蛋白磷酸酶对丝裂原激活的蛋白激酶信号通路的调节

丝裂原活化蛋白激酶是非常重要的生长信号调节蛋白,是细胞内一类丝氨酸 /苏氨酸蛋白激酶。蛋白磷酸酶通过底物的特异性分为酪氨酸特异性磷酸酶、丝氨酸 /苏氨酸特异性磷酸酶、双位点特异性 (苏氨酸 /酪氨酸 )磷酸酶。其中酪氨酸特异性磷酸酶和双位点特异性磷酸酶的非催化性氨基末端介导的特异性蛋白 蛋白相互作用在底物特异性中起关键作用,它们通过与不同底物形成复合物而使蛋白激酶去磷酸化失活,从而对各种蛋白激酶活性进行调节。     

pNTAP-PRAK真核表达载体的构建及其在HEK293细胞中的表达

目的: 构建pNTAP-PRAK真核表达质粒,并建立其稳定表达的HEK293细胞系。方法: 将人的PRAK亚克隆至串联亲和纯化(tandem affinity purification, TAP)载体pNTAP质粒上,构建成重组质粒pNTAP-PRAK,转化该重组质粒至感受态大肠杆菌DH5α,阳性克隆进行PCR、酶切及DNA测序验证正确后,利用PolyFect脂质体介导将其转染至HEK293细胞中,再通过G418筛选建立稳定表达TAP tag-PRAK融合蛋白的HEK293细胞系;利用Western blotting和细胞免疫荧光标记法检测融合蛋白TAP tag-PRAK的表达及细胞内定位情况。结果: 重组真核表达载体构建正确,该重组质粒能在HEK293细胞中稳定表达,表达产物TAP tag-PRAK主要分布在核内。结论: 成功构建pNTAP-PRAK真核表达载体并建立了其稳定表达的HEK293细胞系,TAP标签未对PRAK定位产生明显影响。     

毛冬青叶的化学成分研究

目的 研究毛冬青Ilex pubescens叶的化学成分.方法 采用正相硅胶、反相ODS、Sephadex LH-20等柱色谱及半制备高效液相色谱法进行分离纯化,并通过理化性质与光谱分析法鉴定化合物的结构.结果 从毛冬青叶70％乙醇提取物中分离鉴定了16个化合物,分别为大豆苷元(1)、染料木苷(2)、山柰酚-3-O-β-龙胆二糖苷(3)、山柰酚-3-O-β-刺槐双糖苷(4)、山奈酚-3-O-β-半乳糖苷(5)、槲皮素-3-O-β-龙胆二糖苷(6)、3β,19α-二羟基齐墩果-12-烯-24,28-二酸-28-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(7)、毛冬青皂苷A1(8)、毛冬青素A(9)、2-羟甲基-3-咖啡酰氧-1-丁烯-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(10)、2-咖啡酰甲基-3-羟基-1-丁烯-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(11)、3,4-O-二咖啡酰基奎宁酸(12)、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸(13)、1,5-O-二咖啡酰基奎宁酸(14)、4,5-O-二咖啡酰基奎宁酸(15)、2-苯乙基-O-α-L-阿拉伯糖基(1→6)-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(16).结论 化合物1～6、12～16为首次从该植物中分离得到.     

周剂量紫杉醇对局部晚期食管癌的放疗增敏作用

目的探讨周剂量紫杉醇对局部晚期食管癌的放疗增敏作用。方法将44例不宜手术的局部晚期食管癌患者随机分为放疗增敏组和单纯放疗组,每组22例。2组放疗方法相同,均采用常规设野,常规分割外照射,总剂量60—66Gy。放疗增敏组在放疗同期每周接受1次紫杉醇（40mg·m-2）化疗,连用6周。结果44例患者均可评价疗效,放疗增敏组与单纯放疗组有效率分别为86．4％和63．6％（P〈0．05）;1a局部控制率分别为77．3％和50．0％（P〈0．05）;1a无复发生存率分别为72．7％和45．5％（P〈0．05）;1a生存率分别为81．8％和54．5％（P〈0．05）。2组毒副反应相似,患者均可耐受。结论周剂量紫杉醇对局部晚期食管癌放疗具有明显的增敏作用,能提高患者的局部控制率和生存率,且毒副反应未明显增加。     

