河北汉族人群D17S30位点扩增片段长度多态性

探讨河北省汉族人群Ｄ１７Ｓ３０位点的基因频率分布，为法医的基因认定提供依据。方法用聚合酶链式反应对河北汉族人群２０１名无关个体Ｄ１７Ｓ３０位点进行扩增，扩增产物采取聚丙烯酰胺凝胶电泳及溴化乙锭染色，依据扩增片段长度确定各等位基因，分别使用ＰＯＭＳ软件和自编软件。     

逆转录-聚合酶链反应检测鼠肝炎病毒方法的建立

建立特异、灵敏的逆转录聚合酶链反应（RT－PCR）技术，结合碱性磷酸酶标记的探针杂交检测鼠肝炎病毒（MHV），采用MHV－3，MHV－A59病毒株感染DBT细胞，37℃培养，待细胞出现病变时收集提取病毒RNA。依据MHV基因序列设计一对高度保守区特异性引物，进行RT－PCR扩增，结果可见147bp的鼠肝炎病毒产物特异扩增带。敏感性实验检测到10pg的鼠肝炎病毒RNA，同时用ELISA方法对照。结果提示应用RT—PCR技术结合探针杂交检测鼠肝炎病毒。具有简便、快速、灵敏等优势。本研究在国内尚未见报道。     

中国汉族人群D3S1358和D16S310位点的遗传多态性研究

目的 调查中国河北省汉族人群D16S310和D3S1358位点基因频率分布及基因型分布，探究在法医学应用中的意义。方法 从河北省无血缘关系汉族个体的抗凝血中提取DNA，进行PCR扩增，变性聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳分型并银染。结果 两个位点各检出6个等位基因，其基因频率分布符合Hardy-Weinberg平衡，家系调查结果证实了等位基因的传递符合孟德尔遗传规律，D16S310和D3S1358两位点的杂合度、多态信息量分别为0.6688,0.6307和0.732,0.6812。两位点联合个人识别率为0.9112,累计非父排除率为0.7180。结论 这两个多态位点在中国汉族人群中具有较好的多态性，所得到的遗传学数据可用于中国河北汉族人群法医学个人识别和亲子鉴定及遗传学研究提供依据。     

小儿胸腺肥大猝死10例尸检报道

目的：探讨小儿胸腺肥大猝死的原因，方法：观察10例尸检变化，并与其他相关小儿死亡病例比较。结果：全部病例均有胸腺肥大，皆有病变，肺炎居首位。9例肺炎中8例属间质型，其次为心肌炎，多数病例炎症较轻，但淤血，水肿明显，5例肾上腺萎缩，结论：淤血，水肿是引起呼吸道梗阻，猝死的原因，另外胸腺肥大时，肾上腺皮质萎缩，功能不良，各种刺激均可成为微环境改变的契机，致使病情突变化。     

犬传染性肝炎病毒Hexon蛋白Loop1、Loop2基因的克隆与表达

腺病毒主要的中和抗原表位位于六邻体蛋白Loop1、Loop2上，目前的研究主要集中在人腺病毒，犬传染性肝炎病毒（即犬腺病毒Ⅰ型）尚未见报道。本次研究参考Genebank发表的基因序列设计引物，提取ICHV基因组DNA，分别PCR扩增六邻体蛋白（Hexon）的Loop1、Loop2基因片段，用T4酶连接在一起，克隆入原核表达载体pET28a中，测序显示本室保存病毒分离株Loop1与CLL株、RI261株和TorontoA26/61株核苷酸序列同源性分别为100%、100%和83.8%；Loop2与CLL株、RI261株和TorontoA26/61株核苷酸序列同源性分别为88.1%、88.1%和99.3%，推导的氨基酸序列同源性分别为93.6%、93.6%和98.6%。转化BL21工程菌，实现了重组Loop蛋白在大肠杆菌中的高效表达，分子质量约为36kDa，并且利用镍柱纯化重组蛋白，纯度达95%以上。用重组蛋白免疫BALB/c小鼠后，以间接ELISA法测定血清抗病毒抗体效价达1：320以上，western blot鉴定免疫血清与ICHV特异性结合。本实验为建立新的犬传染性肝炎病毒基因工程产品奠定了良好的基础。     

