重组人IL-10在毕赤酵母X-33及SMD1168中表达效率的比较

目的研究重组人IL-10（rhIL-10）在两株毕赤酵母X-33和SMD1168的表达水平,为rhIL-10的表达选择合适的表达菌株。方法以0.5%甲醇分别诱导毕赤酵母X-33和SMD1168表达rhIL-10,用SDS-PAGE和WesternBlot分析和鉴定rhIL-10,用ELISA法测定培养液rhIL-10含量,用Bradford法测定培养液总蛋白含量并计算rhIL-10占总蛋白的比例。比较同等培养条件下两株酵母表达rhIL-10和总蛋白的水平。结果 SDS-PAGE和Western Blot均检测到42kD左右的蛋白条带;rhIL-10在X-33中的表达量平均达20.00mg/L,在SMD1168中的表达量平均达1.90mg/L,在两株不同酵母中的表达量有显著性差异（P〈0.05）;同时段的X-33培养液中总蛋白质含量平均为50.00mg/L,rhIL-10占总蛋白的40.00%;SMD1168培养液中总蛋白质含量平均为48.23mg/L,rhIL-10占总蛋白的4.00%。结论 rhIL-10在不同的毕赤酵母表达效率有差异,X-33较1168更适于rhIL-10的表达。     

不同培养基条件来源空肠弯曲菌外膜蛋白纯化及其表达差异

目的探讨不同培养基培养条件下空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni,CJ)Mr28000～31000外膜蛋白的纯化方案及表达差异。方法分别采用改良布氏血琼脂培养基(以下简称Bull’s)、改良卵黄培养基(以下简称Yolk)培养CJ,比较两者的生长特征。制备CJ全菌抗血清。0.2mol/L、pH2.2甘氨酸-HCl缓冲液抽取CJ外膜蛋白,Sephadex G-75层析法纯化其中的Mr28000～31000蛋白。SDS-PAGE技术检测Mr28000～31000外膜蛋白表达情况和含量差异,Western-blotting检测该类蛋白的抗原性。结果卵黄培养基培养的细菌生长更典型,SephadexG-75层析能够稳定可靠地纯化CJ细菌Mr28000～31000外膜蛋白,卵黄培养基培养来源的CJ的Mr28000～31000表达量占酸提取物的70%,大于改良布氏血琼脂培养基培养来源的表达量48%,两种培养基来源的CJ的Mr28000～31000蛋白成分均与CJ全菌兔抗血清发生免疫反应。结论不同培养基来源CJ的Mr28000～31000外膜蛋白均能被SphadexG-75分子筛纯化,该类蛋白能够在改良卵黄培养...     

ING4基因对人胃癌细胞SGC-7901生物行为的影响

目的：研究人ING4对人胃癌细胞SGC-7901的影响，探讨其作用机制。方法：将重组腺病毒质粒pAd-ING4用PacI线性化，经脂质体转染QBI-293A细胞，获得重组病毒Ad-ING4。Ad-ING4感染人SGC-7901细胞，RT-PCR及Westernblot分析ING4和p21表达，MTT法检测Ad-ING4对细胞生长的影响，激光共聚焦显微镜检测细胞凋亡。结果：Ad-ING4感染后，SGC-7901细胞中有ING4 mRNA和蛋白质表达，细胞生长受到明显抑制，与野生型SGC-7901细胞相比，p21表达水平增高，细胞凋亡率明显增高，P〈0．05。结论：ING4可通过上调p21表达发挥抑制SGC-7901细胞生长、诱导细胞凋亡的作用。     