鼻咽癌放射治疗后原发肿瘤体积变化的分析

目的观察鼻咽癌放疗后原发肿瘤体积的变化并分析其相关因素。方法回顾性分析46例接受放射治疗的鼻咽癌患者的临床资料,主要包括患者的年龄、性别、病理类型和生长类型、原发肿瘤体积（VO）以及放射治疗结束时残留肿瘤体积（V70）、原发肿瘤最大截面积、T分期和N分期、照射剂量等因素。采用二项分类Logistic回归分析法分析这些因素和放疗50Gy时肿瘤退缩率的关系。结果分析结果显示,肿瘤病理类型和生长类型、T分期、N分期、照射剂量与肿瘤消退有密切关系（P〈0．05）。结论肿瘤体积的变化可较好的反映放疗的效果,明确肿瘤消退的相关因素,可以指导临床治疗,预后判断,提高患者生存率。     

胃癌中HER-2和GST-π的表达及意义

目的：探讨胃癌组织中人表皮生长因子受体-2（HER-2）和胎盘型谷胱甘肽-S-转移酶-π（GST-π）的表达及与临床病理特征的关系。方法：应用免疫组化Envision二步法,检测70例胃癌组织中HER-2和GST-π的表达情况,并结合其临床病理特点进行分析。结果：HER-2和GST-π在胃癌组织中的表达阳性率分别为27.1%（19/70）和58.6%（41/70）。阳性表达与肿瘤分化程度,侵袭深度,有无淋巴结转移及TNM分期有关（P〈0.01,P〈0.05）,而与患者的性别及年龄、肿瘤部位和大小无关（P〉0.05）。HER-2和GST-π两者之间在胃癌组织中的表达呈正相关（P〈0.01）。结论：HER-2和GST-π的表达参与胃癌的生长、侵袭和转移过程。其联合检测有助于胃癌患者靶向药物和化疗药物的选择,也为胃癌的预后判断提供客观的参考指标。     

内毒素休克小鼠肝血管靶向性结合肽的初步研究

目的研究肽CLTTWAPAC与内毒素休克BALB/c小鼠肝血管的靶向性结合作用。方法构建pET14b-SBP和pET14b-SBP-CLTTWAPAC原核表达载体,转化大肠埃希菌BL21(DE3),诱导表达纯化蛋白SBP和SBP-CLTTWAPAC。建立内毒素休克小鼠模型,将9只内毒素休克BALB/c小鼠随机均分为3组:①PBS对照组(经尾静脉先后注射灭活空噬菌体、PBS和噬菌体CLTTWAPAC,间隔5min);②SBP对照组(经尾静脉先后注射灭活空噬菌体、SBP和噬菌体CLTTWAPAC,间隔5min);③SBP-CLT-TWAPAC组(经尾静脉先后注射灭活空噬菌体、SBP-CLTTWAPAC和噬菌体CLTTWAPAC,间隔5min)。小鼠左心室灌流后取肝匀浆称重,行噬菌体计数,计算各组肝噬菌体单位重量滴度。结果 PBS对照组与SBP对照组肝噬菌体单位重量滴度差异无统计学意义(435185±57824pfu/gvs468290±74106pfu/g,P0.05),而SBP-CLTTWAPAC组肝噬菌体单位重量滴度(176059±98506pfu/g)显著降低,与两对照组比较差异均有统计学意义(P0.05)。结论 CLTTWAPAC可竞争性抑制噬菌体CLTTWAPAC与内毒素休克小鼠肝血管的结合,进一步证明CLTTWAPAC靶向性结合于内毒素休克小鼠肝血管。     

