2005年上海市麻疹流行株血凝蛋白基因变异及其对抗原性的影响

目的了解2005年上海市及其邻近地区麻疹流行株的基因变异及其对抗原性的影响。方法从麻疹疑似患者咽拭子标本分离病毒，RT-PCR扩增麻疹流行株及目前使用的麻疹疫苗株血凝蛋白基因（H）全序列，分析其在核苷酸及氨基酸水平上的序列差异，同时与中国以往的麻疹病毒分离株进行比较，采用交叉中和试验分析其抗原性的变化。结果4株上海地区麻疹病毒流行株属于H基因组H1a基因型，与麻疹疫苗株（A基因型）基因相比，有91～99bp不同，引起27～28个氨基酸改变，其中重要的具有生物活性的第240位氨基酸由丝氨酸突变为天冬酰胺酸，第481位由酪氨酸突变为天冬酰胺酸。麻疹患者恢复期血清对流行株中和抗体滴度是麻疹疫苗株的2．49倍（P〈0．05）。急性期患者血清及初次免疫后血清（1～2岁幼儿）对疫苗株的中和抗体滴度分别是流行株的1．69倍和1．61倍。结论上海地区麻疹流行株与麻疹疫苗株属于不同的基因型，除2个功能位点氨基酸突变外，具有生物学和免疫学活性的位点多数未发生改变，麻疹疫苗株仍能完全中和流行株，中和能力略有下降，麻疹疫苗对预防麻疹野病毒的感染依然有效。     

江苏东台市急性上呼吸道腺病毒感染的病毒基因分型

2004年4月至6月,江苏省东台市许河镇及其周围乡镇发生了急性上呼吸道感染的暴发流行,截至6月8日,共报告发热病例783例.以发热为主要症状,伴有咽痛、咳嗽、鼻塞、流涕、咽部充血等上呼吸道症状或体征,病程2～10 d,平均5 d,潜伏期1～10 d.此次疫情主要发生在学校和幼儿园,4月中下旬开始,许河小学和中学不断有发热病例出现,发病人数缓慢增多,5月17日开始,发病人数急速上升,于19～20日达到高峰,并持续在较高水平;5月18日以前病例绝大多数为许河小学及许河中学学生,之后疫情逐渐波及到其他学校和幼儿园,停课措施对疾病的控制未见明显效果.此次病例主要为18岁以下的在校学生及儿童,10至14岁年龄组占总发病数的48.0%,呈现明显的班级聚集性.     

甲型H1N1流行性感冒疫情暴发的思考

近年来,传染病的"新现"(emergency)与"再燃"(re-emergency)已经逐渐凸显为最为重要的公共卫生问题之一.在亚洲,H5N1高致病性禽流感病毒间或性地感染人群、造成病例死亡,并出现人间传播病例,不仅重创了当地的禽类养殖业和旅游业,更引发社会普遍的恐慌;在东部非洲,由于雨季时间延长,使得裂谷热病毒疫情再次上升,更重要的是病毒通过当地的伊斯兰教朝觐者逐渐向中东地区传播,沙特阿拉伯和也门相继报告了确诊病例;在南美洲,黄热病病例的分布范围不断扩大,促使整个大洲不得不共同协调进行监测,同时实施大规模的疫苗接种项目以避免疾病的进一步扩散;在欧洲,蓝舌病病毒的新变种BTV-8使得原本仅存在于南欧的蓝舌病逐渐向北欧蔓延,不仅严重危害家畜养殖,同时也引发了这种改变是由于病毒本身的变异抑或是媒介昆虫改变所导致的新讨论.     

