PRAK不同突变体的构建、表达及细胞内定位的研究

目的:构建p38调节/激活蛋白激酶(PRAK)不同突变体的绿色荧光蛋白融合表达载体,并在真核细胞中表达后,观察这些突变体在细胞内的定位情况.方法:将克隆在绿色荧光蛋白载体pEGFP-C2上的野生型PRAK通过定点突变技术构建其无活性突变体PRAK(T182A)、活性突变体PRAK(T182D)、无激酶活性突变体PRAK(KM)、核定位信号缺失突变体PRAK(NLSm)及核输出信号缺失突变体PRAK(NESm),随后转染NIH3T3细胞,并在荧光显微镜下观察其表达和细胞内定位情况.结果:经测序鉴定各种PRAK不同突变体正确无误后,在NIH3T3细胞中得到高量表达;融合蛋白发出的绿色荧光表明,在静息状态下,野生型PRAK(WT)、PRAK(182A)、PRAK(182D)、PRAK(KM)和PRAK(NESm)主要分布于细胞核内,而PRAK(NLSm)在细胞中均匀分布;在受到NaAsO2刺激后,PRAK(WT)和PRAK(KM)移位出核,而PRAK(182A)、PRAK(182D)和PRAK(NESm)失去了移位出核的能力,PRAK(NLSm)则与刺激前无明显差异.结论:成功构建了PRAK不同突变体的绿色荧光蛋白融合表达载体并在真核细胞中进行了表达,且不同的突变体能够影响PRAK的细胞内定位.     

黄芪桂枝五物汤加味治疗肩周炎30例

黄芪桂校五物汤出自《金匮要略》,本方以黄芪、芍药、桂枝、生姜,大枣组成,具有益气温经,和经通痹之功。笔者自1994年以来,用此方随证加味,治疗肩周炎30例,疗效满意,总结如下。     

影响aSAH预后的因素分析和预后评估

颅内动脉瘤起病隐匿 ,发病以自发性蛛网膜下腔出血为主 ,其预后与多种因素有关。目前对于动脉瘤性蛛网膜下腔出血 (aSAH)预后的预测方法很多 ,但均不精确。多因素分析有助于提高预后预测的准确性     

急性缺血性卒中患者早期抗栓治疗影响因素的多水平模型分析

目的 探索影响急性缺血性卒中（AIS）患者早期抗栓治疗实施的影响因素,为促进早期抗栓治疗提供参考。方法 选取中国国家卒中登记Ⅱ（CNSR Ⅱ）研究中符合早期抗栓治疗条件的≥50岁AIS患者,收集患者及医院信息。对医院和患者因素与是否进行早期抗栓治疗进行单因素分析。以患者水平为水平1,医院水平为水平2,建立两水平logistic回归模型,分析医院和患者因素对是否进行早期抗栓治疗的影响。结果 共纳入16 910例患者,其中有14 332例（84.75%）接受了早期抗栓治疗。单因素分析结果显示,早期抗栓治疗的患者相关因素包括年龄、医保类型、家庭人均月收入、血脂异常病史;医院相关因素包括医院级别、医院所在地区、是否为教学医院、是否有卒中单元、实行单病种质量控制、神经科床位数比例（P<0.05）。多水平模型显示,早期抗栓治疗的患者相关因素包括性别、年龄、家庭人均月收入、高血压病史、入院美国国立卫生研究院卒中量表（NIHSS）评分;医院相关因素包括神经科床位数比例和医院所在地区（P<0.05）。结论 早期抗栓治疗实施与医院医疗水平相关,应对高龄和入院NIHSS评分高的AIS患者进行重点关注。     

TossyⅢ型肩锁关节脱位的手术治疗

自2001年1月～2003年12月分别采用三种内固定方法对27例TossyⅢ型肩锁关节脱位施行手术治疗，术后肩关节功能恢复佳，随访结果满意，回顾总结如下。     

椎动脉型颈椎病的手法治疗

椎动脉型颈椎病多发于 40岁以上的中老年人 ,自 1992年以来 ,采用推拿手法治疗该型颈椎病 15 5例 ,效果满意。1　资料与方法1 1　一般资料本组 15 5例中 ,男 90例 ,女 6 5例。年龄最大 75岁 ,最小36岁 ,以 45岁以上者为最多。病程 2ｄ～ 8年。全部病例都有与颈部活动有关的发作性眩晕等椎 -基底动脉供血不足的临床表现 ,多数病例伴有耳鸣或恶心 ,经颈椎Ｘ线、脑血流图检查确诊为椎动脉型颈椎病。1 2　手法操作患者摘去头部饰物 ,坐方凳 ,术者站患者前面 ,双手拇指交替上推印堂穴 10～ 2 0次 ,并交叉点按晴明、攒竹穴各 2次 ,侧推前额 30～ 5…     

