正常人脑脊液和血清SOD—1,TE,Fer,β2—m,SIgA含量与屏障

采用放射免疫分析和原子发射光谱法对56例作下肢手术而无全身性疾病者的脑脊液及血清中SOD-1、Cu、Fe、Zn、Mn、Fer、β_2-m、SIgA含量进行了测定。结果表明,脑脊液中含量低于血清(脑脊液中含量:血清中含量<1)、各种被测物的分子量与脑脊液/血清比值呈负相关,提示具有滤过机制。但是,SOD-1(分子量为32000,脑脊液/血清比值为0.6±0.1)及β_2-m(分子量为15800,脑脊液/血清比重为0.45±0.11),用脉络丛单纯滤过机制不能解释,可能还因滤过液通过脉络膜丛上皮细胞产生分泌性变化所致。     

脂多糖诱导小鼠肠组织ICAM-1表达的变化及p38MAPK在其中的作用

目的:研究脂多糖(LPS)诱导小鼠肠组织细胞间粘附分子-1(ICAM-1)表达的变化及p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)在其中的调控作用。方法:用不同剂量的LPS或LPS加p38MAPK特异性抑制剂SB203580对小鼠进行不同时间的处理后, 分别采用Westernblot和RT-PCR检测ICAM-1蛋白和mRNA表达情况。结果:小鼠肠组织中ICAM-1蛋白和mRNA的表达在LPS剌激后显著高于对照组, LPS剌激后12-36h, ICAM-1表达增加最为显著。LPS剂量在20.0mg/kg时, 对ICAM-1的表达具有最大的剌激作用。SB203580预处理小鼠30min, 可显著抑制LPS诱导的ICAM-1蛋白和mRNA的表达。结论:LPS可诱导小鼠肠组织中ICAM-1蛋白和mRNA的表达增加, 并具有时间和剂量依赖性, p38MAPK信号转导通路可能在内毒素休克小鼠肠组织ICAM-1表达中起重要调节作用, 提示抑制p38MAPK通路可能对内毒素休克时肠损伤的防治有重要的意义。     

应用细菌同源重组法快速构建和制备重组腺病毒

目的：利用大肠杆菌细菌同源重组构建重组腺病毒载体并在293细胞制备高滴度重组病毒。方法：自细胞周期相关激酶真核表达载体pCR31-CCRK中酶切出CCRK基因，亚克隆至带有增强型绿色荧光蛋白（EGFP）表达盒的腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV中，形成转移质粒pAdTrack-CMV-CCRK，采用电穿孔或化学转化法在大肠杆菌BJ5183内与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1同源重组，得到重组腺病毒载体pAd-CCRK。以pAd-CCRK为模板，经DNA测序正确后，用Pac Ⅰ酶切线性化pAd-CCRK，转染293细胞，包装成重组病毒颗粒，荧光显微镜观察转染细胞EGFP的表达，采用PCR的方法对重组腺病毒进行鉴定。将重组病毒上清感染RAW细胞，荧光显微镜下观察感染细胞重组病毒的表达。结果：成功地构建了携带CCRK基因的重组腺病毒载体并制备出高滴度重组病毒，重组病毒能在体外高效表达。结论：应用细菌内同源重组能够快速构建腺病毒载体，可高效制备均一的高滴度重组病毒，为CCRK基因功能的研究奠定了基础.     

FRET的理论基础及应用

2001年,《自然》和《科学》杂志先后公布了人类基因组的工作草图,人类从此进入了功能基因组时代。目前,研究生物大分子,特别是蛋白质的结构、功能、特点及其相互作用已经成为生命科学的工作重点,随着蛋白质研究的进展,一项古老的技术-荧光共振能量转移(fluorescenceresonanceen     

BRAF V600E和TERT启动子突变与甲状腺乳头状癌临床病理特征的关系

  目的  探讨鼠类肉瘤滤过性毒菌致癌同源体B1(BRAF)V600E和端粒酶逆转录酶(TERT)启动子突变与甲状腺乳头状癌(PTC)临床病理特征之间的关系。  方法  采用聚合酶链式反应(PCR)直接测序检测326例PTC患者肿瘤组织的BRAF V600E和TERT启动子的突变情况,并分析其与临床病理特征之间的关系。  结果  BRAFV600E突变率为82.52% (269/326),TERT启动子突变率为3.37%(11/326),其中C228T位点突变9例,C250T位点突变2例,BRAF V600E和TERT启动子同时突变者10例(3.07%)。单因素分析结果显示BRAF V600E基因突变与PTC患者年龄及是否肿瘤复发/远处转移有关(P＜0.05),TERT启动子突变与患者年龄、肿瘤最大径、是否甲状腺腺外侵犯、T分期、AJCC分期及是否肿瘤复发/远处转移有关(P < 0.05)。BRAF V600E和TERT启动子同时突变与患者年龄、肿瘤最大径、是否甲状腺腺外侵犯、T分期及AJCC分期有关(P＜0.05)。  结论  PTC患者肿瘤组织BRAF V600E和TERT启动子同时突变时提示肿瘤侵袭性高。     