空肠弯曲菌外膜蛋白亚单位脂质体佐剂疫苗的免疫原性研究

目的 初步探讨自制的空肠弯曲菌（campylobacter jejuni）亚单位（M,28 000-31 000外膜蛋白）脂质体佐剂疫苗的免疫原性,为该疫苗的临床前研究打下基础。方法 用双向免疫琼脂扩散试验、试管凝集试验、ELISA（间接法）分别检测经GJ疫苗免疫后的新西兰兔血清IgG抗体效价。结果 GJ阴离子组与GJ阳离子组比较,血清IgG A值显著增高（P〈0．01）,与GJ弗氏组无统计学差别（P〉0．1）;CJ阴、阳离子组脂质体疫苗接种剂量在0．50mg／kg时,血清IgGA值最大;CJ阳离子皮下注射组与肌肉注射组IgGA值无统计学差别（P〉0．1）;特异性IgG抗体经6个月动态观察,5个月后抗体效价下降。结论 实验组全程免疫后均有特异性抗体产生;同一剂量的阴离子脂质体疫苗比阳离子脂质体疫苗血清抗体水平显著增高;脂质体疫苗最佳接种剂量为0．50mg／kg,肌肉注射与皮下注射免疫效果无显著差异;特异性抗体高水平维持5、6个月后应加强免疫。     

重组hIL-10在毕赤酵母X-33的表达及其生物活性鉴定

目的:用毕赤酵母表达hIL-10并探索合适的表达条件,为IL-10生物制品研发及临床应用奠定基础。方法:以0.5%甲醇诱导酵母X-33表达rhIL-10,用SDS-PAGE和Western blot分析鉴定rhIL-10,比较不同温度、不同pH值和有无PMSF条件下rhIL-10的表达水平。用ELISA法测定培养液rhIL-10含量,用Bradford法测定培养液总蛋白含量,计算rhIL-10占总蛋白的比例。以淋巴细胞转化试验分析rhIL-10的生物学活性。结果:SDS-PAGE后可见42 kD左右蛋白条带;Western blot也检测到42kD左右特异性蛋白质条带。pH值为6.0、温度在28℃并加入抑制剂时rhIL-10表达量最高值为20 mg/L,同时段培养液中总蛋白质含量为50 mg/L,rhIL-10占总蛋白比例为40%。在外周血淋巴细胞转化试验中,rhIL-10抑制了淋巴细胞的增殖。结论:hIL-10能在毕赤酵母高效表达,表达产物有较好生物活性;发酵条件对rhIL-10的表达水平影响大,改善发酵条件能促进rhIL-10的表达。     

TCR β链CDR3谱序与疾病研究概况及进展

近年来,T细胞受体（TCR）互补决定区（CDR）和机体的生理、病理关系研究取得了较大的进展,尤其是在超抗原作用的感染性疾病、自身免疫性疾病、肿瘤等疾病状态下,TCRB链CDR3谱型能很好地反映T细胞的功能,通过TCRβ链CDR3谱型来研究克隆性和寡克隆性增生T细胞,可了解T细胞免疫与疾病发生发展的关系,指导疾病的诊断及免疫治疗,同时可了解正常情况下T细胞的发生和发展情况。     

医学研究生学位论文的答辩目的与策略

研究生论文答辩是检验医学研究生学位论文质量和培养质量的一种重要形式。根据近年来我国医学研究生在答辩中出现的问题,作者对研究生答辩的目的、答辩原则以及答辩中的问答技巧进行了初浅的探讨。     

腺病毒介导的IL-24增强紫杉醇对A549肺腺癌细胞生长的抑制作用

目的探讨腺病毒介导的白细胞介素24(Ad-IL-24)联合紫杉醇对体外培养的人肺腺癌A549细胞生长的影响。方法用Ad-IL-24、紫杉醇、Ad-IL-24联合紫杉醇处理A549细胞,以CCK-8法测定细胞生长抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡和周期的变化。结果 Ad-IL-24可明显抑制人肺腺癌A549细胞生长并诱导细胞凋亡,与紫杉醇联合处理后,其抑制肺癌细胞生长及诱导细胞凋亡作用明显优于单用紫杉醇组及Ad-IL-24组,并引起G2/M期阻滞。结论 Ad-IL-24感染肺癌A549细胞可增强紫杉醇对肿瘤细胞生长的抑制作用。     

人白细胞介素31基因克隆及在大肠杆菌中的表达

人白细胞介素31(IL-31)是近年在”NatureImmunology”杂志上报道的新细胞因子,为一具有4个螺旋结构的单链分子,主要由激活的T细胞产生,基因定位于12q24.31,大小为904bp,开放阅读框495bp,编码一条由164个氨基酸残基组成的多肽链,成熟的IL-31分子含有141个氨基酸。生理状态下,IL-