整合素αV介导的细胞信号转导与肿瘤恶性转移和治疗策略的研究进展

整合素是在细胞表面广泛表达的黏附受体的大家族,通过整合素的定位、簇集,介导细胞对细胞外基质(extra-cellular matrix,ECM)的附着,通过改变整合素对配体的亲和力,调节整合素介导的粘附,因而处在细胞运动的中心地位.     

p38 MAPK对PDGF诱导的细胞迁移的调控作用

目的 研究p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)在血小板源性生长因子(PDGF)诱导的细胞迁移中的作用.方法 PDGF刺激小鼠NIH 3T3细胞后,利用免疫印迹法检测p38磷酸化程度的改变情况.利用Transwell细胞迁移系统来观察PDGF对NIH 3T3细胞迁移的诱导作用,以及p38基因敲除对PDGF诱导的细胞迁移的影响.结果 PDGF能显著诱导NIH 3T3细胞迁移(P＜0.001),且在此过程中p38能被磷酸化激活,p38基因敲除能阻断PDGF诱导的细胞迁移(P＜0.001).结论 p38 MAPK参与了PDGF诱导的细胞迁移的调控.     

中国卒中报告2019（中文版）（1）

中国卒中防治正面临巨大挑战。2018年,中国脑血管病的死亡率为149.49/10万,造成了157 万人死亡。脑血管病是我国居民的第三位死亡原因,位列恶性肿瘤和心脏病之后。2013年,卒中年龄 标化患病率和发病率分别为1114.8/10万和246.8/10万人年。根据2017年全球疾病负担研究,1990- 2017年卒中造成的过早死亡损失寿命年（year of life lost,YLL）增加了14.6％,卒中由造成YLL的第三 位原因跃升为第一位;卒中造成的全年龄组伤残调整生命年（disability-adjusted life year,DALY）的 绝对数和百分率也呈持续增长趋势,2017年卒中是造成全年龄组DALY的首位原因。脑血管病的主要 危险因素包括行为危险因素（如吸烟和酗酒）和既往疾病（如高血压、糖尿病、血脂异常和心房颤 动）。卒中存活者中最普遍的危险因素是高血压（63.0％～84.2％）和吸烟（31.7％～47.6％）,心房 颤动的比例相对最低（2.7％～7.4％）。这些主要的危险因素在人群中流行水平也较高,并呈持续 增长的趋势。根据最新的国家流行病学调查数据,我国15岁及以上人群的现在吸烟率为26.6％（现 在吸烟人数为3.08亿）。18岁及以上人群的高血压年龄标化患病率为25.2％;高胆固醇血症的标 化患病率为5.8％;糖尿病标化患病率为10.9％。40岁及以上人群心房颤动的标化患病率为2.31％。 医院质量监测系统（Hospital Quality Monitoring System,HQMS）数据显示,2018年我国1853家三级 医院共计收治3 010 204例卒中住院患者,其中2 466 785例（81.9%）为缺血性卒中（ischemic stroke, IS）,447 609例（14.9%）为脑出血（intracerebral hemorrhage,ICH）,95 810例（3.2%）为蛛网膜下腔 出血（subarachnoid hemorrhage,SAH）。入院患者的平均年龄为66岁,近60%为男性。在IS、ICH和SAH 中,分别有1555例（0.1%）、2774例（0.6%）和1347例（1.4%）为儿童卒中（年龄<18岁）。超过三分之 一（1 063 892例,35.3%）患者的医保类型为城镇居民基本医疗保险,其次是城镇职工基本医疗保 险（699 513例,23.2%）和新型农村合作医疗保险（489 361例,16.3%）。卒中患者的主要危险因素为 高血压（IS：67.4%,ICH：77.2%,SAH：49.1%）,主要并发症是肺炎或肺部感染（IS：10.1%,ICH：31.4%, SAH：25.2%）。卒中住院患者的死亡/非医嘱离院率为8.3%,从IS患者的5.8%到ICH患者的19.5%。住 院时间的中位数（四分位数间距）为10.0（7.0～14.0）d,从IS患者的10.0（7.0～13.0）d到SAH患者的 14.0（8.0～22.0）d。中国卒中中心联盟的数据显示,指南推荐的IS、ICH和SAH患者关键绩效指标执行 的综合评分分别为0.77±0.21、0.72±0.28和0.59±0.32。     