LPS刺激对RAW264.7细胞p38蛋白激酶的细胞内定位的影响

目的 探讨p38蛋白激酶信号传导的过程及其在细胞中的特异性作用机制。方法 应用间接荧光标记免疫探针技术及共聚焦激光扫描技术观察单核细胞中p38蛋白激酶的分布及LPS对其分布的影响。结果p38在未受刺激的静息单核细胞及内皮生长因子（EGF）刺激的单核细胞胞浆和胞核中荧光强度均呈弥散性分布;脂多糖（LPS）刺激使细胞核区的荧光强度明显增强,而胞浆区域的荧光强度降低。激酶动力学的研究显示,p38激活先于p38移位。LPS刺激后30 min,p38激酶活性即达到高峰,随后2 h内逐步下降,p38激酶活性呈一过性增高;LPS刺激45 min后,核区荧光强度达到峰值,且在2 h内维持在高水平。结论 单核细胞由LPS激活后,其p38蛋白激酶由胞浆转位到胞核,反应具有一定的特异性;p38移位入核依赖于p38磷酸化活化及由细胞浆移位到细胞核是一系列连续发生的事件。     

p38蛋白激酶不同亚型在RAW264.7细胞中的定位

目的 探讨p38的4种亚型在细胞中的分布以及对外界刺激的反应。方法 应用激光共聚焦显微镜对RAW264.7单核细胞内的4种亚型进行定位观察。结果 p38(、p38(在未受刺激的静息细胞内的荧光强度呈弥散性分布,受脂多糖（LPS）刺激后,细胞核荧光强度明显增强,细胞浆荧光强度降低,提示LPS诱导p38(和p38(磷酸化活化后移位入细胞核。p38(在静息和受LPS刺激后的细胞中均呈散在、弥漫性地分布,提示p38(刺激后无移位现象。静息时,p38(弥散地分布于细胞,刺激后细胞核膜部荧光强度增高,提示受刺激后p38(移位于核膜周围。结论 p38不同亚型在细胞受LPS刺激后移位表现不同,可能与它们在组织和细胞分布的特异性及作用途径有关。     

SETD4敲除对小鼠巨噬细胞功能及免疫细胞分化影响的初步研究#br#

目的　探讨SETD4（SET-domain containing protein 4）基因敲除对小鼠腹腔巨噬细胞（peritoneal macrophages,pMφ）分化成熟、功能的影响以及对小鼠外周血、脾脏免疫细胞分化,胸腺和脾脏发育的影响。 方法　(1)利用流式细胞术检测腹腔灌洗液中pMφ表面CD31分子的表达情况;(2)用液相芯片技术检测和比较SETD4-/-和SETD4+/+小鼠pMφ在受到脂多糖（LPS）刺激后对细胞因子TNF-α、IL-6释放的影响, 流式细胞术检测SETD4基因敲除对巨噬细胞吞噬细菌能力及Transwell检测对巨噬细胞迁移能力的影响;(3)流式细胞术分析和比较两组小鼠外周血及脾脏主要免疫细胞的数量及比例的差异;(4)HE染色对比两组小鼠胸腺和脾脏组织结构的差异。 结果　（1）与SETD4+/+小鼠相比,SETD4-/-小鼠pMφ受到LPS刺激后TNF-α、IL-6的释放明显减少,但是两组小鼠pMφ的比例及分化成熟程度无明显差异;（2）吞噬细菌能力和迁移能力两组无明显差异;（3）两组小鼠外周血及脾脏主要免疫细胞的数量及比例无明显差异;（4）SETD4基因敲除对小鼠胸腺和脾脏的结构无明显影响。 结论　（1）SETD4能促进炎性细胞因子TNF-α、IL-6的产生,但对pMφ的分化成熟及细菌吞噬、迁移能力无明显影响;（2）SETD4基因敲除对小鼠外周血及脾脏免疫细胞的分化没有明显影响,对胸腺和脾脏组织的发育无明显影响。     

心脑血管病社区人群队列研究进展

心脑血管疾病研究中,队列研究（cohort study）具有相对明确的因果顺序、证据强度高的
特点,是了解其疾病史和探索病因的重要方法。针对心脑血管疾病,国际和国内进行了大量的以社区
为基础的队列研究,每个研究的规模、地点、调查方法和终点事件不尽相同,并在心脑血管病的流行
病学方面取得了巨大的成果。本文就国际和国内影响较大的心脑血管社区队列研究进展做一综述。     

CTA辅助的肾动脉分支阻断在腹腔镜保留肾单位手术中的应用价值(附11例报告)

目的:探讨计算机断层扫描血管造影术(CTA)辅助的个体化肾动脉分支阻断在腹腔镜保留肾单位手术中的应用价值。方法:回顾性分析2012年10月~2013年12月行选择性肾动脉分支阻断的后腹腔镜保留肾单位手术11例患者的临床资料:肿瘤直径平均3.0(1.8~4.2)cm,其中1例为孤立肾肾癌。依据患肾CTA,术前制定个体化肾动脉分支阻断方案,其中阻断后支2例,阻断前支5例,阻断肾段动脉2例,阻断副肾动脉2例。术中观察出血量、视野清晰程度、阻断时间,术后观察并发症、肾功能。结果:11例手术过程顺利。术中按照术前制定的方案实施动脉阻断,其中有2例因肾创面渗血较多,改为动脉主干阻断。术中平均出血120(20~220)ml;平均阻断时间21(12~35)min,手术时间85(56~114)min;术后平均引流90(30~150)ml,术后无漏尿发生。术后仅孤立肾肾癌肌酐暂时升高,7天后恢复至术前水平。结论:依据术前CTA,可在腹腔镜保留肾单位手术中制定个体化肾动脉分支阻断方案。此方法可操作性、安全性强,可以最大限度减少患肾缺血范围,保护肾功能。