MNW基质液及MNW对免疫细胞功能的影响

目的 以海洋动植物为原料制备了ＭＮＷ基质液,研究ＭＮＷ基质液与ＭＮＷ对免疫细胞功能的影响,方法 以ＭＮＷ基质液和ＭＮＷ分别灌胃ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠和ＮＬＨ小鼠,观察小鼠巨噬细胞的吞噬率,吞噬指数,以ＭＮＷ基质液诱导Ｔ细胞,以＾１２５Ｉ－ＵｄＲ掺入法观察ＭＮＷ基质液对人外周血Ｔ细胞增殖的影响。以及ＭＮＷ对小鼠ＮＫ细胞活性的影响。结果 ＭＮＷ基质液能增强ＢＡＬＢ／Ｃ和ＮＬＨ小鼠吞噬率和吞指数,ＭＮＷ中,高     

空肠弯曲菌28KD～31KD外膜蛋白的初步提取及鉴定

目的：探讨空肠弯曲菌28KD-31KD外膜蛋白的提取方法及其鉴定。方法：采用改良布氏肉汤培养基培养空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni，CJ)，用0．2mol／L、pH2．2甘氨酸-HCl缓冲液提取CJ外膜蛋白，Sephadex G-75分子筛层析法纯化28KD-31KD分子，SDS—PAGE分子量鉴定，Western blotting印迹法鉴定CJ甘氨酸提取物中外膜蛋白及纯化的28KD-31KD分子抗原性。结果：以甘氨酸提取CJ的外膜蛋白，Sephadex G-75层析纯化能够提取出CJ 28KD-31KD外膜蛋白，该蛋白分子能够与CJ兔抗血清发生特异性反应。结论：采用甘氨酸提取、Sephadex G-75纯化CJ 28KD-31KD外膜蛋白系一种稳定可靠的分离层析方法，提取的CJ28KD-31KD外膜蛋白具有良好的抗原性，为特异性的CJ 28KD-31KD外膜蛋白的多克隆抗体制备、CJ感染的血清学特异性诊断、CJ亚单位疫苗的研制打下基础。     

空肠弯曲菌外膜蛋白亚单位疫苗的研制及免疫原性研究

目的 探索用脂质体包裹空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni,CJ)Mr 28 000～31 000外膜蛋白制备安全、稳定、有效的CJ亚单位脂质体佐剂疫苗及其免疫原性、免疫剂量和途径.方法 采用薄膜-超声-冻融法制备阴离子脂质体(AL)、阳离子脂质体(CL)CJ疫苗后对其进行质量鉴定;用ELISA(间接法)检测经CJ疫苗免疫后的新西兰兔血清IgG抗体水平.结果 ①疫苗无菌试验及热原质试验均合格,均无明显不良反应;②阴、阳离子脂质体疫苗冻融前包裹率分别为32.1%、22.5%,冻融后分别是38.3%、28.4%;③CJ阴离子组比CJ阳离子组血清IgG的OD值显著增高(P<0.01),与CJ弗氏组无统计学差别(P0.1);CJ阴、阳离子组0.50 mg/kg的免疫剂量血清IgG的OD值最大;CJ阳离子皮下注射组与肌肉注射组IgG的OD值无统计学差别(P0.1);特异性IgG抗体经6个月动态观察,5个月后抗体效价下降.结论 ①采用薄膜-超声-冻融法制备CJ亚单位佐剂疫苗安全、稳定,冻融法可以提高脂质体疫苗包裹率;②同一剂量的阴离子脂质体疫苗血清抗体水平明显高于阳离子脂质体疫苗;③脂质体疫苗最佳接种剂量为0.50 mg/kg,肌肉注射与皮下注射免疫效果无显著差异;④较高水平的特异性抗体维持5个月,6个月后应加强免疫.     

HLA-G研究进展及与肿瘤的相关性

HLA-G属于非经典的HLA-Ⅰ类分子，特异性表达于母胎界面，对于维持人类正常妊娠有重要作用。在肿瘤细胞的异位表达，引起肿瘤细胞逃避宿主免疫监视日益受到重视。本就HLA-G基因结构、多态性、分布、免疫功能等方面的最新研究进展及与肿瘤的相关性作一综述。     

人IL-31的克隆表达及对表皮角化细胞的影响

目的克隆人IL-31基因,构建真核表达载体,研究人IL-31对表皮角化细胞HaCaT的影响及其作用机制。方法PMA、PHA刺激正常人外周血单个核细胞,提取细胞总RNA,采用RT-PCR克隆人IL-31基因,并将其克隆到真核表达载体pcDNA3.1/myc-His（-）A,进行PCR和双酶切鉴定,并进行序列测定。将重组质粒转染CHO细胞,用RT-PCR和Western blot分析rhIL-31在CHO细胞中的表达。用Ni^2＋树脂纯化his融合蛋白,用不同剂量rhIL-31刺激HaCaT细胞,利用Transwell穿孔板检测HaCaT细胞培养上清对外周血单个核细胞的趋化作用,荧光定量PCR检测rhIL-31对HaCaT表达趋化因子的影响,Western blot检测STAT3磷酸化。结果成功获得全长人IL-31基因,测序正确,经双酶切、PCR和序列测定鉴定,真核表达质粒构建正确,可在CHO细胞中表达;该目的蛋白刺激人表皮角化细胞HaCaT,细胞培养上清对外周血单个核细胞有趋化作用,HaCaT细胞表达趋化因子MDC、TARC、I-309;细胞STAT3磷酸化增加。结论IL-31作用于正常人表皮角化细胞,细胞培养上清对外周血单个核细胞有趋化作用,HaCaT细胞趋化因子表达增加,细胞STAT3磷酸化增加,提示IL-31可通过STAT3发挥作用。     

