G蛋白偶联受体激酶活性调控与细胞炎性损伤

G蛋白偶联受体激酶 (Gprotein coupledreceptorki nases,GRKs)不仅调节G蛋白偶联受体 (GPCR)磷酸化、介导受体脱敏 ,使信号效应降低或消失 ,而且也调节G蛋白和靶细胞骨架 ,同时它还受到蛋白激酶A(PKA)、蛋白激酶C(PKC)、肌动蛋白和细胞内第二信使钙离子等调节。组织细胞表面存在多种GPCR如血小板活化因子 (PAF)受体、组胺受体、凝血酶受体等 ,介导炎性介质所致细胞损伤的信号转导作用。GRKs磷酸化GPCR ,在炎症诱导细胞损伤过程中起一定调控作用     

蛋白激酶Cδ亚型抑制剂对脂多糖诱导肺微血管内皮细胞损伤的影响

目的研究蛋白激酶C(PKC)的亚型PKCδ在大鼠肺微血管内皮细胞(RPMVEC)中的表达及其抑制剂Rottlerin对脂多糖(LPS)导致RPMVEC单层通透性增高的影响。方法取体外培养的RPMVEC进行PKCδ的W estern b lot和免疫组化检测,用针头式滤器检测LPS及LPS+Rottlerin干预后RPMVEC单层滤过系数(K f)的变化。结果PKCδ在RPMVEC中有广泛的表达,其表达部位主要位于胞质。Rot-tlerin能减低LPS导致的RPMVEC单层通透性增高。结论LPS导致RPMVEC损伤的机制与PKC的激活有关,PKCδ亚型抑制剂可减轻LPS诱导的RPMVEC单层通透性增高。     

内毒素对体外培养大鼠肺微血管内皮细胞血管紧张素转换酶2表达的影响

目的 观察内毒素对大鼠肺微血管内皮细胞(RPMVEC)上血管紧张素转换酶2(ACE2)表达的影响,探讨ACE2参与内毒素性急性肺损伤(ALI)发生的机制.方法 体外培养Wistar大鼠RPMVEC,以10 mg/L的内毒素与之共同孵育;分别于实验3、6、12和24 h用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质免疫印迹法(Western blotting)检测ACE2的mRNA和蛋白表达.结果 10 mg/L内毒素处理RPMVEC后3 h,ACE2的mRNA和蛋白表达即显著下降,6 h有所回升,之后显著下降并持续至24 h;统计学分析显示,除6 h外,余各时间点ACE2 mRNA和蛋白表达均显著低于未用内毒素处理对照组(P<0.05或P<0.01).结论 10 mg/L内毒素可下调RPMVEC 中ACE2的mRNA和蛋白表达水平,可能是ALI发生机制之一.     

急性肺损伤大鼠多核白细胞与肺组织β受体变化的相关性研究

目的:观察急性肺损伤(ALI)大鼠循环血多核白细胞(PMN)和肺组织β肾上腺素能受体(β-AR)的变化,并探讨二者β-AR变化的相关性.方法:静注内毒素复制大鼠ALI模型,循环血PMN及肺组织β-AR用放射性配基结合分析法测定.结果:静注内毒素后1、4、6h,大鼠循环血PMN及肺组织β-AR的最大结合容量(Bmax)均明显低于对照组(P＜0.01);静注内毒素后4h,6h较1h及6h较4hPMNβ-AR的Bmax均显著降低(P＜0.05),肺组织β-AR Bmax各内毒素组间差异不明显(P＞0.05);循环血PMN和肺组织β-AR变化在程度上无相关性(P＞0.05).结论:ALI时循环血PMN及肺组织β-AR数目均明显减少,其在ALI发生发展中可能起一定的作用,但ALI时外周血PMN β-AR不能作为观察肺组织β-AR变化的相关指标.     

