大鼠Akt1基因真核表达载体构建及其在293细胞中的表达

背景:Akt在细胞存活、细胞增殖、细胞代谢和细胞凋亡等活动中扮演着重要角色.虽然Akt的作用机制目前尚有很多的未知领域,但其作为生存信号的一个重要组件,已成为近年分子生物研究中的一个重要课题.目的:构建Akt1基因真核表达载体pDC316-Akt1,观察其在293细胞(人胚肾母细胞)中的表达.设计、时间及地点:观察性实验,于2006-09/12在解放军军事医学科学院分子生物实验室完成.材料:pDC316质粒,由本元正阳公司提供;DH5 α、293细胞为自备.方法:采用反转录-聚合酶链反应方法自大鼠肝组织总RNA中克隆AktlDNA片段,测序鉴定正确后,插入真核表达载体pDC316的EcoR Ⅰ、Hind m的酶切位点,构建Akt1真核表达载体Akt-pDC316,脂质体介导法转染293细胞.主要观察指标:蛋白免疫印迹检测转染293细胞中Akt1的表达.结果:经测序鉴定,构建的Akt1氨基酸序列与野生型Akt1序列完全相符.将Akt-pDC316转入293细胞,蛋白免疫印迹检测可见相对分子质量55 000位置有Akt1的表达.结论:构建Akt1基因真核表达载体在293细胞中可以充分的表达.     

3D自组装肽纳米纤维支架对胰岛细胞分泌功能的影响

背景：3D自组装肽纳米纤维支架能很好模拟体内微环境,给予细胞必要的结构模式,促进细胞外基质的正确组成及细胞的生长,改善细胞功能。 目的：体外观察3D自组装肽纳米纤维水凝胶支架对胰岛细胞分泌功能的影响。 方法：将3D自组装肽纳米纤维水凝胶支架与成年大鼠胰岛细胞共培养,AO-PI荧光染色法检测胰岛细胞的活性及生存率;放射免疫法测定胰岛细胞的分泌功能;扫描电镜观察胰岛细胞包裹在3D纳米支架中成三维立体的生长状态。 结果与结论：在3D纳米支架培养环境中胰岛细胞纯度≥80%;3D纳米支架组胰岛生存率及胰岛细胞分泌功能明显高于无支架组(2D培养组)(P < 0.05);扫描电镜显示自组装肽纳米纤维支架形成了具有几何形状的纳米级薄层,将胰岛细胞包裹在3D纳米支架中,胰岛细胞成三维立体生长。表明3D自组装肽纳米纤维支架可为胰岛细胞体外生存提供3D培养环境,改善胰岛细胞的活性、分泌功能及形态,延长胰岛细胞体外生存期。     

晚期结直肠癌术中使用铜绿假单胞杆菌制剂的生存期观察

背景与目的 研究晚期结直肠癌术中腹腔局部注射铜绿假单胞菌注射液对患者1年生存率和中位生存期的影响.方法 随机收入2006年9月到2008年3月期间晚期结直肠癌病例的83例,其中治疗组30例(姑息手术加术中局部注射铜绿假单胞菌注射液10IIll),对照组s3例(仅姑息手术治疗).结果 治疗组中位生存期为ls个月,而对照组为12.5个月;治疗组1年生存率略优于对照组(7l％vs 57％),表现出有效的趋势.结论 晚期结直肠癌术中腹腔局部注射铜绿假单胞菌注射液,这种治疗方法可能在短期内具有一定的生存优势,而对长期生存的影响还需进一步确认.     

完全腹腔镜与腔镜辅助根治性全胃切除术的短期疗效对比

目的 比较3D腹腔镜下完全腹腔镜根治性全胃切除术(TLTG)与腔镜辅助根治性全胃切除术(LATG)治疗食管胃结合部癌的短期疗效.方法 回顾性分析上海市东方医院胃肠外科2017年1月至2020年9月间116例食管胃结合部癌行3D腹腔镜下根治性全胃切除术的临床资料,分为全腔镜组及腔镜辅助组,通过1:1倾向性评分配对进行匹配...     

大鼠甲状旁腺细胞经培养后再移植的实验研究

目的　研究大鼠甲状旁腺细胞经培养后再移植对其存活的影响。方法　将经胶原酶和胰蛋白酶消化的甲状旁腺细胞培养后再行移植 ,观察移植物的存活情况 ,并对移植物做透射电镜观察。结果　新鲜甲状旁腺移植组平均存活期为 (9.2 5± 3.4 5 )d ;甲状旁腺细胞培养后移植 ,移植物的存活时间为 (46 .2 5± 7.4 4 )d ,明显延长(P<0 .0 1) ,在 5 0d观察期内 ,8只鼠中有 6只的血清钙及PTH值持续在正常范围内。移植物内可见完整的甲状旁腺细胞 ,其内见丰富的粗面内质网、杆状的线粒体及分泌颗粒。结论　大鼠甲状旁腺细胞经培养后再移植可以延长移植物的存活时间 ,是治疗甲状旁腺功能低下症的一条有效途径。     