具有细胞穿透功能的串联亲和层析分离载体的构建与功能鉴定

目的建立基于抗生蛋白链菌素结合肽(SBP)-钙调蛋白结合肽(CBP)分离标签以及细胞穿透肽转录反式激活因子(TAT)和绿色荧光蛋白(GFP)原核表达系统的、具有细胞穿透功能的原核串联亲和层析分离系统。方法应用PCR方法,以pEG-FP-C2载体为模板扩增EGFP序列,以pNTAP载体为模板扩增CBP-SBP序列,采用退火方法得到TAT片段,采用常规酶切、连接方法将EGFP、CBP-SBP和TAT片段依次克隆入pET14b-MCStop载体中,酶切、PCR和测序鉴定无误后,得到pET14b-CBP-SBP-EGFP-TAT重组质粒。将重组质粒转化BL21(DE3)大肠埃希菌,以IPTG诱导融合蛋白表达,利用Ni2+-NTA亲和层析纯化获得融合蛋白,将不同浓度的融合蛋白加入培养的人肝癌细胞株(HepG2)检测融合蛋白的穿细胞膜功能。结果所构建的pET14b-MCS-CBP-SBP-EGFP-TAT融合蛋白表达载体正确,该载体可在大肠埃希菌内高效表达,用Ni2+-NTA纯化获得了相对分子量约40kD的目的融合蛋白。细胞功能实验结果表明融合蛋白能够穿越细胞膜,且具有浓度依赖性。结论成功构建了pET14b-MCS-CB...     

北京社区妇女宫颈癌认知情况调查

[目的]调查北京社区妇女对肿瘤知识、宫颈癌及HPV的认知情况。[方法]对北京3个社区40岁及以上妇女3000名,采用问卷调查妇女人口统计学信息、肿瘤危险因素认知、宫颈癌和HPV认知等信息。[结果]调查妇女中大部分人对肿瘤患者非常同情,愿意经常去看望。41.4%的妇女知道宫颈癌,不同年龄组之间宫颈癌的知晓率有统计学差异（χ2=37.235,P〈0.0001）。HPV知晓率较低,为16.3%。年龄、文化程度与HPV认知无统计学关联（P〉0.05）。[结论]北京社区女性对HPV的知晓率较低,需要通过社区健康教育提高北京社区女性对HPV认知情况。     

2004-2005年中国居民脑血管病死亡流行病学特征

目的 分析2004-2005年我国居民脑血管病死亡的流行病学特征.方法 人口资料和脑血管病死亡的资料均来自2004-2005年全国第3次死因回顾抽样调查,覆盖我国内地31个省(自治区、直辖市)的160个疾病监测点,共凋查了142 660 482人年.根据调查收集的人口资料和死亡个案数据计算年龄别、性别、疾病别粗死亡率.计算潜在寿命损失年(YPLL).标化死亡率的计算采用2000年人口普查的数据,将每5岁作为1个年龄组进行标化.结果 2004-2005年调查地区脑血管病死亡个案共计有194 932例,其中男性108 414例,女性86 518例;城市63 397例,农村131 535例.脑血管病粗死亡率为136.6/10万,标化死亡率为120.1/10万.男性居民脑血管病粗死亡率为148.6/10万,女性为124.1/10万;标化死亡率分别为144.2/10万和98.2/10万.城市居民脑血管病粗死亡率为132.4/10万,农村为138.8/10万;标化率分别为107.3/10万和127.6/10万.随着年龄的增长,脑血管病的粗死亡率均呈现快速增长的趋势,35～岁人群为10.6/10万(1352/12 712 639),55～岁人群为177.6/10万(10 599/5 967 274),85岁以上组最高,为4051.4/10万(25 430/627 688).其中脑内出血死亡占比重最大,为98 324例,占脑血管病死亡的50.4%;脑梗死其次,为48 305例,占24.8%.脑卒中、出血性卒中、缺血性卒中、未分型卒中死亡个案分别为167 147、105 766、48 305、13 076例,粗死亡率为分别为117.2/10万、74.7/10万、33.9/10万和11.3/10万.我国居民因脑血管病死亡造成的YPLL为535.5人年/10万.结论 2004-2005年我国男性脑血管病死亡率高于女性,农村高于城市;脑血管病死亡率随年龄的增长而呈现快速升高的趋势;脑内出血是脑血管病死亡的主要原因.