骨组织工程再血管化种子细胞来源:兔肾微血管内皮细胞体外培养及其细胞表型的研究

背景在骨组织工程研究中,面临从体外实验过渡到体内成骨时如何快速血管化的问题,尽早建立血运才能保留组织工程骨的成骨优势.在体外短时间内能大量扩增且纯度较高的细胞,才能成为组织工程化骨再血管化理想的种子细胞.目的探索肾微血管内皮细胞的体外培养方法,并对其进行鉴定和表型研究,拟为骨组织工程再血管化提供理想的种子细胞.设计单一样本研究.单位苏州大学附属儿童医院骨科,苏州大学生命科学院生物技术研究所.材料实验于2003-05/2004-04在苏州大学附属儿童医院骨科实验室完成.实验材料为CO2培养箱,M199,胎牛血清,Ⅳ型胶原酶,40 g/L多聚甲醛,20 g/L戊二醛,ECGF,鼠抗人第八因子单克隆抗体(抗FⅧ-RAg),多标记免疫分析系统(1 420,WALLAC BLCTOR2),离心机,倒置显微镜,免疫荧光显微镜等.方法采用三步梯度筛网法,先获得较高纯度的肾血管球,再应用肾血管球外植法体外培养肾微血管内皮细胞.进一步对肾微血管内皮细胞进行免疫组化法的Ⅷ因子相关抗原鉴定,用透射电镜观察细胞浆Weibel-Palade小体,以及采用间接免疫荧光法检测CD31,CD34及CD44表达.主要观察指标肾微血管内皮细胞形态、活性及表型.结果体外培养出纯度很高的血管内皮细胞并培养了11代.此外,免疫组化显示Ⅷ因子相关抗原阳性,电镜下观察到Weibel-Palade小体,以及间接免疫荧光检出CD31,CD34表达阳性,而CD44阴性.结论本实验方法可成功培养出肾微血管内皮细胞,且后者表达CD31,CD34细胞表型.     

颅骨钻孔闭式冲洗引流术治疗慢性硬膜下血肿68例体会

慢性硬膜下血肿(CSDH)是脑外科常见疾病,颅骨钻孔闭式冲洗引流术为治疗该病的首选方法.我科自2002～2008手术治疗68例取得良好效果,现总结如下.     

LC-MS/MS法测定大鼠血浆中芹黄春浓度及其在药代动力学研究中的应用

目的：研究大鼠分别灌胃和静脉给药芹黄春（芹菜素-7-O-β-D吡喃葡萄糖苷）溶液后,血浆中的芹黄春药物浓度及其药代动力学性质。方法6只雌性Sprague Dawley大鼠随机分为两组,每组3只,分别经灌胃(10 mg/kg)和静脉注射(2 mg/kg)给予芹黄春溶液后,按设计的时间点从大鼠眼内眦静脉丛采集血液样品,置于肝素化的离心管中,低温离心得血浆。采用甲醇沉淀法处理血浆生物样品,利用LC-MS/MS方法对血浆生物样品进行分析。药代动力学参数由Kinetica 2000软件进行计算。结果芹黄春浓度在1~2000 ng/mL范围内线性关系良好(r=0.9974),定量下限为1 ng/mL,低(8 ng/mL)、中(100 ng/mL)、高(1200 ng/mL)3个浓度的提取回收率均大于90%,日内日间精密度和稳定性的RSD均小于12.8%,日内日间准确度在91.5%~107%,方法学考察均符合要求。大鼠经静脉注射和灌胃芹黄春后,Cmax分别为(2363±96) ng/mL和(13.3±5.8) ng/mL,AUC0~∞分别为(796±201) h· ng/mL和(28.9±9.2) h· ng/mL,大鼠经静脉注射和后t1/2为(1.20±0.17) h,芹黄春的口服生物利用度约为0.6%。结论所建立的LC-MS/MS分析方法方便、快速,灵敏度高,准确度好,可用于大鼠血浆芹黄春浓度测定及其药代动力学的研究。     

“医药分开”政策对于临床医师服务行为的影响研究简

目的：了解“医药分开”政策对临床医师服务行为的影响。方法：以北京市试行“医药分开”政策的部分医院为研究现场,随机抽取800名临床医师进行问卷调查,分析该政策对临床医师服务行为的影响。结果：临床医师对“医药分开”政策的知晓率为99.5%;92.1%的临床医师更加重视规范诊疗;85.0%的临床医师提高了服务意识,服务更周到;86.8%的临床医师更加重视患者满意度。结论：试点医院临床医师对政策的知晓和掌握情况良好。大多数临床医师优化了服务行为,并对政策的进一步完善提出有益建议,如应加强宣传,正确舆论导向;提高医疗服务收费标准;提高医务人员待遇,建立完善激励机制和考核机制;提高医师积极性等。     

