HBV阳性血清体外感染HepG-2细胞方法建立

目的建立乙型肝炎病毒(HBV)阳性血清体外感染人肝癌细胞系HepG-2的方法。方法低温同步化处理HepG-2细胞后用高浓度HBV阳性血清与含有4%聚乙二醇的无血清伊格尔极限必需培养基(MEM)共孵育HepG-2细胞,设阴性对照组和空白对照组;18 h后加入含10%胎牛血清的MEM继续培养6 d,每隔24 h收集细胞和培养上清,荧光定量PCR检测HBV DNA,间接免疫荧光技术检测细胞内乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)。结果 HBV阳性血清感染组HepG-2细胞内和培养上清中在感染后第1 d可检测到HBV DNA,分别为(16.04±7.99)×103、(8.84±3.97)×103 copies/mL,细胞内DNA含量在第2 d达到(3.51±1.86)×105 copies/mL,然后逐渐下降,在第4 d降到检测下限以下,而培养上清中病毒DNA在检测的时间内逐渐升高,在第6天达到(8.41±5.34)×105 cop-ies/mL;间接免疫荧光检测感染组细胞膜和胞浆中均有HBsAg表达;传代培养感染细胞后,在第1代细胞培养上清和细胞内均可检测到HBV DNA(3.58×105、7.34×105 copies/mL),第2代培养上清中可检测到少量HBV DNA(2.89×103 copies/mL),但细胞内检测到HBV DNA低于检测下限(896 copies/mL),第3代细胞的上清和细胞内均未检测到HBV DNA。结论 HBV阳性血清在一定条件下可以感染HepG-2细胞,病毒能在细胞内进行短期复制。     

多重逆转录聚合酶链反应检测主要上呼吸道病毒

目的：建立用多重逆转录聚合酶链反应（mRT-PCR）检测甲1型、甲3型、乙型流感病毒以及呼吸道全胞病毒（RSV）A型、B型等主要上呼吸道病毒的方法，以快速检测上呼吸道感染主要病毒及对甲型、甲亚型、乙型流感病毒在上海地区人群感染、流行情况设计。方法：采用经MDCK细胞接种培养的甲3型、乙型流感病毒和Hep-2细胞接种培养的RSV A型、B型标准毒株病毒液，以及甲1型、甲3型、乙型流感病毒和RSV A型、B型混合毒株病毒液，使用5组引物，分别为HA1-5al和Hal-3al（甲1型流感病毒）、HA3-5al和HA3-3al和HA3-3al（甲3型流感病毒）、NP-5b1和NP-3bl（乙型流感病毒）、RSVAF和RSVAR(RSVA型)、RSVBF和RSVBR(RSVB型)，经mRT-PCR，琼脂糖凝胶电泳，于紫外灯下观察上述病毒特异核苷酸条带。结果：甲1型、甲3型、乙型流感病毒，RSVA型、B型分别在431，210，390，334，183bp处出现清晰的5条DNA条带。结论：应用5组引物，mRT-PCR可用于快速检测临床上呼吸道感染标本中的流感病毒和RSV，并可对其进行分型，对上呼吸道病毒感染性疾病的诊断和流感的监测方面是非常重要的。     

手足口病病原在自来水中的存活能力

目的 了解手足口病病毒在生活用自来水中存活情况.方法 2008年上海市及浙江省手足口病监测病例分离到的手足口病病毒中,选择5株肠道病毒(EV)71型、1株柯萨奇(Cox)病毒,分别混合含氯量1.0 mg/L的自来水;采用Vero细胞培养,细胞病变效应(CPE)观察,每日监测水中病毒存活情况.运用散点图分析水中病毒存活量下降趋势.结果 该6株手足口病病毒在初始含氯量1.0 ppm模拟出厂自来水中可以存活1个月以上,并持续有感染细胞能力,病毒株间活病毒存活能力有差别.结论 EV71型及Cox病毒在水中具有较强存活能力,手足口病流行期间,城市、农村及城乡结合部需要注意手足口病病原经水传播的途径.

Abstract：

Objective To evaluate the survivability of hand foot mouth disease(HFMD)virus,in tap water for daily use.Methods HFMD viruses were isolated from cases of HFMD in Shanghai and Zhejiang from in 2008.Six isolated strains (five subtype of enterovirus 71 and one coxackie virus)were selected in this study.These viruses were mixed with chloride 1.0 mg/L tap-water and then inoculated into Vero cells.The cytopathic effect (CPE)was checked everyday in order to survey the survivability of each virus strain.The decline of virus survivability was analyzed by scatter diagram.Results These six strains of HMFD virus could survive longer than one month in tap water with initial chloride concentration of 1.0 mg/L and still had celluar infectivity.The survivabilities were varied between viruses isolated from different HFMD cases.Conclusions The survivabilities of enterovirus 71 and coxackie virus stains are quite strong in water.Therefore,the transmission route of water-borne pathogens should be monitored in regions using tap water during HFMD epidemic period.     

甲型流感病毒分类与通用流感疫苗及广谱中和活性抗体的研究

流感是对人类危害极大的传染病,疫苗接种被认为是预防流感的最有效手段.为解决流感病毒变异导致现有疫卣时效性与有效性的问题,研制能够预防所有流感病毒毒株、可诱导持久保护性免疫的通用流感疫苗一直是流感研究的热点,同时,能中和所有甲型流感病毒的广谱中和活性抗体的研究也已成为目前关注的重点,因此对甲型流感病毒分类研究也提出了相应...     