乌司他丁对犬胰岛的保护作用

目的判定在机械分离纯化犬胰岛过程中,胰腺原位灌洗时应用乌司他丁(UTI)的保护作用,观察胰岛的获取产量。方法将20只犬随机分为两组,每组10只。HC-A组:胰腺经腹主动脉原位灌洗时用冷HC-A液2500ml;HC-A UTI组:胰腺原位灌洗时,HC-A液中加用UTI10000U/kg。两组均经主胰管用4℃胶原酶V控压灌注,在RicordiChamber系统中消化,用Ficoll连续梯度离心纯化。记录消化时间、胰岛外分泌腺包裹率、胰岛纯度、纯化后胰岛在体外用低糖与高糖刺激下胰岛素分泌量、C-肽的释放量及收获的胰岛当量(IEQ),并对纯化后的胰岛进行光镜及电镜观察。结果HC-A UTI组与HC-A组在胰腺消化时间、胰岛外分泌腺包裹率、胰岛纯度、纯化后的胰岛在体外经低糖与高糖刺激下胰岛素分泌量、C-肽的释放量以及胰岛的形态和结构上比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。HC-A组收获胰岛[(3.42±1.47)×104]IEQ,HC-A UTI组收获胰岛[(6.17±2.86)×104]IEQ,两组差异有统计学意义(P<0.05)。结论在犬胰岛分离和纯化过程中,胰腺获取原位灌洗液中加用UTI能保护胰腺组织,增加胰岛产量。     

一种提高犬胰岛体外培养质量的方法

目的研究提高犬胰岛体外培养质量的方法。方法将犬胰岛分别进行普通培养 (A组)、常温(37℃)微重力培养(B组)和低温(26℃)微重力培养(C组),分别培养3、7、14和21 d, 并检测各组胰岛培养后收获率、存活率和功能。结果不同方法培养21 d后,B组和C组平均胰岛收获率为(66．2±4．1)％和(81．3±4．8)％高于A组的胰岛收获率(50．5±2．9)％,P<0．05。A组胰岛存活率降至(27．7±3．5)％,与B组的(49．7±3．2)％和C组的(64．8±4．7)％比较,P<0．05。 B组和C组DNA含量及胰岛素含量均维持较高的水平,B组和C组胰岛素储备能力较A组高,胰岛索刺激指数分别为(3．30±0．70)、(5．48±1．00)和(2．33±0．50),差异有统计学意义(P< 0．05)。结论低温微重力三维培养胰岛是提高胰岛培养质量的好方法。     

胚胎干细胞转基因治疗甲状旁腺功能低下症

目的　探讨小鼠胚胎干细胞 (TC 1)转基因治疗甲状旁腺功能低下症 (HPT)。方法包装出重组人甲状旁腺素 (PTH )基因的小鼠干细胞病毒 (MSCV) ,以lml重组病毒液加入 poly brene(终浓度 8mg/L)感染TC 1细胞 ,检测基因转导效率 ,PTH分泌情况 ;以及每 1× 10 5个 /mlTC 1细胞注入模型鼠体内各组小鼠血PTH和血钙变化情况。结果　获得滴度为 2× 10 7集落形成单位 (CFU) /ml的重组逆转录病毒 ,其感染TC 1的效率为 70 % ,每 10 6 未分化TC 1每 48h分泌PTH10ng。重组有PTH基因的TC 1细胞注入模型鼠体内后 ,在观察期间实验组动物血PTH和血钙均保持在接近正常值范围内。结论　MSCV介导外源PTH基因可高效转导TC 1并持续分泌PTH ;内环境并不是决定TC 1分化的唯一因素。经基因转导的TC 1可较好的改善模型鼠的症状 ,是未来细胞移植的一种潜在来源。     

不同时期胃癌中p16基因缺失和突变的研究

目的　探讨p16基因纯和缺失和突变与胃癌发生的关系。方法　采用PCR、多重PCR、PCR SSCP和DNA测序技术分析 5 0例胃癌组织中p16基因的表达情况 ,其中早期胃癌 7例 ,进展期胃癌 43例。结果　p16基因总的点突变频率为 8.0 0 % (4 5 0 ) ,早期胃癌为 14 .2 9% (1 7) ,进展期胃癌为 6.98% (3 4 3 ) ,两者比较差异无显著性意义 (P>0 .0 5 ) ;p16基因突变与肿瘤的大小、位置、分化程度和有无淋巴结转移无关 (P>0 .0 5 )。p16基因总的纯和缺失频率为 16.0 0 % (8 5 0 ) ,早期胃癌为 0 (0 7) ,进展期胃癌为 18.60 % (8 4 3 ) ,两者比较差异有显著性意义 (P<0 .0 5 ) ;p16基因缺失频率与肿瘤分化程度和有无淋巴结转移有关 (P<0 .0 5 )。结论　p16基因点突变是胃癌发生的早期事件 ,对胃癌早期诊断有一定帮助 ;p16基因纯和缺失是胃癌的晚期事件 ,可能与胃癌的转移和复发有关。     

网膜囊内自体脾组织移植的临床观察

3年来,我们采用1cm~3去包膜小脾块移植于网膜囊内的方法,对21例脾外伤脾破裂患者进行脾切除自体脾组织移植手术。术后不同时期作免疫球蛋白(IgG、IgA、IgM),补体C_3、淋巴细胞转化卒、中性粒细胞吞噬功能试验,同位素铟(~(111)In)扫描等项检查。结果说明移植之脾组织存活良好,并较早地恢复了部分脾脏功能。从而证明了我们的移植方法安全可行且效果较佳。这对预防凶险的脾切除术后感染(OPSI)有一定的临床意义。