血浆Dickkopf-1在类风湿关节炎患者中的表达及其与外周血T细胞亚群的相关性

目的: 检测类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者血浆Dickkopf-1(DKK-1)水平,并分析其与外周血T细胞亚群、临床指标之间的相关性。方法: 采用酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测32例RA患者及20例健康对照者的血浆DKK-1的水平,并记录RA患者的各项临床表现和实验室指标。流式细胞仪检测RA患者外周血T细胞亚群(包括Treg、nTreg、aTreg、sTreg、Teff、Tfh、CD4⁺CD161⁺T、CD8⁺T、CD8⁺CD161⁺T细胞)。比较两组血浆DKK-1的水平,并分析其与外周血T细胞亚群、临床指标的相关性。结果: (1)RA患者血浆DKK-1浓度为(124.97±64.98) ng/L,健康对照组血浆DKK-1浓度为(84.95±13.74) ng/L,RA患者血浆DKK-1水平显著高于健康对照组(P<0.05),RA患者外周血CD8⁺CD161⁺T细胞百分比显著高于健康对照组(P<0.05)。(2)血浆DKK-1水平与红细胞沉降率(r=0.406,P=0.021)、DAS28评分(r=0.372,P=0.036)、免疫球蛋白G(r=0.362,P=0.042)、免疫球蛋白A(r=0.377,P=0.033)呈正相关;与年龄、病程、C-反应蛋白、类风湿因子、抗环瓜氨酸肽抗体、免疫球蛋白M、补体C3、补体C4、白细胞计数、中性粒细胞百分比无相关性。(3)RA患者血浆DKK-1水平与外周血CD8⁺CD161⁺T细胞百分比呈正相关(r=0.413,P=0.019);与Treg、nTreg、aTreg、sTreg、Teff、Tfh、CD4⁺CD161⁺T、CD8⁺T细胞无相关性。(4)外周血CD161⁺CD8⁺T细胞百分比与红细胞沉降率(r=-0.415,P=0.004)、C-反应蛋白(r=-0.393,P=0.007)、DAS28评分(r=-0.392,P=0.007)、类风湿因子(r=-0.535,P<0.001)、抗环瓜氨酸肽抗体(r=-0.589,P<0.001)、免疫球蛋白G(r=-0.368,P=0.012)、免疫球蛋白M(r=-0.311,P=0.035)呈负相关;与年龄、病程、免疫球蛋白A、补体C3、补体C4、白细胞计数、中性粒细胞百分比无相关性。结论: RA患者血浆DKK-1水平和外周血T细胞亚群中的CD8⁺CD161⁺T细胞百分比均升高,可能与患者体内促炎细胞因子的分泌有关;DKK-1参与骨稳态的调节,可用作RA骨破坏的标志物。     

抗瓜氨酸化纤维蛋白原β67-77肽抗体在类风湿关节炎诊断中的意义

目的 检测类风湿关节炎(RA)患者血清抗纤维蛋白原(FIB) β67-77肽(FIB β67-77)及抗瓜氨酸化纤维蛋白原(C-FIB) β67-77肽(C-FIB β67-77)抗体水平,评价IgG、IgA、IgM型抗C-FIB β67-77抗体在RA诊断中的价值.方法 酶联免疫吸附法(ELISA)检测227例RA患者、188例疾病对照和100名健康对照组血清抗C-FIB β67-77抗体的水平,分析其在RA诊断中的意义.结果 (1)RA患者IgG、IgA、IgM型抗C-FIB β67-77抗体滴度均值(分别为104.8、69.6和78.2)均高于其他对照组(P＜0.01).而各组血清中抗FIB β67-77抗体的滴度差异无统计学意义.(2)抗C-FIBβ67-77抗体IgG型、IgA型和IgM型在RA中诊断的敏感性分别为50.7％、48.5％和55.1％;特异性分别为94.8％、92.7％和92.4％.联合检测3个亚型敏感性为87.7％,特异性可达78.5％.(3)抗C-FIB β67-77抗体IgG型、IgM型和IgA型在IgM-RF阴性患者中的阳性率分别是52.9％、39.2％和54.9％;抗角蛋白抗体(AKA)、抗核周因子(APF)和抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体3种抗体均阴性的患者中阳性率分别为48.5％、53.1％和37.5％.结论 抗C-FIBβ67-77抗体在RA诊断中具有较好的敏感性和特异性,尤其对IgM-RF、AKA、APF及抗CCP抗体阴性RA的诊断具有参考意义.     