二氧化氯对流感病毒的灭活作用

流感病毒是引起呼吸道感染的重要病毒,传播范围广,甚至可以造成大流行,而有关消毒剂对流感病毒杀灭作用的研究很少.如果二氧化氯能低浓度快速灭活流感病毒,则其在空气消毒中的应用前景将是十分广阔的.目前限于病毒喷雾和回收的困难,本实验采用试管法,即二氧化氯溶液直接和流感病毒作用后,观察其对病毒血凝素抗原的破坏作用,以及通过二氧化氯作用后的流感病毒经中和剂中和后,接种9～10天龄鸡胚尿囊腔培养,观察二氧化氯对流感病毒的灭活作用,然后测定增殖培养后尿囊液中流感病毒的血凝效价.     

上海地区2005年麻疹流行株基因特性分析

目的了解2005年上海部分地区麻疹暴发流行株的基因型别和特性,加强麻疹病毒学监测。方法采集暴发麻疹患者咽拭子标本分离病毒,通过RT-PCR扩增麻疹病毒N基因C末端450 bp核苷酸并进行序列测定,与GenBank中麻疹病毒各基因型参考株及国内其他地区的麻疹分离株进行基因比较。结果从10例麻疹患者的咽拭子标本中共分离麻疹病毒4株,均属H基因组H1基因型,型内变异0.7%-1.3%。与H1型代表株China93-7的基因同源性为98%-98.2%;与H2基因型代表株China94-1的基因差异为6.4%-6.9%。与A型代表株Edmonston的基因差异为6.7%- 6.9%;与中国麻疹疫苗株Shanghai191的基因差异为7.6%-8.0%,与国内其他地区麻疹流行株基因差异为0.2%-3.7%。结论2005年上海部分地区麻疹暴发是由H1基因型病毒引起,为中国本土流行株。     

上海市闵行区禽类接触人群甲型流感病毒抗体调查

甲型流感是由甲型流感病毒引起的人和动物共患的一种呼吸道传染病,传染性强,传播途径易实现,病原体常变异导致难以有效控制.甲型流感病毒有多种亚型,已证实有15种血凝素（H1～H15）和9种神经氨酸酶（N1～N9）.目前人群中流行主要为H1和H3型,其中H3型居多;而在禽类特别是水禽中各个亚型的血凝素均已被发现[1～3].1997年香港的H5N1、2003年底至2004年初亚洲地区H5N1以及1998年至1999年我国内地和香港H9N2禽流感病毒人间感染事件的发生,都昭示了人感染禽流感病毒的高度可能性.     

无锡地区流感病毒病原学监测及H3亚型血凝素基因变异研究

目的 监测无锡地区2005年至2008年季节性流感型与亚型分布并了解2008年部分A/H3N2分离株血凝素(8A)基因变异状况.方法 无锡地区医院门诊流感样患者及集体单位聚集性流感样暴发患者采集鼻咽拭标本,接种MDCK细胞,采用标准抗血清鉴定阳性分离株型与亚型,并对2008年部分H3亚型流感病毒进行HA全基因测序,分析HA基因变异状况.结果 2005年至2008年9月,在无锡地区流感样患者中共分离到435株流感病毒,其中164株为A/H1N1亚型,80株为MH3N2亚型,B型191株.型与亚型有明显季节性分布强弱特征.H3亚型HA序列分析,无锡地区9株分离株与上海地区同期分离株接近,有很多序列相互穿插归属于进化树的同一分支,与WHO 2008-2009年疫苗推荐株相近.结论 近年无锡地区散发和局部暴发流感病毒感染仍主要为A/H1N1、A/H3N2和B型,A/H3N2 HA基因与上海地区同期分离株接近,与WHO 2008-2009年疫苗推荐株相近.     

人乳腺癌雌激素受体依赖性的测定

正常乳腺的生长发育,受多肽类激素和甾体类激素的调节和控制。乳腺细胞癌变后,有的可以完全或部分丧失雌激素受体(E_2R),此时不再成为受激素控制的靶细胞,即所谓“自主型”或“非激素依赖性肿瘤”,但还有半数以上的乳腺癌可以保留数量不等的E_2R,仍受激素环境的     

上海市闵行区1998-2007年麻疹流行病学特征分析与控制策略探讨

目的 分析上海市闵行区1998-2007年麻疹流行病学特征变化规律,探讨麻疹控制策略,为加速控制麻疹提供科学依据.方法 根据上海市常规传染病报告系统和人口学资料,对1998-2007年麻疹疫情资料进行描述流行病学分析.从疑似患者的咽拭子样本分离病毒,分析其基因特性及抗原性.结果 麻疹年平均发病率为17.69/10万,主要是20岁以上成人和小于8月龄幼儿;发病季节高峰在3-5月,户籍人口麻疹流行无明显周期性,非户籍人口2～3年一个流行高峰.健康人群不同年龄组抗体水平差异有统计学意义(x2=86.06,P<0.01),抗体水平在20～30岁最低.从10例疑似患者咽拭子样本中分离到4株麻疹病毒株,与麻疹疫苗株S191分属于不同的基因型,抗原性有一定的差异.结论 麻疹流行特征已发生根本性改变,流行周期不明显,发病年龄呈双向移位,不典型症状增多.非户籍人口的发病特征更接近于自然感染,对全市麻疹流行病学特征产生了重要的影响.麻疹病毒株与疫苗株存在差异,因此监测地方性流行株的基因和抗原变化很有必要.现阶段应在对儿童保持高水平麻疹疫苗接种率的前提下,对特定人群开展麻疹疫苗强化免疫,采取针对性免疫策略和加强麻疹监测工作是减少麻疹发病的主要策略.