无锡地区流感病毒病原学监测及H3亚型血凝素基因变异研究

目的 监测无锡地区2005年至2008年季节性流感型与亚型分布并了解2008年部分A/H3N2分离株血凝素(8A)基因变异状况.方法 无锡地区医院门诊流感样患者及集体单位聚集性流感样暴发患者采集鼻咽拭标本,接种MDCK细胞,采用标准抗血清鉴定阳性分离株型与亚型,并对2008年部分H3亚型流感病毒进行HA全基因测序,分析HA基因变异状况.结果 2005年至2008年9月,在无锡地区流感样患者中共分离到435株流感病毒,其中164株为A/H1N1亚型,80株为MH3N2亚型,B型191株.型与亚型有明显季节性分布强弱特征.H3亚型HA序列分析,无锡地区9株分离株与上海地区同期分离株接近,有很多序列相互穿插归属于进化树的同一分支,与WHO 2008-2009年疫苗推荐株相近.结论 近年无锡地区散发和局部暴发流感病毒感染仍主要为A/H1N1、A/H3N2和B型,A/H3N2 HA基因与上海地区同期分离株接近,与WHO 2008-2009年疫苗推荐株相近.     

DISCOVERY OF EXTRACELLULAR MULTIPL FORM OF CHLAMYDIA TRACHOMATIS IN THE TISSUE CULTURE

A strain of Chiamydia trachomatis was isolated from a patient with nongonococcal urethritis (NGU).Alternate passages between chick embryo and McCoy cell culture were examined.From the Giemsa stained coverslips taken from the cell culture 96 hours after inoculation,we found,to our surprise,     

一种简易的人乳腺癌雌激素受体的测定

正常乳腺的生长发育,受多肽类激素和甾体类激素的调节和控制。乳腺细胞癌变后,有的可以完全或部分丧失E_2R,此时不再成为受激素控制的靶细胞,即所谓“自主型”或“非激素依赖性肿瘤”,但还有半数以上的乳腺癌可以保留数量不等的E_2R,仍受激素环境的调节。目前多数报道E_2R阳性的乳腺癌约占全部乳腺癌病例50—70％左右,一般认为原发性乳腺癌患者,E_2R阳性率大于转移癌,绝经后的乳腺癌比绝经前高,各相差10—15％左右,E_2R范围从1以下到1000 fmol/mg细胞胞浆蛋白以上(1fmol=1×10~(-15)mol/1)。E_2R阳性者用内分泌治疗的效果,已在1974年美国的Bethesda国际年会会议上作了肯定。目前多数报告认为,E_2R阳性者对内分泌治疗客观有效率可达50—70％左右,E_2R阴性者客观有效率仅5—10％。     

甲型H1N1流行性感冒病毒血凝素蛋白基因进化研究

Objective To determine the evolutionary rate and divergence time of influenza A virus HA gene isolated recently worldwide pandemic and explore the origin and its transmission. Methods A total of 344 HI sequences available in the GenBank (including 248 isolated from human, 84 from swine, 11 from avian, and 1 from ferret) and 7 isolated in Shanghai were collected. The nucleotide substitution rate and time to most recent common ancestor (tMRCA) was calculated using molecular clock theory and Bayesian Skyline Plot (BSP) based on Markov chain Monte Carlo. Then genetic phylogeny was constructed referring to posterior distribution. Results It was found that H1 sequences in the US from human, swine and avian were clustered significantly with swine H1 ones from Asia phylogenetieally (Cluster US). The second cluster (Cluster Eurasian Human) nearly consisted of human H1 sequences isolated in other regions. The third cluster (Cluster Eurasian Animal) consisted of swine and avian H1 sequences from China and Italy respectively. As for all the H1 sequences, the evolutionary rate was of 2.57×10-3substitutions/site per year averagely (95% Highest Posterior Density: 1.96×10-3-3.03×10-3/site per year). The estimated dates for tMRCA of human H1 in Europe and swine H1 in the mainland of China were the earliest, with the corresponding rates of 6.46×10-3/site per year and 0.97×10-3/site per year respectively. The tMRCAs of human and swine H1 sequences from the US were similar, with the rates of 5.86×10-3/site per year and 5.02×10-3/site per year. Conclusion The present flu outbreak was possibly induced by long-term circulation of influenza A virus (H1 N1) in human population and swine herds in America. There was no evidence proving that influenza virus in China involved in the present outbreak.     