凝集素样受体巨噬细胞诱导性C型凝集素样受体在类风湿关节炎患者巨噬/树突状细胞中表达及其临床意义

目的 研究巨噬细胞诱导性C型凝集素样受体(MINCLE)在健康者、类风湿关节炎(RA)和骨关节炎患者外周血及关节滑液中的表达特征,探讨其与RA发病的相关性.方法 ①采用实时定量聚合酶链反应(PCR)方法在mRNA水平检测RA患者(253例)及健康人(71名)外周血单个核细胞(PBMC)中MINCLE的表达;②采用流式细胞术在蛋白水平检测RA患者(18例)、骨关节炎患者(5例)及健康人(12名)外周血及关节滑液巨噬细胞、髓样树突状细胞(mDC)和浆细胞样树突状细胞(pDC)中MINCLE的表达;采用Mann-Whitney U检验或配对t检验统计分析MINCLE在健康者、骨关节炎患者和RA患者外周血及关节滑液之间的表达差异.结果 ①在mRNA水平,外周血PBMC中RA患者的MINCLE表达达高于健康对照组[(1.65±0.36)和(0.37±0.06),U=6057,P=2.75×10-5];②在蛋白水平,健康人及骨关节炎患者外周血巨噬细胞、mDC及pDC中未见MINCLE的表达;在骨关节炎关节滑液中,MINCLE仅低水平表达于mDC[(7.5±2.9)%]中,而MINCLE在RA患者关节滑液mDC中呈高表达[(34.8±4.4)%,U=0,P=2.6×10-3];MINCLE在RA患者的滑液巨噬细胞及mDC的表达均明显高于其在相对应的外周血中的水平[巨噬细胞(2.01±0.53)%和(0.27±0.51)%,t=4.879.P=2.23×10-6;mDC为(34.8±4.4)%和(21.7±5.5)%,t=2.535,P=0.017].结论 MINCLE的表达特征具有RA组织特异性,MINCLE很可能为RA发病的一个重要标记物.

Abstract：

Objective To determine the expression pattern of macrophage-inducible c-type lectin (MINCLE)on Macrophage(Mφ),myeloid dendritic cell (mDC)and plasmacytoid DC(pDC)in peripheral blood (PB)and synovial fluid(SF)in patients with rheumatoid arthritis (RA).Methods For mRNA expression of MINCLE,253 RA patients and 71 healthy control subjects were enrolled.The mRNA level of MINCLE was determined by real-time PCR.For protein expression of MINCLE,18 patients with RA,5 patients with osteoarthritis(OA)and 12 healthy control subjects were enrolled.The expression of MINCLE on Mφ,mDC and pDC were detected by flow cytometry.The differences of MINCLE expressions in PB between RA patients,OA patients and healthy controls,or differences between PB and SF in RA patients were analyzed using Mann-Whitney U test or paired-samples t test.Results ①Compared to the healthy controls,RA patients showed elevated mRNA expression level of MINCLE in PBMCs[(1.65±0.36)vs (0.37±0.06),U=6057,P=2.75×10-5].②At protein level,MINCLE was hardly detected in Mφ,mDC and pDC in PB of OA patients and healthy controls.In SF,MINCLE was highiy expressed on mDC in RA patients,compared with that in OA patients[(34.8±4.4)%,U=0,P=2.6×10-3].In RA patients,the expression level of MINCLE was remarkably elevated in Mφ,mDC and pDC in SF compared with that in PB[Mφ(2.01±0.53)%vs(0.273±0.51)%,t=4.879,P=2.23×10-6;mDC(34.8±4.4)%vs(22.7±5.5)%t=2.535.P=0.017].Conclusion MINCLE is selectively expressed on Mφ.mDC and pDC in SF in RA patients.MINCLE may serve as a potential important marker,or even target,for RA and possibly even for inflammation in general.     

非动脉粥样硬化性冠状动脉病变的临床特点及2a随访

目的探讨非动脉粥样硬化性冠状动脉病变的临床特点及其2 a随访结果。方法回顾性总结967例18～45岁有冠状动脉病变的患者,从中最终筛选出24例非动脉粥样硬化的患者进行临床分析。结果 (1)24例(2.48%)患者男女之比为7∶5,平均年龄(41.62±2.68)岁。(2)女性与男性相比,起病至首诊时间长(男性首诊时间中位数为0.25个月,女性为7.50个月,P<0.05),初发心绞痛的发生率低(男性为42.86%,女性为0.00%,P<0.05),心肌梗死及节段性室壁运动异常发生率低(男性为50.00%,女性为10.00%,P<0.05),左心室舒张末期内径(LVEDD)小[男性为(51.83±7.51)mm,女性为(44.90±4.58)mm,P<0.05]。(3)18～40岁与41～45岁2个年龄段比较,病情特点相同。在41～45岁患者中,男性患者心肌梗死发生率高(男性为50.00%,女性为0.00%,P<0.05)、LVEDD扩大[男性为(51.56±5.05)mm,女性为(46.14±4.30)mm,P<0.05]。(4)冠状动脉病变以单支病变为主,其中左前降支病变占全部病例的50.00%。(5)24例患者行经皮冠状动脉介入治疗后均获得临床缓解。住院期间及2 a随访均无主要心血管不良事件发生。(6)3例患者在2 a随访中接受了风湿性疾病的筛查,其中2例诊断为系统性血管炎且病变处于稳定期。结论非动脉粥样硬化性冠状动脉病变在临床上并不罕见,多数在40岁左右发病。与传统冠状动脉粥样硬化性心脏病(简称冠心病)相比,女性患者相对比例提高;女性起病较隐匿,病情相对较轻;病情轻重与患者年龄无关;冠状动脉病变以单支病变为主。按照常规冠心病行药物、经皮冠状动脉介入治疗后短期疗效好。推测部分患者病因可能为系统性血管炎所致。对于怀疑有冠状动脉病变的中青年女性,建议排除非动脉粥样硬化性病变。     

