木香、川木香、土木香、青木香和红木香药材的ITS2条形码分子鉴定

通过分析木香、川木香、土木香、青木香、红木香药材的ITS2（internal transcribed spacer 2）条形码序列,探讨木香类药材鉴定新方法。对60份样品提取基因组DNA,PCR扩增ITS2序列并进行双向测序,所得序列经CodonCode Aligner拼接后,采用 MEGA5.0 软件进行序列比对,计算种内和种间遗传距离（K2P）,构建邻接树（neighbor-joing tree,NJ Tree）。结果表明,无论是菊科的木香、川木香、土木香,还是马兜铃科的青木香和五味子科的红木香,ITS2序列种内变异均小于种间变异,ITS2序列所有单倍型比对后长度为272 bp,变异位点达到162个;遗传距离显示物种种内平均K2P远远小于种间平均K2P;NJ树结果显示木香、川木香、土木香、青木香和红木香药材可明显区分,且能鉴别川木香的2个基原物种。因此,ITS2序列可用于鉴定木香、川木香、土木香、青木香、红木香药材,为临床安全用药提供依据。     

中药金钱草及其混淆品的ITS2序列分析与鉴别

目的 通过对常用中药金钱草及其混淆品进行分子鉴定,以确保该药材的质量及其安全用药.方法 采用多聚酶链式反应(PCR)技术,获得内转录第二间隔区(ITS2)基因片段,进行双向测序,运用CodonCode Aligner、MEGA等软件进行序列拼接和分析,构建系统进化树(NJ树).此外,应用Koetschan 等建立的IT...     

半夏不同生长发育时期总生物碱含量动态变化的研究

半夏Pinellia ternata(Thunb·)Breit·为天南星科多年生草本植物,以块茎入药。其所含总生物碱是主要药用成分。以往对半夏的研究多在栽培、临床疗效等方面,从单株产量(块茎产量)和总生物碱含量动态分析相结合的角度进行研究尚属首次,在其他药用植物研究中也鲜有报道。本研究主要探讨半夏总生物碱的动态变化规律,为最佳采收期的制定、品质评价和对策、田间生产管理等方面提供参考。1材料和仪器四川南充栽培半夏P·Ternata。盐酸....     

药用植物羌活种子DNA条形码鉴定研究

基于ITS2条形码对药用植物羌活种子进行分子鉴定,以确保基原正确。该研究对药用植物羌活种子进行形态特征比较,每份样品进行3次随机取样,对每次取样的单粒种子提取基因组DNA,PCR扩增,双向测序并拼接获得ITS2序列。通过遗传距离法、建树法,并结合中药材DNA条形码鉴定系统(www.tcmbarcode.cn)进行基原鉴定。结果显示,羌活与宽叶羌活种子形态特征相似,难以明显区分。经分子鉴定,27份种子样品有24份样品为2010年版《中国药典》规定的羌活正品基原种子,包括13份羌活种子,11份宽叶羌活种子,另外3份样品不属于羌活基原植物种子。研究证明,DNA条形码技术可以准确鉴别羌活种子基原,为中药材种质资源鉴定提供了新方法,对中药材种子质量标准的建立提供依据。     

基于COI条形码序列的珍珠母及其混伪品的DNA分子鉴定

目的：探讨应用COI条形码序列对珍珠母及其混伪品进行物种鉴定的可行性。方法：用MEGA4．0等软件计算珍珠母及其混伪品种内及种问变异,构建珍珠母及其混伪品的NJ树。结果：珍珠母种内COI序列变异小,种问存在较多的变异位点,种问的遗传距离显著大于种内的遗传距离。通过构建的系统聚类树图可以看出,珍珠母不同来源个体均聚在一起,能够与其混伪品区分开。结论：基于COI序列的DNA条形码技术可以很好的鉴定珍珠母的正品来源及其混伪品。     

细茎石斛叶绿体全基因组序列特征及系统发育分析

细茎石斛是药用石斛的重要来源,也是正品枫斗的主要来源之一。本研究利用Illumina高通量测序技术对细茎石斛叶绿体全基因组进行测序,完成了其物理图谱绘制和基因组结构特征解析,并与近缘物种进行了比较和系统发育分析。细茎石斛叶绿体基因组全长为150 754 bp,两个反向互补重复区(IRs)长25 906 bp,大单拷贝区(LSC)和小单拷贝区(SSC)长度分别为84 818 bp和14 124 bp。共注释到123个基因,包括77个蛋白编码基因、38个tRNA基因和8个rRNA基因,其中17个基因含有内含子。生物信息学分析获得53个SSR位点,大多数位点具有A-T碱基偏好性。采用33条石斛属植物的叶绿体基因组序列构建系统发育树,结果显示细茎石斛复合种中的物种聚在同一个大支,说明其亲缘关系较近。本研究为细茎石斛的鉴定、细茎石斛复合种系统发育关系及其本草基因组学研究提供理论基础。     