霍乱毒素粘膜免疫佐剂的研究进展

霍乱毒素 (CT)具有很强的粘膜免疫佐剂活性 ,是当今研究得最多且最深入的粘膜佐剂之一 ,但 CT的粘膜免疫佐剂效应机理尚未完全弄清。本文主要就 CT的粘膜免疫佐剂作用及效应机制进行综述 ,为粘膜疫苗的研制打下一定基础。     

空肠弯曲菌28-31 ku外膜蛋白的免疫原性

目的:探讨空肠弯曲菌28-31 ku外膜蛋白的免疫原性. 方法:将BALB/c小鼠分为正常对照组和不同剂量抗原的免疫组,正常对照组不予抗原免疫,而免疫组采用28- 31 ku蛋白(纯)或甘氨酸提取的外膜蛋白(粗),分别加用或不加用完全弗氏佐剂(F),采用sc,在0,1,2,3, 4 wk免疫,于末次免疫后10 d,用双向免疫琼脂扩散试验测定各免疫组抗血清效价,待效价达到1:4至1:16 时.分别采集各免疫组及对照组小鼠的血清、空肠及回肠内的肠液,用间接ELISA法检测各组标本的特异性抗体IgA,IgG. 结果:不同剂量的抗原sc免疫BALB/c小鼠后,免疫组血清及肠液中特异性IgA,IgG抗体水平较正常对照组及实验对照组显著升高(P<0.05). 结论:空肠弯曲菌的28-31 ku外膜蛋白是一种良好的免疫原,能够诱导BALB/c小鼠产生特异性抗体,可能成为空肠弯曲菌亚单位疫苗候选的重要组分.     

不同培养基条件来源空肠弯曲菌外膜蛋白纯化及其表达差异

目的探讨不同培养基培养条件下空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni,CJ)Mr28000～31000外膜蛋白的纯化方案及表达差异。方法分别采用改良布氏血琼脂培养基(以下简称Bull’s)、改良卵黄培养基(以下简称Yolk)培养CJ,比较两者的生长特征。制备CJ全菌抗血清。0.2mol/L、pH2.2甘氨酸-HCl缓冲液抽取CJ外膜蛋白,Sephadex G-75层析法纯化其中的Mr28000～31000蛋白。SDS-PAGE技术检测Mr28000～31000外膜蛋白表达情况和含量差异,Western-blotting检测该类蛋白的抗原性。结果卵黄培养基培养的细菌生长更典型,SephadexG-75层析能够稳定可靠地纯化CJ细菌Mr28000～31000外膜蛋白,卵黄培养基培养来源的CJ的Mr28000～31000表达量占酸提取物的70%,大于改良布氏血琼脂培养基培养来源的表达量48%,两种培养基来源的CJ的Mr28000～31000蛋白成分均与CJ全菌兔抗血清发生免疫反应。结论不同培养基来源CJ的Mr28000～31000外膜蛋白均能被SphadexG-75分子筛纯化,该类蛋白能够在改良卵黄培养...     

ING4基因对人胃癌细胞SGC-7901生物行为的影响

目的：研究人ING4对人胃癌细胞SGC-7901的影响，探讨其作用机制。方法：将重组腺病毒质粒pAd-ING4用PacI线性化，经脂质体转染QBI-293A细胞，获得重组病毒Ad-ING4。Ad-ING4感染人SGC-7901细胞，RT-PCR及Westernblot分析ING4和p21表达，MTT法检测Ad-ING4对细胞生长的影响，激光共聚焦显微镜检测细胞凋亡。结果：Ad-ING4感染后，SGC-7901细胞中有ING4 mRNA和蛋白质表达，细胞生长受到明显抑制，与野生型SGC-7901细胞相比，p21表达水平增高，细胞凋亡率明显增高，P〈0．05。结论：ING4可通过上调p21表达发挥抑制SGC-7901细胞生长、诱导细胞凋亡的作用。     

空肠弯曲菌外膜蛋白亚单位脂质体佐剂疫苗的免疫原性研究

目的 初步探讨自制的空肠弯曲菌（campylobacter jejuni）亚单位（M,28 000-31 000外膜蛋白）脂质体佐剂疫苗的免疫原性,为该疫苗的临床前研究打下基础。方法 用双向免疫琼脂扩散试验、试管凝集试验、ELISA（间接法）分别检测经GJ疫苗免疫后的新西兰兔血清IgG抗体效价。结果 GJ阴离子组与GJ阳离子组比较,血清IgG A值显著增高（P〈0．01）,与GJ弗氏组无统计学差别（P〉0．1）;CJ阴、阳离子组脂质体疫苗接种剂量在0．50mg／kg时,血清IgGA值最大;CJ阳离子皮下注射组与肌肉注射组IgGA值无统计学差别（P〉0．1）;特异性IgG抗体经6个月动态观察,5个月后抗体效价下降。结论 实验组全程免疫后均有特异性抗体产生;同一剂量的阴离子脂质体疫苗比阳离子脂质体疫苗血清抗体水平显著增高;脂质体疫苗最佳接种剂量为0．50mg／kg,肌肉注射与皮下注射免疫效果无显著差异;特异性抗体高水平维持5、6个月后应加强免疫。