高迁移率族蛋白HMGB2的细胞内定位及移位研究

目的 观察鼠高迁移率族蛋白B2(HMGB2)在真核细胞中的定位和移位情况.方法 提取BALB/c小鼠肝脏组织总RNA,通过RT-PCR扩增得到HMGB2编码序列.然后将该编码序列克隆到带有血凝素(HA)标记的载体pcDNA3-HA上,构建质粒命名为pcDNA3-HA-HMGB2,随后将其转染NIH 3T3细胞.荧光显微镜观察仅转染质粒的细胞和质粒转染与亚砷酸钠刺激30min和1h后细胞内HA-HMGB2融合蛋白的定位及移位情况.结果 重组质粒经酶切、聚合酶链反应(FCR)和测序鉴定证明构建正确,并在NIH 3T3细胞中得到大量表达.荧光显微镜观察发现,FIA-HMGP2蛋白主要分布于细胞核中,经亚砷酸钠刺激后30min,部分细胞中的蛋白从胞核移位到胞质,刺激1h后蛋白则主要分布于胞质中.结论 成功构建带HA标签的HMGB2真核表达载体.该载体能在哺乳动物细胞中有效表达并正确定位、移位,为下一步深入研究HMGB2作用细胞的信号通路提供了一个重要工具.     

甲状腺细胞病理学Bethesda报告系统：单中心2257个甲状腺结节诊断的应用体会

目的总结应用甲状腺细胞病理学Bethesda报告系统（The Bethesda System for Reporting Thyroid Cytopathology,TBSRTC）进行甲状腺细胞学诊断的经验,并对TBSRTC的诊断价值进行评价。方法收集四川大学华西医院病理科2010年1月至2012年12月期间完成甲状腺细胞学TBSRTC分级诊断的2 257个甲状腺结节的病理资料,并计算TBSRTC诊断甲状腺恶性结节的灵敏度、特异度、准确率等诊断价值指标。结果 2 257个甲状腺结节中含Ⅰ级442个,占19.6%;Ⅱ级1 184个,占52.4%;Ⅲ级216个,占9.6%;Ⅳ级38个,占1.7%;Ⅴ级172个,占7.6%;Ⅵ级205个,占9.1%。以TBSRTCⅡ级为诊断良恶性的界点,若不纳入Ⅲ级结节,则TBSRTC分级的灵敏度为93.7%（236/252）,特异度为86.6%（323/373）,准确率为89.4%（559/625）;若将Ⅲ级结节纳入分析,则TBSRTC分级的灵敏度为94.3%（267/283）,特异度为74.9%（323/431）,准确率为82.6%（590/714）。结论 TBSRTC分级在笔者所在医院的应用实践表明其真实性较高,是准确和可靠的甲状腺细胞学分类诊断系统。     

人可溶性晚期糖基化终产物受体的原核表达及活性鉴定

目的构建人可溶性晚期糖基化终产物受体(hsRAGE)His融合蛋白表达载体并在原核细胞表达与纯化。方法PCR扩增hRAGE基因编码区的胞质外段，利用分子克隆技术将其重组于pET-14b载体中。利用酶切、序列分析鉴定克隆正确性转化大肠杆菌BL21(DE)3，用异丙基b—D硫代半乳糖(IPTG)诱导融合蛋白表达。以尿素对获得的包涵体进行处理，用金属螯合亲和层析的方法纯化融合蛋白并进行复性。以Western印迹和ELISA法对融合蛋白的免疫原性及与AGE的结合活性进行鉴定。结果克隆的hsRAGE完全正确．经过表达与纯化．获得了相对分子质量约45000的融合蛋白。纯化得到的变性蛋白经复性后可被相应抗体识别。所得到的hsRAGE具有与AGE相互结合的活性，并能够抑制AGE绣导的内皮细胞NF-κB的表达．结论成功地构建了hsRAGE融合蛋白原核表达载体且获得高效表达．得到大量的复性蛋白；该蛋白具有特异的免疫原性，保持与AGE的结合活性．并能够有效阻断AGE-RAGE相互作用。     