TNF-α对大鼠肺微血管内皮细胞SSeCKS表达的影响及甲强龙的干预作用

目的研究肿瘤坏死因子-α（TNF-α）对培养大鼠肺微血管内皮细胞（PMVEC）中Src抑制的蛋白激酶C底物（SSeCKS）表达的影响及甲基强的松龙（甲强龙）对TNF-α所致大鼠PMVEC单层通透性损伤和SSeCKS表达的干预作用,探讨SSeCKS是否具有调控PMVEC单层通透性的作用。方法根据TNF-α刺激时间与浓度的差异,将培养的大鼠PMVEC随机分为TNF-α时间刺激组与浓度刺激组,前组以5000U/ml的TNF-α分别与PMVEC作用0.5、1.5、3、6、12h;后组分别以200、1000、5000U/ml的TNF-α与PMVEC作用3h。药物干预：分别以5000U/ml的TNF-α和0.2mg/ml的甲强龙＋5000U/ml的TNF-α与PMVEC作用1.5h。以正常PMVECSSeCKS的表达作为对照,运用RT-PCR法及Western-blot法检测SSeCKSmRNA及蛋白的表达变化。用针头式滤器检测TNF-α（5000U/ml）组及甲强龙（0.2mg/ml）＋TNF-α（5000U/ml）组作用1.5h后大鼠PMVEC单层通透系数（Kf）,以正常PMVEC单层通透性作对照。结果正常情况下大鼠PMVEC呈低表达SSeCKS。5000U/ml的TNF-α作用PMVEC后,SSeCKSmRNA及蛋白的表达自0.5h开始增高,3h达到高峰,随后渐行性下降但维持较高表达水平至12h,以上各时间点mRNA及蛋白的表达均明显高于正常对照组。200、1000、5000U/ml的TNF-α作用PMVEC后,SSeCKSmRNA及蛋白的表达依次递增,均明显高于正常对照组。甲强龙＋TNF-α组SSeCKS的蛋白表达明显低于TNF-α组,而甲强龙＋TNF-α组PMVEC单层通透系数（Kf）也明显低于TNF-α组。结论 TNF-α以时间及浓度依赖的方式上调大鼠PMVEC中SSeCKS的mRNA及蛋白表达。甲强龙在抑制TNF-α所致大鼠PMVEC单层通透性增加的同时,降低SSeCKS蛋白高表达水平。提示SSeCKS参与TNF-α诱导大鼠PMVEC单层通透性损伤,可能具有调控PMVEC单层通透性的作用。     

过氧化氢诱导肺微血管内皮损伤的实验研究

目的　探讨H2 O2 诱导培养肺微血管内皮细胞损伤的机制。方法　观察H2 O2 对大鼠肺微血管内皮细胞 (RP MVEC)的形态、单层通透性、F 肌动蛋白和 β AR的影响。结果　H2 O2 浓度大于 1mmol·L-1作用 48h内观察到细胞脱落和破裂。 10mmol·L-1H2 O2 90min内可使RPMVEC单层通透性增高、F 肌动蛋白发生明显解聚和 β AR显著下调 ;FOR、山莨菪碱和CTX可抑制上述变化。结论　H2 O2引起的RPMVEC脱落与破裂呈浓度和时间依赖性。H2 O2引起RPMVEC单层通透性增高的机制与F 肌动蛋白解聚密切相关 ;β AR参与内皮通透性调节。FOR、山莨菪碱和CTX对H2 O2 引起RPMVEC单层通透性增高有一定的保护作用。     

炎性损伤对肺微血管内皮细胞β-受体的影响

用放射性配基结合分析法 ,测定 β 肾上腺素能受体 ( β AR)在大鼠肺微血管内皮细胞 (RPMVEC)的分布情况 ,并观察炎性损伤对它的影响。结果表明 ,β AR的最大结合容量Bmax为 ( 5 .5 83± 0 .30 6 )fmol/1 0 5 细胞 ,Kd值为 ( 0 .2 7± 0 .0 3)nmol/L ;LPS、TNF和H2 O2 作用后 ,β AR的Bmax均较正常对照组显著降低 (P <0 .0 5～ 0 .0 1 )。提示 :RPMVEC胞膜存在高亲和力的 β AR ;LPS、TNF和H2 O2 可引起 β AR的显著下调。     