基于整合证据链的白鲜皮粉末致肝损伤病例实验研究

针对白鲜皮可能导致肝损伤的问题,该文对1例典型的单独服食白鲜皮粉末导致肝损伤病例进行临床和实验室系统研究。按照《中草药相关肝损伤临床诊疗指南》推荐的整合证据链方法对该病例进行诊断研究。通过临床病史、生化学和影像学等检查,排除基础疾病以及病毒性、自身免疫性、酒精性等易混淆肝病对诊断的影响;通过服药史调查,排除其他药物对诊断的影响,该患者仅服食1种药物,怀疑该患者为"白鲜皮粉末"导致药物性肝损伤。进一步按照《中国药典》对患者服食药物进行质量检查,符合白鲜皮项下规定;采用DNA条形码鉴定,ITS2序列BLAST比对,与植物白鲜Dictamnus dasycarpus相似度为100%;检测外源性有害物质,重金属、农残、微生物毒素均未超过相关标准的规定;采用液相高分辨质谱联用仪及Agilent Fake TCM-Drugs数据库检查,未发现化学药物添加。综上,确定该病例为单独服用白鲜皮粉末(15 g/日,超过药典规定用量)导致药物性肝损伤。该文按照《中草药相关肝损伤临床诊疗指南》,从临床到实验室系统检查,确认了1例单独服食白鲜皮粉末致药物性肝损伤的典型病例,为后续研究白鲜皮及其相关制剂的肝损伤风险提供了直接和可靠证据。     

中药材锁阳的ITS2条形码分子鉴定研究

目的：应用DNA条形码技术准确、快速鉴定中药材锁阳及其混伪品。方法：采用试剂盒法提取药材的基因组DNA,PCR扩增其核糖体DNA的内转录间隔区（internal transcribed spacer 2,ITS2）并进行双向测序,应用CodonCode Aligner V 3.7.1对测序峰图进行校对拼接,比较ITS2序列的GC含量,采用MEGA 5.0计算种内、种间 Kimura 2-parameter（K2P）遗传距离,通过中药材DNA条形码鉴定系统比对和构建NJ 系统聚类树进行鉴定分析。结果：锁阳药材的ITS2序列长度为229 bp,种内变异较小,平均K2P遗传距离为0.003,锁阳药材及其混伪品的种间平均K2P遗传距离为0.760,种间最小K2P遗传距离明显大于锁阳种内的最大K2P遗传距离。中药材DNA条形码鉴定系统比对和NJ树鉴定结果均表明ITS2 序列可区分锁阳及其混伪品。结论：ITS2条形码可有效鉴定中药材锁阳及其混伪品,且具有较好的稳定性和准确性,为保障临床安全用药提供了新的技术手段。     

甘草酸合成生物学元件初探：甘草法呢基焦磷酸合酶基因的克隆及序列分析＊

甘草酸是中药甘草的主要有效成分,法呢基焦磷酸合酶（FPS）是甘草酸合成途径中关键酶之一。根据甘草转录组数据设计引物,对FPS基因进行克隆,获得甘草FPS基因的全长编码序列。甘草FPS基因编码区全长1029 bp,编码342个氨基酸残基。将甘草FPS基因与GenBank中其他植物FPS基因序列进行比对分析,发现其核酸序列与鹰嘴豆、苜蓿、蒺藜苜蓿、大豆、百脉根的序列相似度最高,分别达到94%、94%、93%、93%、92%。进一步的系统进化分析表明FPS基因具有较高的保守性,其序列进化树与植物分类一致。     

羌活药材ITS/ITS2条形码鉴定及其稳定性与准确性研究

为验证DNA条形码鉴定的稳定性与准确性,本文选用羌活药材作为研究对象,对31份样本提取基因组DNA,通过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增内部转录间隔区(internal transcribed spacer,ITS)序列并进行双向测序,所得序列经CodonCode Aligner拼接后,采用MEGA5.0软件与其混伪品进行序列比对,计算种内和种间距离,构建邻接树(neighbor-joining tree,NJ Tree)。ITS2序列采用基于隐马尔可夫模型(hidden Markov model,HMMer)的注释方法获得。结果表明,羌活药材ITS序列长度为603～604 bp,ITS2序列长度均为228 bp,羌活药材ITS/ITS2序列单倍型与其基原植物叶片序列一致。两种基原植物ITS/ITS2序列种内平均kimura 2-parameter(K2P)遗传距离均远远小于其与混伪品的种间平均K2P遗传距离;NJ树结果显示羌活、宽叶羌活与其混伪品均可明显区分,表现出良好单系性。因此ITS/ITS2序列作为DNA条形码能稳定、准确鉴别羌活药材,为保障临床安全用药提供了新的技术手段。