原发性干燥综合征合并肺间质病变患者血清特异性标志物的筛选

目的：用纳米磁珠与基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）技术检测原发性干燥综合征(primary Sjgren’s syndrome, pSS)合并肺间质病变(interstitial lung disease, ILD)患者血清蛋白质组,筛选候选蛋白标志物并建立诊断模型,初步探讨所建立的诊断模型在pSS-ILD诊断中的临床意义。方法：采用弱阳离子（WCX）纳米磁性微球捕获69例pSS患者血清中的蛋白质,所获蛋白质经PBSⅡ-C蛋白质芯片阅读仪绘制蛋白指纹图谱,经Ciphergen ProteinChip和Biomarker Wizard 软件分析之后,再用Biomarker Patterns 软件识别,最终筛选出pSS-ILD的特异性蛋白标志物,并优化组合建立诊断模型。结果：在pSS-ILD患者和对照组之间共找到7个差异蛋白峰（P<0.05）,其中质荷比（m/z）为3 778.3、3 318.3和2 236.6的3个蛋白峰用于建立pSS-ILD诊断模型,该模型对pSS-ILD诊断的敏感性为93.1%,特异性为87.5%。经双盲实验验证,该模型对pSS-ILD诊断的敏感性为84%,特异性为85.7%。结论：应用WCX纳米磁性微球联合MALDI-TOF-MS技术可检出pSS-ILD患者血清中的特异性蛋白标志物,并建立敏感性和特异性均较好的pSS-ILD诊断模型。     

不同亚型的滤泡辅助性T淋巴细胞在类风湿关节炎中的临床意义

目的：检测类风湿关节炎（rheumatoid arthritis, RA）患者外周血中滤泡辅助性T（T follicular helper, Tfh）淋巴细胞亚型以及效应型滤泡辅助性T（T follicular helper effector memory, Tfhem）细胞的表达,并探讨二者作为活动性RA患者血液标志物的价值。方法： 流式细胞术分别检测41例RA患者和32例健康受试者的外周血中Tfh（CD3+CD4+CXCR5+CD45RA-）细胞亚型 Tfh1（CXCR3+CCR6-Tfh）、Tfh2（CXCR3-CCR6-Tfh）、Tfh17（CXCR3-CCR6+Tfh）和Tfhem （CD4+CXCR5+CCR7lowPD-1high）的水平。收集入组RA患者的临床资料及实验室指标,分析上述细胞亚型表达水平与RA疾病活动和实验室指标的相关性,酶联免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbent, ELISA）检测相关血清细胞因子。结果： RA患者外周血中Tfhem细胞的表达率明显高于正常对照组（12.8%±5.7% vs. 8.7%±2.0%, P=0.001）。Tfhem细胞表达水平与RA患者疾病活动指数（disease activity score in 28 joints, DAS28）及红细胞沉降率（erythrocyte sedimentation rate, ESR）存在显著相关性（r(DAS28)=0.205, r(ESR)=0.141,P<0.05）,与抗角蛋白抗体（anti-keratin antibody,AKA）、抗核周因子（anti-perinuclear factor, APF）及IgM型类风湿因子（immunoglobulin M rheumatoid factors,IgM-RF）、IgA、IgM及IgG等临床指标则无明显相关性。Tfh2表达水平在RA组显著高于正常对照组（3.002%±0.408% vs. 1.730%± 0.160%, P=0.013）。Tfh2-high组RA患者的IgA［（3.045±0.261）g/L vs.（3.963±0.815） g/L,P=0.172］、IgG［（13.800±0.862）g/L vs.（16.980±0.224） g/L,P=0.161］和IgM［（1.135±0.083）g/L vs.（1.731±0.380） g/L,P=0.140］高于Tfh2 low组,但差异尚无统计学意义（P>0.05）。与Tfh低表达组相比,Tfh2高表达组血清中IL-4［（2.322±0.214）ng/L vs. （3.994±0.751） ng/L, P=0.056］和IL 10［（1.898±0.105） ng/L vs. （3.125±0.880） ng/L, P=0.140］升高,差异无统计学意义（P>0.05）。结论： Tfhem细胞的表达与RA患者病情活动有关,可能在RA的发病过程中有预警作用,并可能成为将来治疗RA的靶细胞;Tfh2及其相关细胞因子在RA患者中明显增加,可能参与了RA的发生和发展。     

女性类风湿关节炎患者中人乳头状瘤病毒-16的感染

类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种以慢性侵蚀性关节病变为主的全身性自身免疫性疾病,以女性多发,男女患者比例约为1∶3,病理表现为滑膜炎并出现关节的软骨和骨破坏,最终可导致关节畸形与功能丧失,严重影响着患者的生活质量。目前类风湿关节炎的发病机制尚未明了,许