豚鼠弓形虫抗体ELISA检测方法的建立及应用

目的 建立以弓形虫重组抗原的豚鼠弓形虫抗体ELISA方法,并进行初步应用.方法 根据重组抗原的工作浓度包被酶标板,确定酶标二抗浓度,对方法的特异性、灵敏度、稳定性和重复性等进行测试.结果 确定酶标二抗最佳稀释度为1∶8000;与豚鼠淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒(LCM)、仙台病毒(SV)、肺炎病毒(PVM)及呼肠孤3型(Reo3)阳性血清均无交叉反应;对已知阳性血清的检测上限可达1∶2560;6个月的稳定性试验显示A490值的相对偏差均小于15％;批内变异系数(CV)5.7％ ～ 9.5％,批间变异系数(CV)1.9％～9.0％;对182份样本的检测表明豚鼠弓形虫抗体阳性率为7.14％(13/182),与IFA检测结果的符合率为100％,与商品化试剂盒的阳性符合率为92.3％,阴性符合率为100％.结论 建立的豚鼠弓形虫重组抗原ELISA检测方法可用以弓形虫抗体的常规检测.     

KH-550/PPy/PET单丝制备及生物相容性评价

背景：目前关于移植毛发的研究大部分是以患者本身拥有足够的毛发为基础,对于治疗大面积的秃发没有明显的效果,而植入性人造头发可解决这一问题。 目的：制备硅烷偶联剂γ-氨基丙基三乙氧基硅烷/聚吡咯膜/涤纶(KH-550/PPy/PET)单丝复合材料作为植入性人造头发,并对制备效果进行评定,测定复合材料对小鼠成纤维细胞L929的细胞毒性。 方法：涤纶单丝经过去污处理、碱减量处理、硅烷偶联剂处理和聚吡咯镀膜等一系列过程制备成KH-550/PPy/PET复合材料。采用直接接触法,将此复合材料和L929细胞共孵育。采用CCK-8法于培养第1,2,3,5,7天进行细胞毒性检测。 结果与结论：制备所得的复合材料表面光滑,聚吡咯镀膜完整,无断裂,且耐磨性能良好,不易脱落。从扫描电子显微镜、傅里叶变换红外分光检测减量处理后的涤纶单丝表面聚吡咯的镀膜量明显高于未经过碱减量处理的涤纶单丝。复合材料和L929细胞共孵育,培养第1,2,3,5,7天细胞存活率依次为100%,80.37%,73.26%,81.96%,77.50%,细胞毒级为1级。结果表明,硅烷偶联剂γ-氨基丙基三乙氧基硅烷的引入有效地提高了聚吡咯膜与涤纶单丝的结合力,实验所制备的硅烷偶联剂γ-氨基丙基三乙氧基硅烷/聚吡咯膜/涤纶复合材料生物相容性较好,无明显细胞毒性。中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料;骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性;组织工程全文链接：     

一种快速的leptin~(ob)和leptinr~(db)等位基因SNP分型方法

目的建立leptinob和leptinrdb等位基因的SNP分型方法-单管双向等位基因专一性扩增(single-tubebi-directional allele specific amplification,SB-ASA),同时与传统的PCR-酶切法进行比较分析。方法用PCR-酶切法和SB-ASA方法同时对ob/+杂合小鼠的7只后代小鼠和db/m的9只后代小鼠进行了检测分型。结果两种方法都成功地对ob、db小鼠进行了分型,且结果完全一致。结论成功建立了一种快速的leptinob和leptinrdb等位基因的SNP分型方法-SB-ASA,促进了ob、db小鼠的繁殖育种工作。     

大鼠主要组织相容性复合体RT1研究进展

主要组织相容性复合体在免疫应答中起着重要作用,其多态性研究及应答机制一直是基础免疫学的热点。大鼠基因组草图已经绘制完成,对于主要组织相容性复合体RT1分子水平的遗传学,基因组学,进化及功能方面的研究日渐深入。本文主要介绍了实验大鼠MHC复合体基因的遗传结构,并绘制了其物理结构图谱。重点阐述大鼠的RT1复合体基因的多态性研究,以及RT1复合体对大鼠的移植模型和复杂疾病模型的意义。     

鼠肺炎病毒实时荧光定量聚合酶链反应方法的建立及其在新型冠状病毒感染模型用小鼠等动物检测中的应用

目的 建立鼠肺炎病毒（pneumonia virus of mice,PVM）实时荧光定量聚合酶链反应（real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,Q-PCR）检测方法,用于新型冠状病毒感染模型用小鼠等实验动物及其动物相关样本的检测。方法 选择PVM G基因保守序列设计合成引物和探针,建立Q-PCR方法。并进行方法的线性、特异性、敏感性、重复性、稳定性和可信度验证。应用建立的方法对包括用于构建新型冠状病毒感染模型用hACE2等8个品系142只小鼠,及15只大鼠、5只沙鼠、4只黄鼠、63只裸鼹鼠和19只PVM感染小鼠的肺组织样本进行PVM检测。结果 建立的方法与仙台病毒、呼肠孤病毒Ⅲ型、汉坦病毒、淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒无交叉反应。方法的线性范围为1×101～1×108拷贝/μl,检测病毒质粒标准品灵敏度达101拷贝/μl;重复性、稳定性结果显示实验内和实验间平均变异系数均<5%。用建立的方法检测用于构建新型冠状病毒感染模型用hACE2等8个品系142只小鼠,及15只大鼠、5只沙鼠、4只黄鼠和63只裸鼹鼠...     