PCR方法检测实验动物皮肤病原真菌

目的对用于实验动物皮肤病原真菌检测的分子生物学方法即皮肤病原真菌通用引物PCR与AP-PCR（任意引物聚合酶链式反应）相结合技术的特异性及敏感性进行评价,并通过建立动物模型及实际的皮肤真菌检测来验证此方法的可行性。方法特异性测定：用皮肤病原真菌通用引物进行PCR,扩增大肠杆菌DNA、犬肝炎病毒DNA及小鼠肝癌H22细胞DNA。敏感性测定：以紫外分光光度法测定DNA质量浓度,根据测定值将DNA进行10倍系列质量浓度稀释,得到100 ng~10 fg的8个质量浓度,然后对其进行PCR扩增。建立实验动物皮肤病原真菌感染的动物模型。用皮肤病原真菌通用引物PCR与AP-PCR相结合技术检测从动物模型及河北省各地的实验动物单位采集的动物皮肤标本。结果用皮肤病原真菌通用引物扩增实验动物三种皮肤病原真菌标准菌株,均扩增出大小为440 bp的条带,而大肠杆菌、犬肝炎病毒、小鼠肝癌H22细胞均未扩增出条带。皮肤病原真菌通用引物PCR敏感性测定,模板DNA 100 ng~100 fg的7个系列浓度均扩增出了阳性条带,10 fg为阴性。建立了实验动物皮肤病原真菌感染的动物模型。对河北省各地的实验动物皮肤真菌检测过程中出现一例通用引物阳性标本。结论皮肤病原真菌通用引物（CHS1 1S,CHS1 1R）具有较强的特异性,敏感度为100 fg;将皮肤病原真菌通用引物PCR与AP-PCR技术相结合可用于检测实验动物皮肤病原真菌。     

实验动物四种病原体多重PCR方法的建立与应用

目的建立快速检测多杀巴氏杆菌、支气管鲍特杆菌、支原体和肺炎克雷伯杆菌4种实验动物病原体的多重PCR方法。方法根据Gen Bank基因设计出特异性引物;经过多重PCR的优化,特异性和敏感性的检测,建立多重PCR体系。应用该PCR体系检测人工感染样本和实验动物的气管分泌物,并与传统方法做对比。结果多重PCR扩增出多杀巴氏杆菌(356 bp)、支气管鲍特杆菌(237 bp)、支原体(266 bp)和肺炎克雷伯杆菌(142 bp)的目的条带。肺炎克雷伯杆菌敏感性为10 pg,多杀巴氏杆菌、支气管鲍特杆菌、支原体敏感性为1 pg,特异性检测未从其他病原菌中检测出目的条带。应用建立的多重PCR体系检测人工感染样本的不同组合,45只实验动物气管检测出15只多杀巴氏杆菌阳性,9只肺支原体阳性,但传统培养方法和血清学方法未检测出阳性标本。结论本文建立的多重PCR方法操作简单、快速、特异性强、灵敏度高,能够实现对多杀巴氏杆菌、支气管鲍特杆菌、支原体和肺炎克雷伯杆菌4种实验动物病原体的快速检测。     

河北汉族人群D2S1328基因座的遗传多态性研究

基因组DNA多态性的研究,对人类进化和群体遗传提供了更为科学和可靠的依据。短串联重复序列（short tandem repeat,STR)属微卫星DNA序列,重复单位2－7bp。STR位点在人类基因组中含量丰富,它是绘制基因组物理图谱和遗传连锁分析的理想标记。近年来,随着STR－PCR技术的进一步发展,解决了微量检材的分析问题,扩展了DNA分析在遗传学、人类学以及在法医学领域的应用。作者从正常健康人血液中提取DNA,采用聚合酶链反应（polymerase chain reaction,PCR）技术和聚丙烯酰胺凝胶电泳技术,并结合银染的方法,对中国河北省181名汉族无关个体进行了调查,首次获得了D2S1328基因座群体遗传数据,结果报告如下。     

河北汉族人群D3S1358基因座的遗传多态性研究

短串联重复力 (ｓｈｏｒｔｔａｎｄｅｍｒｅｐｅａｔ,ＳＴＲ)是近年来迅速发展起来的一种新的ＤＮＡ标记系统 ,是一类简单的短序列核苷酸串联重复 ,具有丰富的多态性。由于其多态信息含量高 ,分析操作方法简单 ,现已广泛应用于遗传病的连锁分析和物理图谱的描绘 ,同时也得到医学界及法医学界广泛重视。关于Ｄ3Ｓ135 8位点国外学者已有报道 ,但中国大陆遗传学数据尚少见报道。为了解大陆人群Ｄ3Ｓ135 8基因座的遗传多态性 ,采用聚合酶链反应 (ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ ,ＰＣＲ)技术和聚丙烯酰胺凝胶电泳技术 ,并结合…     

甲型血友病的基因诊断研究

目的 建立甲型血友病的基因诊断方法.方法 对33例甲型血友病患者以一期法检测血浆凝血因子FⅧ(F8)活性.采用长距离聚合酶链式反应扩增法(LD-PCR)进行FⅧ内含子22倒位检测,并对反应体系进行优化;聚合酶链式反应(PCR)技术检测内含子1倒位,凝胶成像技术分析扩增产物.捕获测序技术检测是否存在其他突变类型.结果 33例患者的FⅧ活性检测结果均小于1%,为重型;LD-PCR技术检测出13例患者存在Int22倒位,倒位发生率为39.4%;Int1倒位患者1人,发生率3%;对13例内含子 22倒位患者进行测序比对,未发现其他基因突变.结论 LD-PCR技术和多重PCR技术可以有效的检测重型甲型血友病FⅧ的基因倒位.