髓样细胞特异性SETD4基因敲除小鼠的构建与鉴定

目的　利用FLP/FRT、Cre/Loxp重组酶系统构建并鉴定髓样细胞特异性SETD4基因敲除小鼠,为深入研究SETD4的生物学功能奠定基础。 方法　将引进的Setd4flox/+小鼠自交,筛选出子代基因型为Setd4flox/flox的小鼠;与FLP小鼠交配,得到Setd4fl/+/flp小鼠;然后分别与C57BL/6小鼠交配去除FLP酶,筛选出Setd4fl/+小鼠;与Lyz2-Cre小鼠交配,筛选出Setd4fl/+/Lyz2-Cre小鼠;将得到的Setd4fl/+和Setd4fl/+/Lyz2-Cre小鼠交配,筛选出Setd4-/-/Lyz2-Cre小鼠,即髓样细胞特异性SETD4基因敲除小鼠。利用PCR技术鉴定小鼠基因型;实时荧光定量PCR技术检测小鼠腹腔巨噬细胞及肝组织中SETD4 的mRNA表达水平验证敲除情况。 结果　髓样细胞特异性SETD4基因敲除小鼠腹腔巨噬细胞中SETD4 mRNA水平较野生型小鼠显著降低;而在肝组织中无显著差异。 结论　利用FLP/FRT、Cre/Loxp系统成功构建髓样细胞特异性SETD4基因敲除小鼠,为后续的功能学研究提供了动物模型。     

远志的化学成分研究Ⅱ

目的 :研究远志的化学成分。方法 :采用多种色谱方法进行分离 ,利用光谱数据结合理化分析进行结构鉴定。结果 :从远志根皮的正丁醇层中分离得到 4个蔗糖酯类化合物 ,分别鉴定为 :sibiricoseA₅(1) ,sibiricoseA₆(2 ) ,tenuifolisideA(3)和 3′ ,6 disinapoylsucrose(4 )。结论 :化合物 1和 2为首次从该植物中分离得到。     

STC2促进人肝癌细胞HepG2增殖和EMT相关的迁移

目的:探讨斯钙素2(STC2)对人肝癌细胞HepG2增殖、迁移以及上皮-间充质转化(EMT)进程的影响。方法:Western blot法检测不同肝癌细胞株及正常肝细胞株的STC2蛋白表达情况;集落形成实验分析STC2对HepG2细胞增殖的影响,同时进一步采用实时荧光定量PCR及Western blot法检测STC2对cyclin D1等增殖相关基因的表达变化;Transwell实验分析STC2对肝癌细胞HepG2迁移能力的影响,采用实时荧光定量PCR和Western blot法检测过表达和沉默STC2的细胞中EMT分子标志物vimentin和E-cadherin的表达情况。结果:与正常肝细胞系相比,STC2蛋白在肝癌细胞中高表达。集落形成实验结果说明STC2促进HepG2细胞的增殖,同时STC2可以显著影响cyclin D1等增殖相关基因的表达。Transwell实验结果说明STC2增强HepG2细胞的迁移能力,同时显著影响肝癌细胞的EMT过程。结论:STC2能够促进肝癌细胞系HepG2的增殖并且影响增殖相关基因的表达,进一步研究表明STC2能够影响肝癌细胞的EMT过程,促进肝癌细胞的迁移。     

使用反距离权重内插法绘制中国1990年代肿瘤分布地图

目的 绘制中国1990年代死因回顾1／10人口抽样调查肿瘤分布地图，展示中国1990年代肿瘤的地理分布和区域性集中趋势。方法 利用1990年代的全国死因抽样调查数据，根据中国1964年人口年龄分布计算标准化死亡率，以中国1990年代数字地图为背景，在Arcview软件支持下，利用反距离权重内插法（IDW）预测非采样地区的死亡率数值，绘制肿瘤死亡分布地图。结果 现已完成全国1990年代肿瘤分布地图绘制，与填充法相比，IDW所绘地图死亡率分布边续且过渡平滑，显示出肿瘤地区分布特点。结论 利用IDW根据抽样区域数据预测其他区域数据，可以实现用抽样数据绘制全国肿瘤分布地图，结果仍可以较为准确地反映出肿瘤分布规律。