鼠痘病毒FQ-PCR检测方法的建立及初步应用

目的 建立鼠痘病毒(ECTV)的TaqMan探针法荧光定量PCR检测方法,并对实验室保存的裸鼹鼠组织样本、小鼠组织样本以及黄鼠组织样本进行检测.方法 根据GenBank中鼠痘病毒的crmD基因序列设计引物探针,建立ECTV的FQ-PCR检测方法,对保存的样本进行筛查,并对部分阳性样本进行测序鉴定.结果 建立的ECTV ...     

CAR菌TaqMan MGB探针法实时荧光定量PCR快速检测方法的建立与应用

目的建立特异、敏感、快速检测CAR菌的TaqMan MGB探针荧光定量PCR方法。方法针对CAR菌16S rRNA基因序列设计特异性引物和探针,建立MGB探针荧光定量PCR方法,验证方法的特异性、敏感性和稳定性。对2008～2012年期间采集的1 344份临床标本中的CAR菌进行检测,同时进行普通PCR检测作为对照。结果 CAR菌TaqMan MGB探针荧光定量PCR方法具有高度特异性,与肺炎支原体、侵肺巴斯德菌、支气管鲍特杆菌、肺炎克雷伯杆菌、大肠埃希菌、肺炎链球菌间无交叉反应,检测灵敏度达2.7拷贝。标准曲线显示各浓度范围内具有良好线性关系,相关系数为0.999,斜率为-3.22,TaqMan MGB探针荧光定量PCR效率为104.432%。对1 344份标本进行检测,结果 TaqMan MGB探针荧光定量PCR检出510份CAR菌阳性样本。TaqMan MGB探针荧光定量PCR能够直接从标本中检出CAR菌DNA,检测时间仅为40 min。结论 TaqMan MGB探针荧光定量PCR方法具有可靠、特异、敏感的特点,适用于CAR菌的快速检测。     

脑心肌炎病毒（EMCV）RT-PCR检测方法的建立及初步应用

目的 建立脑心肌炎病毒（EMCV）RT-PCR检测方法,应用于长爪沙鼠、小鼠等实验动物EMCV的检测.方法 根据已发表的EMCV VP1基因序列设计合成引物.建立RT-PCR方法,并对方法的特异性、敏感性、稳定性等进行验证.用该方法检测62只长爪沙鼠、12只小鼠.结果 建立的EMCV RT-PCR检测方法特异、敏感、稳定.以EMCV RNA逆转录产物为模板,所能检测RNA最小模板浓度为4.1 pg/μL,可检测病毒最小滴度为10-7mL-1.经RT-PCR检测,62只沙鼠均为阴性;12只小鼠中有1只EMCV核酸阳性,测序结果与GenBank中EMCV标准株核苷酸序列进行比对,其同源性为85%.结论 建立的脑心肌炎病毒（EMCV）RT-PCR检测方法特异、敏感、稳定,可用于长爪沙鼠、小鼠等实验动物EMCV的检测.     

Tw近交系小鼠的遗传鉴定和罕见基因分析

目的比较转染两个补体调节蛋白(CRP)基因与转染单一CRP基因对异种细胞的保护作用。方法采用双基因混合注射的方法,将人MCP(膜辅因子蛋白)和CD59(膜反应性溶解抑制物)两种基因导入521枚KM小鼠的受精卵原核。结果得到原代转hCD59基因小鼠14只,转hMCP基因小鼠12只,hCD59/hMCP双基因共整合的小鼠7只,转基因效率5%。通过5只G0代转双基因小鼠和非转基因小鼠的繁殖,得到F1转hMCP小鼠14只,转hCD59小鼠16只,转双基因小鼠10只,F1双基因占33.3%。用10%新鲜人血浆体外灌注小鼠离体心脏,转双基因组心脏搏动时间(138±25min)明显长于单基因组(hCD59组78±27min,hMCP组43±21min)和非转基因对照组(20±12min)。结论转染两个CRP基因比转染单一CRP基因对异种细胞有更好的保护作用。     

番荔枝内酯抗肿瘤作用研究进展

番荔枝内酯(ACG)是一类从多种番荔枝科植物中提取的长碳链脂肪酸内酯,具有广谱抗肿瘤作用.番荔枝内酯来源丰富,具有广阔开发应用前景.动物实验发现,番荔枝内酯毒性较大.目前通过化学修饰或结构改造,提高其抗肿瘤活性、生物利用度并降低毒性,是番荔枝内酯药物的研发方向.