信号肽-FRET荧光蛋白载体的构建及在NIH3T3细胞中的表达

目的构建带TLR4信号肽的增强型青色荧光蛋白(pECFP-C1-SP)和增强型黄色荧光蛋白(pEYFP-C1-SP)的质粒载体,为使用荧光共振能量转移(FRET)技术研究LPS在细胞膜上的受体识别机制提供依据。方法采用点突变技术构建了带TLR4信号肽的载体,用脂质体瞬时转染NIH3T3细胞,观察带信号肽载体和融合蛋白载体在细胞内的表达。结果DNA测序证明所构建的带TLR4信号肽的载体正确;酶切和DNA测序表明融合蛋白载体的构建正确,TLR4信号肽可以使蛋白主要表达在膜上。结论所构建的带信号肽的荧光蛋白载体是正确的,pECFP-C1-SP和pEYFP-C1-SP能够表达在细胞膜上,可有效地应用于膜蛋白相互作用的研究。     

外科学教学中医学生人文素质培养的探索

人文教育与医学教育的整合可以使医学生的医疗技术、社会责任感和人道主义精神同时得到培养.对于外科学教学来说,人文素质培养与医学科学教育的结合非常重要,而实施人文素质教育的方法仍然处于探索阶段.北京大学第一医院根据外科学教学的实际情况,参照国外医学教育的经验,进行了医学生人文素质培养的探索和实践.通过授白大衣仪式、珍爱实验动物教育、手术观摩等一系列多样化的方式,对医学生进行人文素质的培养,取得了较好的效果.     

病毒免疫治疗老年小鼠S_180腹水瘤的研究

用甲型流感病毒ＰＲ８株大剂量注射治疗老年小鼠Ｓ１８０腹水瘤，发现疗效不佳，小鼠生存率为零。为研究疗效不佳的原因，对荷瘤小鼠脾脏巨噬细胞吞噬功能、淋巴细胞总数及ＮＫ细胞活性进行了检测，结果如下。病毒治疗组老年小鼠巨噬细胞吞噬功能与未治疗组无明显差异（Ｐ＞０．０５）；ＮＫ细胞杀伤率为１４％，与对照组相同，而用病毒治疗的青年小鼠ＮＫ细胞杀伤活性明显升高，杀伤率为３４．５％；淋巴细胞总数增长１４．３％，与对照组无明显差别，但明显低于用病毒治疗的青年小鼠５８．８％的增长率（Ｐ＜０．０ｌ）．上述结果表明，病毒免疫治疗老年荷瘤小鼠时，小鼠的免疫监视功能未能被增强，这是造成疗效不佳的重要原因。     

Wnt3a在蛛网膜下腔出血后早期脑损伤中对神经发生的作用

目的探讨Wnt3a在大鼠蛛网膜下腔出血(SAH)后早期脑损伤中对神经发生的作用及其机制。方法将健康雄性SD大鼠70只按随机数字表法分为假手术组、SAH组、Wnt3aⅠ组、Wnt3aⅡ组、Wnt3aⅢ组、Wnt3aⅣ组和DKK-1组。蛛网膜下腔出血的模型通过枕大池自体血注入法建立。应用免疫荧光技术观察各组大鼠海马的神经发生情况,应用蛋白印迹法检测各组大鼠海马中Wnt通路信号分子散乱蛋白-1(Dvl-1)和β-连环蛋白(β-catenin)的表达情况。结果随着Wnt3a剂量升高,各组中BrdU阳性细胞百分率呈上升趋势(P<0.05),各组中Dvl-1与β-catenin的蛋白表达量也呈逐渐升高趋势(P<0.05);给予经典Wnt通路抑制剂DKK-1后,Dvl-1、β-catenin蛋白表达量与阳性细胞百分率均明显下降(P<0.05)。结论在蛛网膜下腔出血后的早期脑损伤中,Wnt3a可能通过经典Wnt信号通路促进神经发生,对中枢神经系统的修复与保护发挥积极作用。