样本中嗜血杆菌阳性率为33.3%(20/60)。结论所建立的方法具有较好的特异性和敏感性,操作简便,能够用于动物样品的嗜血杆菌检测。     

血液制品中病毒检测控制与风险管理

20世纪80年代以来,发生多起经血液传播的病毒感染,血液制品病毒安全性倍受关注。目前我国已发布多部法规、条例以及指导原则对血液制品病毒安全性进行严格管理。本文分析了我国管理法规中关于病毒安全管理的相关要求,对血浆及其制品的病毒检测方法,生产工艺中病毒灭活/去除的相关方法及其验证进行了阐述,旨在推动血液制品中病毒风险控制与管理水平的提高及血液制品的合理应用。     

嗜肺巴斯德杆菌研究进展

嗜肺巴斯德杆菌(Pasteurella pneumotropica)是一种条件致病菌,人兽共患。主要危害啮齿类动物,特别是免疫缺陷或抑制的动物,可引起炎症和脓肿等症状。该菌是实验动物中感染率最高的病原菌之一,多呈隐性感染,给动物实验带来了极大的干扰。本文针对嗜肺巴斯德杆菌的流行病学、检测和鉴定、分子分型和防治等方面进行综述。     

小鼠腺病毒PCR检测方法的建立及初步应用

目的 建立小鼠腺病毒（MAdV） PCR检测方法,应用于长爪沙鼠、小鼠等实验动物MAdV的检测.方法 根据已发表的小鼠腺病毒（MAdV） E1B基因序列,设计合成引物.建立RT-PCR方法,并对方法的特异性、敏感性、稳定性等进行验证.用建立的方法对65只长爪沙鼠、12只小鼠进行检测.结果 建立的MAdV PCR检测方法与小鼠微小病毒、多瘤病毒无交叉反应;以MAdVDNA为模板,所能检测DNA最小模板浓度为1.67 pg/μl,可检测病毒最小滴度为10-7/ml; MAdVDNA在-30℃冰箱放置12个月,仍能扩增出大小约606 bp的可见目条带.经PCR检测,65只沙鼠和12只小鼠均为阴性.结论 建立的小鼠腺病毒（MAdV） PCR检测方法特异、敏感、稳定,可用于小鼠、长爪沙鼠等实验动物MAdV的检测.     

三个封闭群实验兔线粒体DNA D-loop区多态性分析

目的 通过对三个封闭群实验兔线粒体DNA控制区序列进行分析,从分子水平探讨其群体的多样性和均一性.方法 利用特异引物对新西兰白兔、日本大耳白兔、青紫蓝兔三个封闭群共71份血液样品线粒体D-loop区部分序列进行扩增,纯化,测序,用Mega4.0和DNA SP软件对变异位点数、简约信息位点数、单倍型、单倍型多样度、核苷酸多样度等遗传信息进行分析.结果 在71份样品中,共检测出了6个多态性位点,多为C→G突变,定义了9种单倍型,且三个种群分别有各自单倍型,互不重叠.三个种群D-loop区多态性及种群多样性均偏低.结论 本研究为兔线粒体D-Loop区序列特征和国内常用三个封闭群实验兔种群结构提供了更多数据,并为遗传育种提供指导.