急性呼吸道疾病爆发流行的病原学研究

目的 对2004年4月起在江苏苏北及其邻近地区发生中、小学生爆发急性呼吸道疾病(ARD)流行的集中发热并伴有头痛、头晕、咽痛、扁桃体炎病例进行病因研究。方法 对流行区20位患者的咽拭子标本分离病原体，并对阳性分离株进行免疫荧光、聚合酶链反应(PCR)以及电镜检测。结果 MDCK(35代)、LLC-MK2、Vero E6、MRC-5(39代)分离培养均未出现细胞病变；军团菌培养亦未发现阳性结果；经人喉癌传代细胞(Hep-2)分离培养，20份标本中13份出现了明显的细胞病变效应，电镜下可见细胞胞核内大量呈晶格状排列的典型腺病毒颗粒，直接免疫荧光试验及PCR检测均证实为腺病毒感染。结论 2004年4月发生在江苏省苏北地区中、小学急性呼吸道感染疫情的病原体为腺病毒。     

上海地区2010年冬季甲型H1N1流行性感冒病毒株变异分析

目的 了解上海地区2010年冬季人群甲型H1N1流行性感冒(流感)病毒流行株基因及抗原的变异.方法 采集2010年12月至2011年1月间上海地区哨点医院流感样患者咽拭子标本137份,接种犬肾细胞(MDCK),分离流感病毒,直接免疫荧光法(DIF)鉴定流感病毒型,RT-PCR鉴定甲型H1N1,对部分甲型H1N1流感病毒株进行血凝素(HA)、神经氨酸酶(NA)、病毒聚合酶(PB2)片段全基因测序,分析基因及氨基酸位点变异.结果 共分离到53株人流感病毒,48株为甲型H1N1流感病毒,按简单随机抽样法抽取19株测序.HA进化树分析发现,与2010年6月前分离的甲型H1N1毒株比较,绝大部分不位于同一主干上;HA蛋白的氨基酸位点分析显示,部分毒株在抗原决定位点上发生变异.NA蛋白酶活性中心及周围相关位点氨基酸组成保守,未检测到耐奥司他韦和扎那米韦的变异位点.PB2蛋白第627位和701位点分别是谷氨酸和天冬氨酸,仍是禽源流感病毒特征,但第677位点出现E677G突变.结论 2010年冬季上海地区人群甲型H1N1流感病毒流行株与之前春夏季分离株比较已经有一定变异,出现了一些抗原漂移和在哺乳动物宿主内的适应性进化.     

介质表面的肠道病毒71型在不同气候条件下存活情况调查

目的 了解介质表面污染的肠道病毒71型(EV71)在不同温、湿度条件下的存活能力.方法 将滴度为1×105半数组织培养感染剂量(TCID50)的EV71株均匀滴加在灭菌的塑料、橡胶、木块和布片介质表面,置入不同温、湿度气候条件的人工气候箱中,一定时间后回收介质表面病毒,回收液接种Vero细胞,观察致细胞病变效应(CPE);每日监测不同气候条件下介质表面病毒存活情况.结果 病毒在4种介质表面回收率为89％～93％;暴露在不同温、湿度条件下介质表面的EV71存活时间不同,在20℃、湿度80％的气候条件下病毒存活时间最长;塑料表面的病毒滴度在24 h后下降lgTCID50值约为4,布片和木块表面的病毒滴度在72 h后下降lgTCID50值约为4.5,72h后至少下降lgTCID50值为3.89.结论 介质表面污染EV71存活时间受温、湿度气候条件影响,模拟的4种气候条件中,温度低、湿度高的条件病毒存活时间长;EV71在布片、木块表面的存活能力强于合成材质塑料表面.