脂多糖诱导肺微血管内皮细胞SSeCKS mRNA表达的研究

目的 研究脂多糖(LPS)对体外培养大鼠肺微血管内皮细胞(PMVEC)中Src抑制的蛋白激酶C底物(SSeCKS)mRNA表达的影响,以及甲泼尼龙对其的干预作用.方法 体外培养大鼠PMVEC,根据与LPS孵育时间和LPS剂量不同随机分组,并用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测PMVEC中SSeCKS mRNA的表达变化.结果 正常情况下,PMVEC中SSeCKS mRNA低表达.LPS在体外可诱导SSeCKS mRNA的表达明显增高,表达水平变化与LPS呈剂量和时间依赖关系:LPS孵育1 h后,PMVEC中SSeCKS mRNA的表达量随LPS剂量增加而逐渐增高(正常对照组为0.263±0.033;LPS 0.1 mg/L时为0.529±0.066,1 mg/L时为1.391±0.048,10 mg/L时为2.339±0.055,100 mg/L时为2.861±0.069),组间比较差异有统计学意义(F=639.096,P＜0.05);10 mg/L的LPS与PMVEC共用孵育,0.5 h SSeCKS mRNA表达开始增高,1 h时达峰值,之后逐渐降低,12 h表达仍高于正常水平(正常对照组为0.301±0.022;LPS 0.5 h为1.617±0.018,1 h为2.378±0.031,3 h为2.148±0.056,6 h为1.322±0.042,12 h为0.772±0.044),组间比较差异有统计学意义(F=726.346,P＜0.05).甲泼尼龙干预后可显著抑制LPS诱导的SSeCKS mRNA表达增高(2.664±0.104比1.759±0.151,F=156.000,P＜0.05).结论 ①LPS可诱导大鼠PMVEC中SSeCKS mRNA表达上调,并呈剂量和时间的依赖关系,提示SSeCKS与LPS诱导的大鼠PMVEC损伤有关.②甲泼尼龙参与可抑制LPS诱导的SSeCKS mRNA表达增高.     

全身炎症反应综合征在急性肺损伤中的价值

探讨全身关正反应综合征（SRS）在急性肺损伤（ALI）中的临床价值。结果表明．SIRS对于ALI和ARDS的诊断具有高度敏感度，但特异性差；SIRS的严重程度与ALI和ARDS的死亡率及多器官功能障碍综合征（MODS）的发生率密切相关。     

血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂对大鼠内毒素性急性肺损伤的保护作用

目的 研究血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）受体拮抗剂对大鼠内毒素性急性肺损伤（ALI）的保护作用。方法 取Wistar大鼠印只,雌雄不拘,随机分为三组：（1）正常对照组（10只）,给予大鼠静注等量生理盐水;（2）大肠肝菌脂多糖（LPS）组,分为3、6、12和24h四个观察组（每组均10只）,分别给大鼠注射LPS（10mg／kg）,间隔不同的时间后将大鼠放血活杀,取肺组织待测;（3）LPS＋AngⅡ受体拮抗剂组（10只）,先给予大鼠静注AngⅡ受体拮抗剂[Sar^1,Ile^8]AngⅡ（20μg/kg）处理,然后观察6h,放血活杀后取肺组织待测。分别以肺湿／干重比、伊文思蓝法测定肺微血管通透性和肺组织病理变化,观察LPS对大鼠肺组织的急性损伤作用以及AngⅡ受体拮抗剂对该损伤作用的影响。结果 与对照组比较,LPS组各时相点大鼠肺组织W／D值显著升高（P〈0．01）,致大鼠肺血管中伊文思蓝染料向组织中渗漏显著增多（P〈0．01）,LPS组出现炎性细胞浸润、水肿等损伤表现,总病理评分达（12．00±2．45）分;LPS＋AngⅡ受体拮抗剂组大鼠肺组织湿／干重比、肺微血管蛋白渗出量和组织形态学变化均较LPS组显著好转。结论 AngⅡ受体拮抗剂对大鼠内毒素性ALI有保护作用。