颅骨嗜酸性肉芽肿8例临床分析

骨骼系统的嗜酸性肉芽肿好发于颅骨,临床上较少见。我科自1990年1月～2007年8月共收治颅骨嗜酸性肉芽肿(SEG)8例。现报告如下。1临床资料1.1一般资料本组男6例,女2例;年龄2～16岁,平均9.6岁;病程1个月～2年,平均3个月。SEG发生于额骨5例,顶骨2例均为单发性,额骨及颞骨1例为多发     

糖尿病患者甲状腺自身抗体检验

目的 探讨糖尿病(DM)患者甲状腺自身抗体的共存性,研究1型糖尿病、2型糖尿病患者甲状腺自身抗体的发生率.方法 根据WHO的糖尿病的诊断标准,从我院就诊糖尿病患者中随机选择1型糖尿病患者40例,2型非肥胖型糖尿病患者48例,对照组37人.各实验组全部进行甲状腺自身抗体的筛选,检测TPOAb,TGAb.结果 1型糖尿病患者TGAb检出率21.9%,TPOAb检出率17.3%,TGAb及TPOAb双阳性7.2%;2型非肥胖型糖尿病患者TGAb检出率5.9%,TPOAb检出率7.1%;对照组检出率TGAb检出率4.5%,TPOAb检出率3.9%.无TGAb及TPOAb双阳性者.1型糖尿病患者TGAb和TPOAb的检出率显著高于2型非肥胖型糖尿病患者和正常对照.结论 研究结果 显示甲状腺自身抗体在1型糖尿病患者的发生率明显高于正常对照组(P＜0.05).2型非肥胖型糖尿病患者甲状腺自身抗体的发生率与正常对照组比较差异无显著性(P＞0.05).提示1型糖尿病患者进行甲状腺自身抗体的检测是必要的.     

膀胱小细胞癌(附2例报告及文献分析)

原发性膀胱小细胞癌（SCCB）在临床上非常罕见，其恶性度高，预后差。现将本院收治的2例报告如下。     

火绒草对动物变态反应性炎症的影响

火绒草提取物(ip50～100mg/kg)对动物逆转性Arthus反应,抗鼠血清兔血清引起的足肿胀、溶酶体所致的出血斑、毛细血管返透性以及羧甲基纤维索引起的白细胞移行均有明显的抑制作用。此作用并不依赖于肾上腺和溶酶体膜的完整存在。     

阴道分娩产后出血的分析

目的探讨阴道分娩产后心血的原因、预防及治疗.方法对3166例阴道分娩的产后出血量采用称重法及容量法测量,产后出血76例,占2.4%.结果阴道分娩的产后出血原因主要为宫缩乏力,且与产科合并症、孕产次、胎儿体重及第三产程相关,发生时间大多为产后2h内.结论阴道分娩的产后出血原因是多因素的,应综合预防及治疗.     

细胞复合型丝素支架材料修复兔桡骨骨缺损

目的 比较不同孔径的细胞复合型丝素支架材料体内成骨、修复兔桡骨骨缺损的治疗效果.方法 自新西兰大耳白兔股骨大结节和股骨髁处抽取骨髓,体外分离、培养、扩增兔骨髓问充质干细胞(rabbit bone marrow mesenchymal stem cells,RBMSCs),接种到3种不同孔径的丝素材料上,再移植于兔桡骨骨缺损处.根据丝素材料孔径设立实验A组[RBMSCs/SF(silk fibroin,SF)-Ⅰ]、实验B组(RBMSCs/SF-Ⅱ)、实验C组(RBMSCs/SF-Ⅲ).术后分别于2、4、8、12周大体观察、X线检查及组织形态学观察了解体内成骨、骨缺损修复及材料降解情况.另外设立二对照组,D组为缺损处仅植入丝素支架,E组为缺损处无植入物.结果 术后各组兔子均存活,无植入物毒性反应及排斥反应,材料体积不同程度降解减小,降解速度SF-Ⅰ＜SF-Ⅱ＜SF-Ⅲ.RBMSCs/SF-Ⅱ组比其他组在缺损种植处有更多的新骨形成,移植物的血管化任此B组也更好,缺损被较满意治愈.D、E二组修复骨缺损的效果明显差于细胞型丝素支架.结论 RBMSCs/SF-Ⅱ作为细胞复合型丝素支架材料表现最佳.细胞复合型丝素支架材料有望用于临床骨缺损的治疗.